陳衛(wèi)琳,張 寬,丁春花,楊彩媚,梁一池,胡 娟
(福建中醫(yī)藥大學,福建 福州 350108)
藤茶是葡萄科蛇葡萄屬中的顯齒蛇葡萄(AmpeLopsis grossedentata)(Hand-Mazz)W.T.Wang的嫩莖葉[1],主要分布在湖南、湖北、廣東、廣西、江西、福建、云南、貴州等省區(qū)[2]。尤溪縣地處戴云山脈北段西部,地貌以中低山地為主。境內(nèi)東西山嶺聳峙,丘陵起伏,千米山峰林立,山間盆地錯綜;中部尤溪河谷斜貫南北。各地海拔差異較大,最高峰大模山海拔1472米,最低處尤溪口碼頭閩江江面海拔僅31米。尤溪縣地貌差異較大,主要有有四大類型:山地、丘陵、山間盆地、河谷平原。本文采用紫外分光光度法(UV),以二氫楊梅素為指標性成分,對藤茶中總黃酮進行含量測定。
14批藤茶樣品采自福建省尤溪縣不同地區(qū),將鮮品莖、葉分離,通風處晾干后置鼓風干燥箱中40 ℃干燥,粉碎備用;二氫楊梅素對照品(成都曼思特生物科技有限公司,純度均≥98%,批號:27200-12-0)。
TV-1800紫外分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)。
金葉RE-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠);DHG-9240型電熱恒溫鼓風干燥箱(上海精宏實驗設備有限公司);FA2104N型萬分之一電子分析天平(上海精密科學儀器有限公司);YP202N型百分之一電子天平(上海精密科學儀器有限公司)。
2.1.1 供試品溶液 稱取第1~7批干燥藤茶莖粉末各10 g、葉粉末各5 g,置于圓底燒瓶中,80%乙醇[1]加熱回流提取3次,每次60 min,料液比1∶30,合并提取液,離心,取上清液,分別旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至一定體積,莖濃縮液用80%乙醇定容于50 mL容量瓶中,葉濃縮液用80%乙醇定容于100 mL容量瓶中。藤茶莖、葉濃縮液分別用石油醚(1∶1)萃取4次,揮干石油醚,莖濃縮液用80%乙醇稀釋定容至50 mL量瓶,搖勻備用;葉濃縮液用80%乙醇稀釋定容至100 mL量瓶,搖勻備用。
稱取第8~14批干燥藤茶莖、葉各2 g,置于圓底燒瓶,80%乙醇加熱回流提取3次,每次60 min,料液比1∶30,合并提取液,離心,取上清液,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至一定體積,莖、葉濃縮液用80%乙醇稀釋定容至100 mL量瓶,搖勻備用。
2.1.2 對照品溶液 精密稱取二氫楊梅素對照品0.0050 g,置25 mL量瓶中,加適量80%乙醇溶解,定容至刻度,搖勻,配制成0.2 mg/mL的溶液,作為對照品貯備液。
2.2.1 最大吸收波長的確定 取對照品貯備液,于室溫放置,精密吸取對照品貯備液1 mL于25 mL容量瓶中,加80%乙醇稀釋定容至刻度,搖勻。取供試品溶液1 mL于500 mL容量瓶中,加80%乙醇稀釋定容至刻度,搖勻。隨行空白,取稀釋后對照品和樣品溶液于UV 1800分光光度計上掃描,結(jié)果供試品和對照品的吸收圖譜一致,在292 nm處有最大吸收,故選擇292 nm為測定波長。見圖1~2。
2.2.2 標準曲線的繪制 精密吸取0.1 mg/mL二氫楊梅素對照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mL,分別置于10 mL容量瓶中,80%乙醇定容至刻度。于292 nm測其吸光度,以吸光度為縱坐標,濃度為橫坐標做標準曲線。得回歸方程為:y=0.0602x+0.0063,r=0.9998。
2.2.3 樣品總黃酮含量測定 精密吸取第1~7批莖、葉供試品溶液各1.0 mL,置于50 mL量瓶中,80%乙醇稀釋定容至刻度,搖勻,再吸取5 mL置于50 mL量瓶中,80%乙醇稀釋定容至刻度,搖勻,再吸取5 mL置于10 mL量瓶中;精密吸取第8~14批莖供試品溶液各5 mL,置于50 mL容量瓶中,80%乙醇稀釋定容至刻度,搖勻,再吸取1 mL置于10 mL容量瓶中,80%乙醇定容至刻度;精密吸取第8~14批葉每個編號供試品溶液各1 mL,置于50 mL容量瓶中,80%乙醇稀釋定容至刻度,搖勻,再吸取1 mL置于25 mL容量瓶中,80%乙醇定容至刻度;于292 nm處測定吸收值(A)。根據(jù)回歸方程計算樣品總黃酮含量,結(jié)果見表1。
圖1 藤茶莖與二氫楊梅素對照品紫外吸收光譜
圖2 藤茶葉與二氫楊梅素對照品紫外吸收光譜
表1 14 個不同產(chǎn)地藤茶樣品中總黃酮含量(%)
藤茶是葡萄科蛇葡萄屬中的顯齒蛇葡萄(AmpeLopsis grossedentata)(Hand-Mazz)W.T.Wang的嫩莖葉,味甘淡,性涼,其功效為清熱解毒,祛風濕、強筋骨。藥理實驗表明,藤茶總黃酮具有消炎、抑菌、止咳、鎮(zhèn)痛、護肝、消脂等功效[3]。其主要活性成分為二氫楊梅素,具有降血脂、消炎和清熱解毒功能。除了將藤茶作為茶用以外,目前已提取藤茶黃酮生產(chǎn)藥品和飲料等[4]。由測定結(jié)果可知,藤茶葉中總黃酮含量高于藤茶莖中總黃酮含量,采用紫外分光光度法測定第1~7批藤茶,1號、5號葉的總黃酮含量比較高,第8~14批藤茶,10號葉、莖中總黃酮含量均為最高。
[1]王 巖,王 嬰,周莉玲,等.正交試驗法優(yōu)選藤茶的提取工藝[J].中國中藥雜志,2002,27(4):302-303.
[2]何桂霞,裴 剛,周天達,等.顯齒蛇葡萄中總黃酮和二氫楊梅素的含量測定[J].中國中藥雜志,2000,25(7):423-425.
[3]張友勝,楊偉麗,熊浩平.類茶植物顯齒蛇葡萄的研究利用現(xiàn)狀[J].茶葉通訊,2001(1):19-23.
[4]陳玉瓊,李安琪,孟 燕.藤茶黃酮及二氫楊梅素提取條件的優(yōu)化[J].華中農(nóng)業(yè)大學學報,2009,28(1):102-110.