田 慧，王亞靜，孫士真，王艷明，彭淑娟，高 旭

（天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津市現(xiàn)代中藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室-省部共建國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，天津 300193）

芒果苷磷脂復(fù)合物的制備工藝研究*

田 慧，王亞靜，孫士真，王艷明，彭淑娟，高 旭

（天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津市現(xiàn)代中藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室-省部共建國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，天津 300193）

[目的]研究制備芒果苷磷脂復(fù)合物的最佳制備工藝。[方法]以芒果苷與磷脂的復(fù)合率為評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，采用單因素考察和正交實(shí)驗(yàn)篩選工藝參數(shù)。[結(jié)果]確定了制備芒果苷磷脂復(fù)合物的最佳工藝條件：以甲醇-丙酮為反應(yīng)溶劑，芒果苷質(zhì)量濃度為0.25 g/L，物料比摩爾比為1∶1，反應(yīng)溫度為40℃，反應(yīng)時(shí)間為2 h。[結(jié)論]優(yōu)化工藝可制得復(fù)合率較高的芒果苷磷脂復(fù)合物，簡單可行。

芒果苷；磷脂復(fù)合物；制備工藝

芒果苷（Mangiferin），又名芒果素、知母寧，分子式為C19H18O11，廣泛存在于百合科植物知母，漆樹科芒果葉中。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，芒果苷具有廣泛的藥理活性，除了傳統(tǒng)意義上的保肝利膽、抗氧化、止咳作用等，隨著研究的不斷深入，其在抗白血病、抗腫瘤、治療糖尿病等[1-3]方面的優(yōu)勢日益明顯，具有良好的應(yīng)用前景。由于芒果苷是一種二苯吡喃酮的碳糖苷，屬于碳苷類，溶解度很差，難溶于水，也不溶于有機(jī)溶劑，導(dǎo)致生物利用度低，并限制了其臨床應(yīng)用及新藥的開發(fā)[4-5]。據(jù)報(bào)道，大多數(shù)脂水均難溶的藥物與磷脂制成磷脂復(fù)合物后，原藥物的親水性和親脂性可得到不同程度的提高，從而增強(qiáng)藥物在胃腸道中的吸收，提高口服生物利用度[6-7]。目前，國內(nèi)尚未發(fā)現(xiàn)有關(guān)芒果苷磷脂復(fù)合物的報(bào)道，為開發(fā)芒果苷新制劑，本實(shí)驗(yàn)對芒果苷磷脂復(fù)合物的制備工藝進(jìn)行了研究。

1 儀器與試藥

智能磁力加熱攪拌器SZCL-4B（鞏義予華儀器有限公司）；ALC-1104電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；循環(huán)水式真空泵旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)RE52C（上海亞榮生化儀器廠）；真空干燥箱DEF-6090（上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司）；KQ-300B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；Jade DSC（美國Perkin-Elmer）。芒果苷原料（廣西昌洲天然產(chǎn)物開發(fā)有限公司，批號：090924，90%）；磷脂 PC-98T（上海艾韋特醫(yī)藥科技有限公司，批號：EL-10001，供注射用，其中磷脂酰膽堿的含量為98%）；芒果苷對照品（天津中新藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，批號：110505-11純度>98%）；甲醇、二氯甲烷、正己烷、丙酮均為分析純（天津康科德科技有限公司）；水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 芒果苷磷脂復(fù)合物制備工藝及評價(jià)指標(biāo)的確定 將一定量的芒果苷W1和磷脂在一定條件下反應(yīng)后，減壓除去反應(yīng)溶劑；再利用藥物不溶于二氯甲烷，而磷脂和磷脂復(fù)合物均易溶于二氯甲烷的特性，再加入適量的二氯甲烷，充分溶解其中的磷脂及復(fù)合物，過濾，收集沉淀并稱質(zhì)量W2。取濾液減壓干燥過夜，即得黃色黏狀固體。計(jì)算藥物與磷脂的復(fù)合率（C），公式如下：C=（W1-W2）/W1×100%。通過比較復(fù)合率確定合適的工藝條件。

