姜宇,常超,孫德君,楊朋欣

(哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司，黑龍江哈爾濱 150069）

華枝睪吸蟲免疫學(xué)診斷研究進(jìn)展

姜宇,常超,孫德君,楊朋欣

(哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司，黑龍江哈爾濱 150069）

華枝睪吸蟲病是我國主要的人獸共患寄生蟲病之一，因寄生蟲數(shù)和排卵數(shù)較少，而且蟲卵小，糞檢極易漏診。不斷改進(jìn)的免疫診斷方法則顯著提高了診斷的敏感性、特異性，在臨床輔助診斷和流行病學(xué)調(diào)查中發(fā)揮了越來越重要的作用。本文就華支睪吸蟲病免疫學(xué)診斷方面的研究進(jìn)展作一綜述。

一、皮內(nèi)試驗(yàn)

皮內(nèi)試驗(yàn)(ID）是指采用華支睪吸蟲的成蟲干粉制作冷浸粗制抗原(蛋白含量為150g/ml），以硫柳汞(1/10 000）為防腐劑。用結(jié)核菌素注射器吸取抗原，以無菌技術(shù)在左前臂掌側(cè)面皮內(nèi)注入0.03 ml(皮丘直徑為0.5 cm），并在與之相距5 cm處注入等量硫柳汞作為對照，通常在10～15 min后觀察結(jié)果。若前者皮丘直徑≥0.8 cm或其周圍出現(xiàn)紅暈、水腫，則為陽性，檢出率約為90%。

二、間接血凝試驗(yàn)

間接血凝試驗(yàn)(IHA）一般采用成蟲可溶性抗原作為診斷抗原，但純化抗原可提高準(zhǔn)確性。IHA本身具有操作簡便、快速，肉眼直接觀察判斷結(jié)果等優(yōu)點(diǎn)，其結(jié)果可部分反映感染程度。用IHA方法檢測華支睪吸蟲病患者血清，陽性率為95.9%，對未知人群檢測時，與糞檢的符合率是78.9%。與血吸蟲病患者血清的交差反應(yīng)率為10.25%。

三、間接熒光抗體試驗(yàn)

間接熒光抗體試驗(yàn)(IFAT）具有簡便、快速的優(yōu)點(diǎn)，但其敏感性低于ELISA。引入限定抗原底物珠系統(tǒng)(DASS），以溴化氰活化的瓊脂糖-4B為載體，偶聯(lián)華支睪吸蟲成蟲排泄-分泌抗原，應(yīng)用免疫熒光技術(shù)檢測83例華支睪吸蟲感染者血清全部呈陽性反應(yīng)，與健康人血清比較，囊蟲病及腸道寄生蟲感染者血清無明顯交叉陽性反應(yīng)(χ2=0.021，p>0.1）。該方法簡便、快速、穩(wěn)定性好，可用于華支睪吸蟲病的感染診斷、療效評價、流行病學(xué)調(diào)查及基礎(chǔ)免疫研究。

四、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA）是20世紀(jì)70年代后期出現(xiàn)的一種標(biāo)記免疫測定技術(shù)，經(jīng)過不斷的改進(jìn)和完善，該法已成為十分成熟的免疫學(xué)診斷方法。Chen等曾通過OD值判定抗體效價來評估ELISA法在華支睪吸蟲診斷中的應(yīng)用。結(jié)果表明在OD=1.1和OD=1.2兩個臨界值之間，敏感性為90.2%～95.5%，特異性為84%～99%。但當(dāng)抗體效價大于200時，5例并殖吸蟲病和1例血吸蟲病患者血清各有1例呈陽性反應(yīng)。這種方法具有高度的敏感性和特異性，操作簡便，不需特殊儀器設(shè)備，血樣用量少，判斷結(jié)果容易，現(xiàn)場應(yīng)用方便，是目前符合現(xiàn)場需要的較好的免疫診斷方法。但由于ELISA有一定的假陽性，為提高ELISA的特異性和敏感性，在經(jīng)典ELISA的基礎(chǔ)上，目前又發(fā)展出凝膠擴(kuò)散-酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(DIG-ELISA）、斑點(diǎn) -ELISA(Dot-ELISA）、生物素-親和素-酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ABC-ELISA）和單克隆抗體ELISA等方法。

五、膠體金標(biāo)記技術(shù)

膠體金是一種帶負(fù)電荷的疏水膠體溶液，能對蛋白質(zhì)等高分子物質(zhì)進(jìn)行吸附結(jié)合，得到膠體金蛋白。由于金顆粒具高電子密度的特性，且這些標(biāo)記物在固相載體上抗原抗體反應(yīng)處聚集達(dá)到一定密度時，出現(xiàn)肉眼可見的粉紅色斑點(diǎn)。此技術(shù)簡便、快速、敏感，已開始大量應(yīng)用于檢測試劑盒的開發(fā)，包括免疫金銀染色試驗(yàn) (IGSS）、斑點(diǎn)免疫金銀染色法(dot-IGSS）和斑點(diǎn)金免疫滲濾(DIGFA）。

六、血清循環(huán)抗原的檢測

宿主的血液中存在著微量的循環(huán)抗原(CA），若用敏感的方法檢測，對于明確診斷和考核療效均可接近病原學(xué)的診斷水平。Chen等用雙抗夾心法檢測華支睪吸蟲病患者血清中的循環(huán)抗原，其最小量為0.03 μg/ml，且血清中的抗原濃度與蟲卵檢出數(shù)成正相關(guān)，因此可用于估計感染程度和再治療中選擇適當(dāng)?shù)乃幬飫┝?。駱建民等以競爭抑制型ELISA和雙夾心ELISA法檢測華支睪吸蟲病血清中的CA，前者的靈敏度為0.1～10 μg/ml，后者為0.19～25 μg/ml。實(shí)驗(yàn)表明競爭抑制型ELISA檢測CA較為敏感、特異、簡便，可用于早期診斷。用dot-ELISA檢測血清中CA較雙抗夾心法不僅簡便，而且在現(xiàn)場調(diào)查中與糞檢陽性和陰性總符合率高達(dá)95.5%。

七、小結(jié)

我國的多個省份都有人和動物華支睪吸蟲病的流行，因此建立實(shí)用、敏感、特異、高效的診斷方法是十分必要的。目前，華支睪吸蟲病的免疫診斷還面臨著許多問題，假陽性、假陰性和交叉反應(yīng)仍是影響診斷結(jié)果的主要因素，因此尋找敏感、特異、易于制備且穩(wěn)定的抗原和不斷改進(jìn)診斷方法是解決問題的關(guān)鍵。雖然糞便檢查仍是目前確診華支睪吸蟲病的主要方法，但工作量大、漏檢率高。因此，在現(xiàn)場防制工作中廣泛地應(yīng)用免疫學(xué)診斷方法是十分必要的。

（略）