任羽 張建安 朱玉山

摘 要:目的:構(gòu)建頭孢菌素C?；?Cephalosporin C Acylase)基因的兩種原核表達(dá)載體,確定高效原核表達(dá)體系。方法:人工合成頭孢菌素C?；窼12基因,分別克隆到含有Lac啟動子的載體pBC KS和T7-lac啟動子的載體pET-28a上,命名為pBC-S12和pET-28-S12,重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌DH5α和BL21(DE3),表達(dá)純化目的蛋白S12,測定酶活。結(jié)果:成功地構(gòu)建了頭孢菌素C?；窼12的原核表達(dá)菌株,組成型表達(dá)和誘導(dǎo)型表達(dá)體系的表達(dá)量低,目的蛋白具有酶活,誘導(dǎo)型表達(dá)產(chǎn)生的酶比組成型表達(dá)產(chǎn)生的酶具有更強(qiáng)活性,可作為大腸桿菌表達(dá)頭孢菌素C酰化酶的高效表達(dá)體系。