2.2 制備工藝的單因素影響實(shí)驗(yàn)

2.2.1 反應(yīng)溶劑的選擇 芒果苷在有機(jī)溶劑中的溶解度測定：取過量的芒果苷，分別加入甲醇、無水乙醇、丙酮、乙酸乙酯、四氫呋喃、二氯甲烷、水，超聲（40℃，40 KHz）6 h，靜置過夜，取上清液均 1 mL，置10 mL量瓶中，揮干溶劑，用甲醇復(fù)溶，測定芒果苷的濃度。結(jié)果在各溶劑中的濃度大小順序?yàn)椋杭状?無水乙醇>水>四氫呋喃>丙酮>二氯甲烷>乙酸乙酯，所以選擇甲醇作為芒果苷的溶劑。磷脂不溶于極性溶劑，可溶于非極性溶劑，經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)選熱丙酮作為磷脂的溶劑。

2.2.2 反應(yīng)時(shí)間的影響 取芒果苷10 mg，加甲醇20 mL的溶液，超聲（40℃，40 KHz）30 min使其溶解；設(shè)定芒果苷與磷脂的投料摩爾比為1∶1（以磷脂平均分子量780計(jì)算，折合質(zhì)量比為1∶1.66），稱取磷脂16.6 mg，加丙酮20 mL，反應(yīng)溫度為40℃，反應(yīng)時(shí)間為 0.5、1、1.5、2、3 h，復(fù)合率分別為 96.02%、97.98%、98.98%、99.00%、99.05%，隨著反應(yīng)時(shí)間的延長，復(fù)合率逐漸增大，至2 h時(shí)，已接近99%，再延長時(shí)間對藥物的復(fù)合率的提高影響不大，故反應(yīng)時(shí)間選擇2 h。

2.2.3 反應(yīng)溫度的影響 其他條件同“2.2.2”，分別于30、40、50、60℃下考察芒果苷與磷脂的復(fù)合率，分別為95.37%、94.69%、99.02%、97.54%，反應(yīng)溫度對藥物的復(fù)合率有較大影響，需進(jìn)一步考察。

2.2.4 反應(yīng)物濃度的影響 其他條件同“2.2.2”，考察反應(yīng)物濃度分別（芒果苷：溶劑體積）為0.16、0.25、0.33 g/L時(shí)，復(fù)合率分別為98.88%、94.08%、91.56%，反應(yīng)物濃度的大小對復(fù)合率有一定影響，隨著反應(yīng)物濃度的增大，復(fù)合率逐漸降低。

2.2.5 芒果苷與磷脂的物料比例對復(fù)合率的影響其他條件同“2.2.2”，考察芒果苷與磷脂的不同物料比的復(fù)合率，芒果苷：磷脂（mol/mol）分別為 2∶1、1∶1、1∶2、1∶3 時(shí)的復(fù)合率分別為 92.01%、96.03%、99.00%、99.47%，芒果苷與磷脂的物料比對復(fù)合率有較大影響。

2.3 制備工藝的正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn) 通過單因素考察得知，芒果苷磷脂復(fù)合物的形成受芒果苷與磷脂的物料比（A）、反應(yīng)物濃度（B）、反應(yīng)溫度（C）的影響較為顯著，因此選定以這3個影響因素的3個水平進(jìn)行正交設(shè)計(jì)L9（34）見表1，安排實(shí)驗(yàn)見表2，結(jié)果與方差分析見表3。

方差分析結(jié)果表明，因素A對芒果苷磷脂復(fù)合物的復(fù)合率有顯著影響，而因素B與因素C影響不明顯。由正交實(shí)驗(yàn)得出制備芒果苷磷脂復(fù)合物的最優(yōu)水平為A2B2C1，即反應(yīng)物濃度為0.25 g/L，物料比為1∶1，反應(yīng)溫度為40℃。

