魏 巍 韓 捷

(余姚市人民醫(yī)院風(fēng)濕科，浙江 余姚 315400)

CD4+CD25+調(diào)節(jié)性 T 細(xì)胞(regulatory T cell，Tregs)是一類存在于動(dòng)物和人類體內(nèi)的具有抑制功能的天然Tregs，以調(diào)節(jié)自身T細(xì)胞反應(yīng)為主要功能，在防止自身免疫性疾病的發(fā)生、維持自身免疫耐受等方面發(fā)揮著不可替代的作用〔1〕。類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)是一種以關(guān)節(jié)局部病變?yōu)橹鞯淖陨砻庖咝约膊?，T細(xì)胞功能紊亂是其發(fā)病的重要因素之一〔2〕。在RA慢性滑膜炎的發(fā)生過程中存在CD4+CD25+Tregs改變，而該類細(xì)胞的下降可能與趨化因子受體有關(guān)。趨化因子受體是一類具有化學(xué)趨化作用的細(xì)胞因子。在RA中，趨化因子受體主要由滑膜的巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，可對(duì)中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞等產(chǎn)生趨化作用;此外，趨化因子受體還與RA血管炎發(fā)生有關(guān)。CD4+CD25+Tregs上趨化因子受體表達(dá)與RA的相關(guān)性已引起廣泛關(guān)注。以下就CD4+CD25+Tregs上趨化因子受體表達(dá)研究進(jìn)展及其與RA關(guān)系作一綜述。

1 CD4+CD25+Tregs特性

早在20世紀(jì)70年代有人描述了具有抑制活性的T細(xì)胞亞群并將其命名為抑制性T細(xì)胞，但當(dāng)時(shí)這群細(xì)胞和其分泌的細(xì)胞因子由于缺乏讓人信服的證據(jù)而被擱置。1995年，日本學(xué)者Sakaguchi1做了一個(gè)創(chuàng)新性研究，將占小鼠外周CD4+T細(xì)胞5%～10%的CD4+CD25+T細(xì)胞去除后產(chǎn)生各種自身免疫病，而將CD4+CD25+T細(xì)胞和CD4單陽性T細(xì)胞共同過繼轉(zhuǎn)移，則能預(yù)防自身免疫病發(fā)生〔3〕。這一現(xiàn)象引起了人們對(duì)CD4+CD25+Tregs的廣泛興趣。有研究發(fā)現(xiàn)，外周初始T細(xì)胞在一定條件下也可以向CD4+CD25+Tregs轉(zhuǎn)化，如抗原可以通過與T細(xì)胞受體(TCR)的相互作用，誘導(dǎo)叉頭翼狀轉(zhuǎn)錄因子(Foxp3)表達(dá)，使其向 CD4+CD25+Tregs轉(zhuǎn)化〔4〕。根據(jù) CD4+CD25+Tregs來源的不同將其分為固有性和適應(yīng)性CD4+CD25+Tregs。固有CD4+CD25+Tregs主要是指那些在胸腺發(fā)育成熟后進(jìn)入外周淋巴組織的CD4+CD25+Tregs，在預(yù)防病理性自身免疫反應(yīng)方面起作用，T細(xì)胞在胸腺分化過程中選擇的特殊細(xì)胞亞群逃避了克隆清除，發(fā)生胸腺逃逸。適應(yīng)性CD4+CD25+Tregs是由成熟T細(xì)胞在外周淋巴組織中接觸特異性抗原或免疫抑制因子的作用下活化而形成的。

CD4+CD25+Tregs的免疫抑制作用主要是抑制自身反應(yīng)性T細(xì)胞以維持自身免疫平衡。因此，可以認(rèn)為CD4+CD25+Tregs是一類特定亞群CD4+細(xì)胞，屬于“職業(yè)抑制性T細(xì)胞”。CD4+CD25+Tregs具有抗原特異性，可被多克隆激活劑和自身抗原激活，一旦被激活其抑制活性是非特異性的，不再需要抗原，也不需要通過T細(xì)胞受體(TCR)重新活化。且這種免疫抑制沒有主要組織相容性復(fù)合體(MHC)限制性，能抑制同種同型或同種異型T細(xì)胞增殖。這些結(jié)果提示CD4+CD25+Tregs在免疫性疾病方面發(fā)揮重要作用〔5〕。CD4+CD25+Tregs在調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)和耐受間平衡，維持機(jī)體穩(wěn)定中起十分重要的作用。CD4+CD25+Tregs在不同種屬呈進(jìn)化保守性，人與小鼠及大鼠CD4+CD25+Tregs不僅有類似表型和分布，且均具有在體外抑制T細(xì)胞增殖和(或)維持自身免疫耐受的作用〔5～7〕。

