陳 軍 舒 翔 余南才
(湖北省武漢市第一醫(yī)院,武漢430022)
中藥金銀花質(zhì)量控制研究
陳 軍 舒 翔 余南才
(湖北省武漢市第一醫(yī)院,武漢430022)
目的 建立以綠原酸為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行金銀花的質(zhì)量控制方法。方法 薄層色譜鑒定金銀花中綠原酸,HPLC測定金銀花中綠原酸含量。結(jié)果 金銀花藥材供試品和綠原酸對照品在硅膠H板上展開后Rf值相等,顯示相同的熒光斑點(diǎn)。HPLC測定三產(chǎn)地的金銀花中綠原酸含量分別是4.35%、4.32%、4.29%。結(jié)論 HPLC方法測定金銀花中綠原酸含量方法簡單快捷,重復(fù)性好。
綠原酸;金銀花;質(zhì)量
金銀花(Flos Lonicerae)又名銀花、雙花,是忍冬科植物忍冬、山銀花、紅腺忍冬的干燥花蕾或初開的花。性寒,味甘,歸脾、胃、心經(jīng),有疏散風(fēng)熱、清熱解表、解毒的作用,主治外感風(fēng)熱、咳嗽、發(fā)熱等癥[1]。李時(shí)珍的《本草綱目》中清晰記載:“金銀花對一切腫毒,敗毒托里,散氣活血,其功能獨(dú)勝”[2]。金銀花中的主要活性成分是綠原酸,因此有必要對金銀花藥材中含量很高的綠原酸進(jìn)行鑒別和質(zhì)量控制。
綠原酸對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號20101108);硅膠H薄層板(青島海洋化工廠);AB104-N電子天平(托力多有限公司);高效液相色譜儀(美國Waters公司);LC-295紫外檢測器;MTPERS BDS C18色譜柱;金銀花的花蕾(山東青島、河南密縣、重慶南川縣三產(chǎn)地的種植基地);乙腈為色譜純。
2.1 硅膠薄層鑒定
2.1.1 對照品溶液的制備 精密稱取綠原酸標(biāo)準(zhǔn)對照品5.0mg,用甲醇超聲溶解,完全溶解后用甲醇定容于5ml的容量瓶中,即得1mg/ml的綠原酸對照品溶液,放置于4℃冰箱。
2.1.2 樣品溶液的制備 精密稱取金銀花干燥藥材1g,放置于50ml的圓底燒瓶中,加入蒸餾水25ml煎煮20min。過濾,精密量取濾液10ml于30ml的容量瓶中,加入乙酸乙酯定容,振搖,蒸干,將殘?jiān)蛹状?ml使其完全溶解,即得樣品溶液。
2.1.3 薄層鑒定結(jié)果 按照2010年中國藥典附錄VIB薄層鑒定的操作進(jìn)行,吸取對照品溶液和樣品溶液各2ul,點(diǎn)于硅膠薄層板上,用乙酸乙酯-甲酸-水(7:3:3)展開劑展開,取出,在紫外燈365nm下檢測。結(jié)果綠原酸對照品和樣品溶液展開后斑點(diǎn)位置在同一水平線上,Rf值相等,在紫外線下均顯示藍(lán)色熒光斑點(diǎn)。
2.2 HPLC測定綠原酸含量
2.2.1 色譜條件考察 Hypersil ODS色譜柱(250mm× 4.6mm,5um),流動相:乙腈:0.2%醋酸水=3:7,洗脫流速0.8ml/min,檢測波長327nm,柱溫30℃。
2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取對照品5mg,置于10ml容量瓶中,用50%甲醇超聲溶解,完全溶解后用50%甲醇定容,即得0.5ml/ml的綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液。將該配制的母液稀釋成0.5、1.0、1.5、2.0、2.5μg/ml一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。
2.2.3 供試品溶液的制備 準(zhǔn)備量取金銀花中提取純化后的濃縮液1ml,置于10ml容量瓶中,加50%的甲醇超聲溶解,定容,備用。
2.2.4 線性關(guān)系考察 將以上配制的一系列對照品標(biāo)準(zhǔn)品溶液10μL分別注入高效液相中,按照上述的色譜條件進(jìn)行操作,測定峰面積,得出線性回歸方程Y=516350X+183433,r=0.9958,n=5,表明在0.5~2.5μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
2.2.5 精密度試驗(yàn) 精密量取綠原酸標(biāo)準(zhǔn)對照品的母液10μL,進(jìn)行高效液相色譜,進(jìn)樣5次,測的精密度RSD=0.84%。
2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取6份上述配制的供試品溶液10μL,分別放置0、1、2、4、8、12小時(shí)后進(jìn)高效液相,測定結(jié)果發(fā)現(xiàn)供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好,RSD=0.58%。
2.2.7 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取已知綠原酸含量的供試品溶液3份,分別加入對照品溶液適量,在同一水平條件下測定3次,測得平均回收率99.48%,RSD=1.24%。
2.2.8 樣品測定 取出不同批號的三產(chǎn)地金銀花樣品溶液,按照含量測定的方法及色譜條件進(jìn)行測定,按照外標(biāo)法計(jì)算樣品中綠原酸含量。結(jié)果見表1。
表1 三產(chǎn)地的金銀花中綠原酸含量測定結(jié)果 (%)
中藥衛(wèi)生部頒發(fā)標(biāo)準(zhǔn)對金銀花藥材的鑒別用薄層色譜是硅膠H板,展開劑是苯:甲酸乙酯:甲酸(3:1.5:0.1),本研究采用該展開劑發(fā)現(xiàn)綠原酸對照品樣品未展開。改用乙酸乙酯:甲酸:水(7:3:3)展開劑展開,展開效果較好,對照品斑點(diǎn)和樣品斑點(diǎn)的Rf=0.58。2010年版《中國藥典》規(guī)定,金銀花中綠原酸的含量不能低于1.5%[3]。本研究中三產(chǎn)地收集的金銀花樣本中,綠原酸含量最高的是山東青島產(chǎn)地的,綠原酸含量是4.35%,最低的是重慶南川4.29%,均符合藥典規(guī)定。HPLC方法具有分離效能高,分析速度快,已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于于化學(xué)研究領(lǐng)域。本研究中建立HPLC方法測定金銀花中綠原酸含量方法簡單、快捷、可靠。
[1] 王天志,李永梅.金銀花的研究進(jìn)展[J].華西藥學(xué)雜志,2000,15(4):292-298.
[2] 趙國玲,劉佳佳,林丹.金銀花化學(xué)成分及藥理研究進(jìn)展[J].中成藥,2002, 24(12):973-976.
[3] 王力川.金銀花的化學(xué)成分及功效研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,37(5): 20 36-2037.
10.3969/j.issn.1672-2779.2012.15.105
1672-2779(2012)-15-0160-02
蘇玲
2012-05-15)