肖 煥 馬再鴻

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HPLC測(cè)定養(yǎng)血當(dāng)歸片中芍藥苷的含量

肖 煥1馬再鴻2

（1 廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院藥學(xué)部，廣州 510120；2 中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院藥學(xué)部，廣州 510120）

建立養(yǎng)血當(dāng)歸片中芍藥苷的含量測(cè)定方法。采用HPLC法，以Diamonsil C18（250mm×4.6mm，5μm）色譜柱，0.1%磷酸溶液:乙腈（82:18）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm。在上述色譜條件下，芍藥苷線性范圍為0.583～58.3μg?mL-1，平均回收率101.45%，RSD 為2.52%。該方法可靠，簡(jiǎn)單可行，為控制養(yǎng)血當(dāng)歸片的內(nèi)在質(zhì)量提供了科學(xué)依據(jù)。

養(yǎng)血當(dāng)歸片；芍藥苷；高效液相色譜法

養(yǎng)血當(dāng)歸片為養(yǎng)血當(dāng)歸糖漿改劑型而成，由當(dāng)歸、白芍、川芎、黃芪等藥材提取，加工制得的口服制劑，具有補(bǔ)氣血、調(diào)經(jīng)的功效。目前主要用于月經(jīng)不調(diào)，行經(jīng)腹痛，貧血虛弱，產(chǎn)后體虛，萎黃肌瘦，產(chǎn)后血虛等癥狀。白芍的有效成分為芍藥苷、白芍苷、氧化芍藥苷和苯甲酞芍藥苷等苷類(lèi)化合物，簡(jiǎn)稱(chēng)白芍總苷。芍藥苷為白芍總苷的主要成分，具有鎮(zhèn)靜、解痙、抗炎、抗應(yīng)激性潰瘍病、擴(kuò)張冠脈血管、對(duì)抗急性心肌缺血以及抑制血小板凝聚等多方面的作用。在含量測(cè)定方面周堅(jiān)等測(cè)定了養(yǎng)血當(dāng)歸糖漿中總阿魏酸的含量[1]，為了更好控制該制劑單一藥材的質(zhì)量，建立了臣藥芍藥苷含量測(cè)定方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥 高效液相色譜儀（美國(guó)WATERS，515泵，2487紫外檢測(cè)器，浙江大學(xué)N3000色譜工作站）；AUY120D分析天平（SHIMADZU）；芍藥苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用，批號(hào)：110736-200501）；當(dāng)歸、白芍、川芎、黃芪等藥材購(gòu)于廣州市致信藥業(yè)有限公司；養(yǎng)血當(dāng)歸片（自制）；所用試劑乙腈為色譜純，其它試劑均為分析純。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 色譜分析條件：色譜柱為Diamonsil C18（250mm×4.6mm，5μm），Diamonsil C18預(yù)柱，流動(dòng)相為0.1%磷酸溶液:乙腈（82:18）；檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm，溫度為室溫，進(jìn)樣量為10μl，理論塔板數(shù)按芍藥苷色譜峰計(jì)算不低于3000。分別精密吸取芍藥苷對(duì)照品、供試品、陰性對(duì)照液（取處方中除去白芍以外的其它藥材，按樣品制備方法制成缺白芍陰性樣品，并按供試品溶液制法制成陰性對(duì)照溶液）各1010μl進(jìn)樣，記錄色譜圖。結(jié)果芍藥苷對(duì)照品和供試品色譜圖中芍藥苷峰與雜質(zhì)峰達(dá)基線分離，分離度不小于1.5，相對(duì)保留時(shí)間約為24.3min，而陰性對(duì)照色譜圖中相同位置無(wú)干擾，見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖

1.2.2 線性關(guān)系的考察 精密稱(chēng)取芍藥苷對(duì)照品5.83mg，置100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得58.3μg?mL-1的標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液。然后將儲(chǔ)備液進(jìn)行分別稀釋至29.15、11.66、2.332、1.166、0.583μg?mL-1，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為系列對(duì)照品溶液。分別吸取上述 5份對(duì)照品溶液各10μl，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，以其濃度C（μg?mL-1）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值（A）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程為A=1100.9C -462.9，R=0.9995，線性范圍為0.583～58.3μg?mL-1。

1.2.3 供試品溶液的制法 根據(jù)參考文獻(xiàn)的方法[3-4]，取本品（批號(hào)30110301）10片，研細(xì)，精密稱(chēng)取0.2g于具塞三角瓶中，加70%乙醇30ml，精密稱(chēng)重，超聲15min，補(bǔ)足損失量，取上清液，用0.45μm微孔濾膜濾過(guò)后，作為供試品溶液。