2 趨化因子受體與CD4+CD25+Tregs

趨化因子受體是一類具有趨化作用的分泌型小分子蛋白(8～10 kD)，通過與靶細(xì)胞膜相應(yīng)的趨化因子受體結(jié)合發(fā)揮作用。根據(jù)多肽鏈一級(jí)結(jié)構(gòu)中N末端CY殘基和其他氨基酸的排列位置趨化因子受體超家族可以分為4個(gè)亞類，即CXC類、CC類、C類、CX3C類。趨化因子受體受體也相應(yīng)地分為CXCR、CCR、CR及CX3CR四型。趨化因子受體與受體結(jié)合后在調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞定向移動(dòng)、細(xì)胞生長(zhǎng)、發(fā)育、分化、凋亡、歸巢、免疫應(yīng)答及調(diào)節(jié)作用等眾多生理、病理過程中起了非常重要的作用〔8，9〕。趨化因子受體與相應(yīng)受體結(jié)合可以趨化淋巴細(xì)胞聚集特定的組織，導(dǎo)致靶細(xì)胞受損。趨化因子受體可能調(diào)節(jié)CD4+CD25+Tregs分化發(fā)育和功能維持。趨化因子受體在CD4+CD25+Tregs上的表達(dá)與其活化有關(guān)，以及誘導(dǎo)活化影響CD4+CD25+Tregs趨化特性。趨化因子受體在CD4+CD25+Tregs組成性表達(dá)是該細(xì)胞發(fā)揮功能的前提，對(duì)維持機(jī)體的自穩(wěn)狀態(tài)具有重要意義〔10〕。CD4+CD25+Tregs特征表達(dá) CCR5、CCR3、CCR4、CCR8、CCR6等趨化因子受體，CCR5趨化炎癥細(xì)胞到達(dá)病變組織，并分泌多種趨化因子受體以募集更多淋巴細(xì)胞，引起炎癥反應(yīng);CCR3、CCR4、CCR8募集淋巴細(xì)胞進(jìn)入損傷組織，參與炎癥反應(yīng)。CCR6對(duì)樹突細(xì)胞在機(jī)體內(nèi)的運(yùn)行起主要作用與其血管翳形成有關(guān)。在ConA刺激后Tregs數(shù)量明顯增加，其表面趨化因子受體表達(dá)增高，其細(xì)胞上受體表達(dá)增高導(dǎo)致趨化作用去增強(qiáng)〔11〕。研究者們利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)選擇性敲除對(duì)CD4+CD25+Tregs起主要趨化作用的趨化因子受體如CCR4、CCR6，CCR7等，可見 CD4+CD25+Tregs的數(shù)量明顯減少。Tregs上趨化因子受體表達(dá)研究主要集中在腫瘤的研究，研究者們利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)選擇性敲除對(duì)Tregs起主要趨化作用的趨化因子受體如CCR4、CCR6，可見腫瘤部位Tregs數(shù)量明顯減少。提示敲除趨化因子受體可以改變Tregs進(jìn)入腫瘤微環(huán)境中的能力〔12〕。在霍奇金淋巴瘤中高表達(dá)CCL17和CCL22，可優(yōu)先趨化表達(dá)趨化因子受體CCR4的Th2細(xì)胞和Tregs，從而產(chǎn)生抑制腫瘤的免疫環(huán)境〔13〕。乳腺腫瘤患者中也可見大量Tregs浸潤(rùn)，其主要原因是Tregs表達(dá)大量CCR4，從而遷移至CCR4配體處，通過募集作用聚集在腫瘤局部〔14〕。胃腸道腫瘤患者中可局部表達(dá)CCL17和CCL22，與Tregs呈正相關(guān)，提示腫瘤局部大量Tregs浸潤(rùn)與CCL17、CCL22表達(dá)增加有關(guān)〔15〕。在惡性胸腔積液和腫瘤性腦膜炎患者的腦脊液中CCL22水平均較外周血升高，且CD4+CD25+T淋巴細(xì)胞表面CCR4受體表達(dá)上調(diào)，與 CCR4/CCL22趨化通路密切相關(guān)〔16，17〕。哮喘患者肺泡灌洗液中Tregs明顯減少，通過研究發(fā)現(xiàn)，在哮喘炎癥局部，缺乏趨化因子受體產(chǎn)生，從而導(dǎo)致Tregs無法趨化至氣道發(fā)揮作用，CCR4/CCL22趨化信號(hào)通路功能異常導(dǎo)致Tregs趨化活性減弱參與哮喘發(fā)病〔18〕。系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者與健康對(duì)照組相比Tregs和CCR4(+)Tregs(+)明顯下降。CCR4(+)Tregs(+)與C(3)水平呈正相關(guān)。Tregs(+)對(duì)CCL17和CCL22趨化活性明顯降低。雖然趨化因子受體在CD4+CD25+Tregs發(fā)生發(fā)育和功能發(fā)揮等方面所起的作用還有待研究，但充分表明趨化因子受體是控制Tregs數(shù)量的關(guān)鍵因素。