2.4 工藝驗(yàn)證 根據(jù)單因素考察和正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的結(jié)果，確定工藝如下：取芒果苷10 mg，加甲醇20 mL的溶液，超聲（40℃，40 KHz）30 min使其溶解；稱取磷脂16.6 mg，加丙酮20 mL，全溶后滴加至芒果苷甲醇溶液中，于40℃水浴攪拌2 h，蒸發(fā)除去溶劑，用正己烷洗滌除去過量的磷脂，即得純度較高的芒果苷磷脂復(fù)合物。制備3批樣品，經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證藥物復(fù)合率平均值為99.83%±0.14%。

表1 因素與水平表Tab.1 Factors and levels

表2 正交設(shè)計(jì)結(jié)果Tab.2Result of L9（34）orthogonal test

表3 方差分析表Tab.3 Analysis of ANOVA

2.5 芒果苷磷脂復(fù)合物的DSC驗(yàn)證 測定條件：在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，升溫速率為10℃/min，溫程為30～350℃，三氧化二鋁（Al2O3）為參比。分別測定芒果苷、磷脂、芒果苷磷脂復(fù)合物、及物理混合物的相變溫度。結(jié)果芒果苷的吸熱峰在272℃，磷脂分別在148.9、157.2、164.3℃出現(xiàn)3個特征吸熱峰。兩者的物理混合物吸熱峰是兩者的疊加，而形成復(fù)合物后，芒果苷的熔點(diǎn)峰消失。說明芒果苷與磷脂形成了新的復(fù)合物。

3 討論

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，磷脂易溶于脂肪族和芳香族碳?xì)浠衔锛胞u代烴或植物油等非極性溶劑[8]。根據(jù)化學(xué)反應(yīng)一般在溶液狀態(tài)下較易進(jìn)行的原則，實(shí)驗(yàn)曾采用二氯甲烷溶解磷脂，但該法制備復(fù)合率較低。二氯甲烷沸點(diǎn)較低（39.8℃），易揮發(fā)需要回流，有研究認(rèn)為回流期間易帶入水分可能是致其復(fù)合率偏低的原因[9]。經(jīng)過篩選發(fā)現(xiàn)磷脂在丙酮中加熱時(shí)溶解較快，且芒果苷在甲醇-丙酮組成的溶劑體系中不析出，復(fù)合率較高，所以選擇甲醇-丙酮作為反應(yīng)溶劑。由正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，芒果苷與磷脂的物料比及反應(yīng)物濃度是制備工藝中的主要影響因素，隨著磷脂比例的提高，藥物的復(fù)合率逐漸增大，也說明一般反應(yīng)中加大一方反應(yīng)物的量，可促進(jìn)反應(yīng)向正方向進(jìn)行[10]。但磷脂用量過大，生成的芒果苷磷脂復(fù)合物黏性越大，最終確定物料比為1∶1，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[11]。

[1] 姚奕斌，彭志剛，劉振芳，等.芒果苷對白血病HL-60細(xì)胞周期及 CDC2/CyclinB1 表達(dá)的影響[J].中藥材，2010，33（1）：81－85.

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Study on preparation method of mangiferin phospholipid complex

TIAN Hui,WANG Ya-jing,SUN Shi-zhen,WANG Yan-ming,PENG Shu-juan,GAO Xu
（Tianjin University of TCM,Tianjin State Key Laboratory of Modern Chinese Medicine,Tianjin 300193,China）

[Objective]To determine the best technology for preparing Mangiferin phospholipids complex.[Methods]The compounding rate of mangiferin and phospholipid was investigated with mono-agent investigation and orthogonal design test to analyze the technological parameters.[Results]The best conditions for preparing mangiferin phospholipid complex were as follows:methanol and acetone were used as reaction solvent,concentration of mangiferin in solvent was 0.25 g/L,molar ratio of mangiferin and phospholipid was 1∶1,react was performed for 2.0 hr at 40℃.[Conclusion]The optimized preparing technology can get mangiferin phospholipid complex with a high compounding rate.The technology is easy and feasible.

mangiferin;phospholipid complex;preparation method

R283.3

A

1672-1519（2012）01-0083-03

天津市高等學(xué)校科技發(fā)展基金計(jì)劃項(xiàng)目（20100211）。

田 慧（1982-），女，碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴幮聞┬图靶录夹g(shù)。

王亞靜。

2011-12-07）