1.2.4 精密度試驗(yàn)及供試液穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸收質(zhì)量濃度11.66μg·mL-1的對(duì)照品溶液10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果芍藥苷峰面積積分值平均值為12497.2，RSD為1.35%，表明儀器精密度良好；另取同一樣品供試液（批號(hào)30110301），每隔2h進(jìn)樣一次，12h內(nèi)各圖譜中芍藥苷峰面積積分值平均值為12831.3，RSD為1.16%，說(shuō)明供試液在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

1.2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 分別稱(chēng)取本品同一批號(hào)樣品6份，依法制備6份供試品溶液，進(jìn)行6次測(cè)定，結(jié)果芍藥苷峰面積積分值平均值為12618.1，RSD為2.39%，說(shuō)明該方法重復(fù)性較好。

1.2.6 回收率試驗(yàn) 采用加樣回收試驗(yàn)法，在已知含量芍藥苷的樣品中，定量加入高、中、低劑量的芍藥苷對(duì)照品溶液，依供試品溶液制法操作，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算芍藥苷回收率和RSD，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 芍藥苷的回收率試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果表明本方法平均回收率101.45%，且RSD＜2%，說(shuō)明本方法準(zhǔn)確性良好。

1.2.7 養(yǎng)血當(dāng)歸片中芍藥苷的含量測(cè)定 分別取3批樣品，按照上述2.3供試品溶液制備方法制備樣品溶液，每批平行做3個(gè)樣，與質(zhì)量濃度11.66μg?mL-1的對(duì)照品溶液隨行進(jìn)樣，各10μl，測(cè)定。

2 結(jié)果

以峰面積積分值比計(jì)算芍藥苷的含量，3批樣品測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表 2。

表2 不同批次養(yǎng)血當(dāng)歸片中芍藥苷的含量

根據(jù)3批中試結(jié)果，可暫定本品每片芍藥苷的含量不低于0.30mg。

3 討論

在試驗(yàn)過(guò)程中，參考文獻(xiàn)采用甲醇:水（25:75）、乙腈:水（26:74）等多種流動(dòng)相，色譜峰分離效果均不太理想。參考《中國(guó)藥典》適當(dāng)調(diào)整，以0.1%磷酸溶液:乙腈（82:18）為流動(dòng)相時(shí)，分離效果較好，無(wú)其它干擾的雜質(zhì)峰，峰形較好，可以用于本制劑中芍藥苷的含量測(cè)定。

在供試品制備時(shí)，單純采用甲醇制備樣品時(shí)，有雜質(zhì)干擾，參考文獻(xiàn)以70%乙醇作為提取溶媒[2-5]，基本消除其他組份的干擾。同時(shí)在超聲時(shí)間和乙醇用量上均進(jìn)行了優(yōu)選，最終確定以70%乙醇30ml，超聲提取15min為提取條件，不僅雜質(zhì)無(wú)干擾，且測(cè)得含量高，穩(wěn)定可靠，操作方法簡(jiǎn)單有效。

[1] 周堅(jiān),王宓.養(yǎng)血當(dāng)歸糖漿質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào), 2003,23(1):61-62.

[2] 周祖坤,孫代華,凌颯.高效液相色譜法測(cè)定當(dāng)歸芍藥顆粒劑中芍藥苷的含量[J].藥物分析雜志,2006,26(7):1001-1003.

[3] 李衫,王亞楠,劉小宇,等.白芍總昔提取和純化工藝的研究[J].食品科學(xué),2007,28(5):173-175.

[4] 鄧一鳴,孫曉霞,薛立安.赤芍中芍藥苷的提純工藝研究[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2004,20(6):363-365.

[5] 周洪偉,許文博,王玉蓉,等.赤芍總苷提取與大孔樹(shù)脂純化工藝研究[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào),2011,39(1):48-50.

Determination of Paeoniflor in Yangxue Danggui Tablets by HPLC

XiaoHuan, MaZaihong

（1.Department of Pharmacy, the Second Affiliated Hospital, Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine, Guangzhou 510120, China; 2.Department of Pharmacy, Sun Yat-sen Memorial Hospital, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510120, China）

To set up a method for content determination of Paeoniflor in Yangxue Danggui Tablets.The HPLC analysis was performed on a Diamonsil C18 (250mm×4.6mm, 5μm) column, mobile phase was 0.1% phosphoric acid:acetonitrile (82:18), detecting wavelength was at 230nm.The standard curve was linear within a range of 0.583-58.3μg?mL-1.The average recovery and RSD were 101.45% and2.52%, respectively.This method is accurate, reliable, and can provide a scientic index for controlling the qualities of Yangxue Danggui Tablets.

Yangxue Danggui Tablets; Paeoniflor; HPLC

10.3969/j.issn.1672-2779.2012.02.108

1672-2779（2012）-02-0154-02

2011-12-18

（本文校對(duì)：韓世輝 ）