3 RA患者CD4+CD25+Tregs上趨化因子受體變化

RA是一種以多關(guān)節(jié)炎為主要表現(xiàn)的自身免疫病，其主要發(fā)病機(jī)制是T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)異常〔19〕。在RA慢性滑膜炎的發(fā)生過程中，大量炎性細(xì)胞(包括Th1淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞等)從外周血遷移、聚集在關(guān)節(jié)滑膜組織，并產(chǎn)生多種炎性介質(zhì)，包括各類細(xì)胞因子、基質(zhì)降解酶等，從而造成滑膜組織破壞;趨化因子受體在炎性細(xì)胞遷移、浸潤(rùn)過程中則起重要作用。此外，趨化因子受體還與RA血管炎發(fā)生有關(guān)。CXC亞族趨化性細(xì)胞因子如 IL28/CXCL8、NAP22/CXCL7、ENA278/CX2、CL5促進(jìn)血管生成，而CC亞族MCP21/CCL2也可以介導(dǎo)血管生成〔20〕。

在RA患者外周血CD4+CD25+Tregs研究中提示CD4+CD25+Tregs數(shù)量顯著下降。尤其在疾病活動(dòng)期，CD4+CD25+Tregs數(shù)量明顯下降，提示CD4+CD25+Tregs數(shù)量減少可能是RA自身免疫反應(yīng)亢進(jìn)不能控制的原因之一。Lawson等〔21〕發(fā)現(xiàn)未經(jīng)治療的早期RA患者，其外周血CD4+CD25+Tregs數(shù)量較正常人下降，而治療后病情控制良好的患者，CD4+CD25+Tregs與正常人相比則無明顯差別，說明RA病程及治療情況對(duì)CD4+CD25+Tregs確實(shí)存在影響。吳鳳霞等〔22〕發(fā)現(xiàn)RA活動(dòng)期患者外周血CD4+CD25+Tregs數(shù)量低于健康志愿者，活動(dòng)期患者Tregs占CD4+T淋巴細(xì)胞的百分比為(2.75±1.01)%，明顯低于健康志愿者(4.18±0.89)%，提示活動(dòng)期 RA患者CD4+CD25+Tregs數(shù)量明顯下降。

對(duì)于趨化因子受體參與RA發(fā)病機(jī)制的研究已有多篇報(bào)道，朱平等〔23〕發(fā)現(xiàn)RA患者滑液中重組人巨噬細(xì)胞炎性蛋白-1β(MIP-1β)顯著升高，認(rèn)為 MIP-1β是趨化表達(dá) CCR5的 Thl細(xì)胞向關(guān)節(jié)內(nèi)移動(dòng)的重要原因;Haringman等〔24〕臨床試驗(yàn)證實(shí)，口服CCR1阻滯劑，可以改善RA病情。調(diào)節(jié)性趨化性細(xì)胞因子可能在RA炎癥性滑膜炎的起病、發(fā)展及持續(xù)階段均起著重要作用，但是目前這方面的研究不多。楊娉婷等〔25〕結(jié)果表明RA患者外周血CD4+CCR4+T細(xì)胞百分?jǐn)?shù)明顯增高，說明CCR4在外周血CD4+T細(xì)胞定向遷移至病變關(guān)節(jié)過程中可能發(fā)揮重要作用。Kenneth等〔26〕在通過用流式細(xì)胞儀方法研究22例RA患者CD4+Tregs上CCR6功能中發(fā)現(xiàn)，RA患者關(guān)節(jié)液及外周血CD4+Tregs上CCR6表達(dá)均高于健康對(duì)照組，考慮與RA早期的炎癥反應(yīng)有關(guān)。

RA中Tregs上趨化因子受體的研究很少，僅Jiao等〔27〕通過用流式細(xì)胞儀方法研究11例活動(dòng)性RA患者發(fā)現(xiàn)RA患者滑液中 CD4+CD25+Tregs表達(dá) CCR4表達(dá)下降，在滑液中CD4+CD25+Tregs上CCR4表達(dá)下降，原因可能受各種炎性細(xì)胞因子影響而表達(dá)活性下降。目前尚未見對(duì)Tregs上其他趨化因子受體及受體研究的報(bào)道，故深入研究RA患者Tregs上趨化因子受體的變化及意義，將有助于闡明RA發(fā)病機(jī)制，并為應(yīng)用以趨化因子受體為靶點(diǎn)的RA的治療提供理論依據(jù)。

綜上，趨化因子受體在RA患者CD4+CD25+Tregs減少中所起重要作用，CD4+CD25+Tregs數(shù)量減少導(dǎo)致與靶細(xì)胞直接接觸從而影響B(tài)細(xì)胞、殺傷性T細(xì)胞及NK等細(xì)胞活性，造成抗體生成減少、部分細(xì)胞因子水平下降等免疫功能障礙，其數(shù)量或功能異常均可能與RA疾病發(fā)生有密切關(guān)聯(lián)，但其對(duì)RA具體致病機(jī)制有待深入研究。

1 Bluestone JA，Abbas AK.Natural versus adaptive regulatory T cells〔J〕.Net Rev Immunol，2003;3:253-7.

2 Derbinski J，Schulte A，Kyewski B，et al.Promiscuous gene expression in medullary thymic epithelial cells mirrors the peripheral self〔J〕.Nature Immunol，2001;2:1032-9.

3 Hori S，Nomu T，Sakaguchi S.Control of regulatory T cell development and function of CD4+CD25+regulatory T cell〔J〕.Nat Immunol，2003;4:330-6.

4 Shevach EM，MuHugh RS，Piccirillo CA，et al.Control of T-cell activation by CD4+CD25+suppressor T cells〔J〕.Immunol Rev，2001;182:58-67.

5 Sakaguchi S，Sskauguchi N，Asano M，et al.Immunologic self-tolerance maintained by activated T-cell expressing IL-2 by receptor a-chains(CD25).Break down of single mechanism of self-tolerance causes various autoimmune diseases〔J〕.J Immunol Rev，1995;155:1151-64.

6 Asano M，Toda M，Sakaguchi N，et al.Autoimmune disease as a consequence developmental abnormality of a T cell subpopulation〔J〕.J Exp Med，1996;184:387-96.

7 Suri-Pyer E，Amar AZ，Thornton AM，et al.CD4+CD25+immunoregulatory T cells inhibit both the induction and defector function of autoreactive T cella and represent a unique lineage of immunoregulatory cells〔J〕.J Immunol，1998;160:1212-8.

8 Gregersen PK.Genetics of rheumatoid arthritis:confronting complexity〔J〕.Arthritis Res，1999;1:37-44.

9 Levings MK，Sangregorio R，Roncarolo MG.Human CD4+CD25+regulatory T cells suppress naive and memory T cell proliferation and can be expanded in vitro without loss of function〔J〕.JExp Med，2001;193:1295-302.

10 Cao D，Malmstrom V，Baecher Allan C，et al.Isolation and functional characterization of regulatory CD25 bright CD4+T cells from the target organ of patients with rheumatoid arthritis〔J〕.Eur J Immunol，2003;33:215-23.

11 Kang S，Xie J，Ma S，et al.Targeted knock down of CCL22 and CCL17 by siRNA during DC differentiation and maturation affects the recruitment of T subsets〔J〕.Immunobiology，2009;215:153-62.

12 Di Stasi A，De Angelis B，Rooney CM，et al.T lymphocytes coexpressing CCR4 and a chimeric antigen receptor targeting CD30 have improved homing and antitumor activity in a Hodgkin tumor model〔J〕.Blood，2009;113:6392-402.

13 Gobert M，Treilleux I，Bendriss-Vermare N，et al.Regulatory T cells recruited through CCL22/CCR4 are selectively activated in lymphoid infiltrates surrounding primary breast tumors and lead to an adverse clinical outcome〔J〕.Cancer Res，2009;69:2000-9.

14 Mizukami Y，Kono K，Kawaguchi Y，et al.CCL17 and CCL22 chemokines within tumor microenvironment are related to accumulation of Foxp3+regulatory T cells in gastric cancer〔J〕.Int J Cancer，2008;122:2286-93.

15 Qin XJ，Shi HZ，Deng JM，et al.CCL22 recruits CD4-positive CD25-positive regulatory T cells into malignant pleural effusion〔J〕.Clin Cancer Res，2009;15:2231-7.

16 Haas J，Schopp L，Storch-Hagenlocher B，et al.Specific recruitment of regulatory T cells into the CSF in lymphomatous and carcinomatous meningitis〔J〕.Blood，2008;111:761-6.

17 Nguyen KD，Vanichsarn C，F(xiàn)ohner A，et al.Selective deregulation in chemokine signaling pathways of CD4+CD25(hi)CD127(lo)/(-)regulatory T cells in human allergic asthma〔J〕.J Allergy Clin Immunol，2009;123:933-9.

18 Leipe J，Skapenko A，Lipsky PE，et al.Regulatory T cells in rheumatoid arthritis〔J〕.Arthritis Res，2005;7:93-9.

19 Morgan ME，F(xiàn)lierman R，van Duivenvoorde LM，et al.Effective treatment of collagen induced arthritis by adoptive transfer of CD4+CD25+regulatory T cells〔J〕.Arthritis Rheum，2005;52:2212-21.

20 Van Ameelsfort JM，Jacobe KM，et al.CD4+CD25+regulatory T cells in rheumatoid arthritis differences in the presence and function between peripheral blood and synovial fluid〔J〕.Arthritis Rheum，2004;50:2775-85.

21 Lawson CA，Brown AK，Bejarano V，et al.Early rheumatoid arthritis is associated with a deficit in the CD4+CD25+regulatory T cells population in peripheral blood〔J〕.Rheumatology，2006;45:1210-7.

22 吳鳳霞，袁國華.趨化因子受體及受體研究進(jìn)展〔J〕.川北醫(yī)學(xué)院報(bào)，2008;23(3):297-300.

23 朱 平，王彥宏，樊春梅，等.趨化因子受體受體CCR5及其配體在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者滑液及滑膜中表達(dá)〔J〕.中華醫(yī)學(xué)雜志，2001;81(17):1038-41.

24 Haringman JJ，Kraan MC，Smeets TJM，et al.Chemokine blockade and chronic inflammatory disease:proof of concept in patient with rheumatoid arthritis〔J〕.Annals Rheumatic Dis，2003;62:715-21.

25 楊娉婷，沈 輝，趙麗娟，等.趨化因子受體受體CCR4在活動(dòng)期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者外周血CD4+T細(xì)胞表達(dá)的研究〔J〕.中華風(fēng)濕病雜志，2005;9(7):401-4.

26 Kenneth J，Rottman JB，Jeffrey H，et al.Differential expression of chemokine receptors on peripheral blood，synovial fluid and synovial tissue monocytes in rheumatoid arthritis〔J〕.Arthritis Rheum，2001;44:1022-32.

27 Jiao Z，Wang W，Jia R，et al.Accumulation of Fox P3-expressing CD4+CD25+T cells with distinct chemokine receptors in synovial fluid of patients with active rheumatoid arthritis〔J〕.Scand J Rheumatol，2007;36:428-33.