鼻咽癌放療前后免疫功能改變及其臨床意義

劉聯(lián)斌，薛 靈，周茂華，郭 萍，黃 剛，王小麗，吳 偉

(贛州市腫瘤醫(yī)院 1、檢驗(yàn)科 2、放療科，江西 贛州 341000)

惡性腫瘤患者免疫功能是削弱的，T 淋巴細(xì)胞亞群是一項(xiàng)評(píng)價(jià)人體細(xì)胞免疫功能的重要指標(biāo)，放療可加劇由癌癥誘發(fā)的低免疫功能，而細(xì)胞免疫功能與患者的預(yù)后密切相關(guān)[1-3]。放療是鼻咽癌的主要治療手段，放療通過(guò)射線殺滅腫瘤細(xì)胞使患者得到康復(fù)，但又有可能抑制機(jī)體的免疫功能，造成不能完全被消滅的腫瘤細(xì)胞重新生長(zhǎng)，導(dǎo)致腫瘤的復(fù)發(fā)和/或轉(zhuǎn)移。本文通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)鼻咽癌患者放療前后T 淋巴細(xì)胞亞群，以了解放療對(duì)鼻咽癌患者免疫功能狀況的影響。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 2010年6月至2011年12月來(lái)本院就診的134例初治鼻咽癌患者，均經(jīng)病理確診為鼻咽低分化鱗癌，其中男98例，女36例。年齡24～67歲，中位年齡48歲。放療前及放療結(jié)束后即刻收集外周血標(biāo)本，做T細(xì)胞亞群分析，外周血T細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)。

1.2 儀器和試劑 美國(guó)BD 公司FACSCalibur 流式細(xì)胞儀，用標(biāo)準(zhǔn)熒光微球校正光電倍增管(PMT)電壓,建立熒光補(bǔ)償,檢查儀器靈敏度,使流式細(xì)胞儀處于最佳工作狀態(tài)；美國(guó)BD 公司配套四色試劑MultiTESTTMIMK Kit，貨號(hào)：340503。

1.3 樣本制備與檢測(cè)

1.3.1 所有樣品按照要求采集外周靜脈血2 ml,EDTA-K2抗凝,均在采樣48 h 內(nèi)完成檢測(cè)。

1.3.2 在檢測(cè)管中準(zhǔn)確加入20μl MultiTEST 四色試劑和50μl全血,充分混勻后置室溫陰暗處15min。加入450μl FACS 溶血?jiǎng)?1x),充分混勻后室溫陰暗處15 min。

1.3.3 標(biāo)本制備后立即上機(jī)運(yùn)行MultiTEST 程序檢測(cè)。

1.3.4 每次檢測(cè)均使用質(zhì)控品同時(shí)檢測(cè),質(zhì)控品的檢測(cè)值均在其靶值±2s 范圍內(nèi)各樣品檢測(cè)值有效。

1.4 放射治療 采用西門(mén)子直線加速器6MV的X線。采用體位不變的等中心照射，熱塑型面罩固定，低熔鉛個(gè)人專(zhuān)擋，屏蔽非照射區(qū)域。常規(guī)分割連續(xù)放療，每次2Gy，1次/d，每周5次；鼻咽靶區(qū)根治劑量為65～75Gy，頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶根治劑量為60～70Gy，頸淋巴結(jié)預(yù)防性照射劑量為45～50Gy。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS12.0軟件包處理有關(guān)數(shù)據(jù)，采用單樣本t 檢驗(yàn)和配對(duì)t 檢驗(yàn)，P≤0.05 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

鼻咽癌患者放療前后外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比較有明顯變化，134例患者放療后CD3+、CD4+、CD4+/CD8+的均值比放療前明顯降低(P＜0.01)，CD8+明顯升高。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析各組差異顯著，見(jiàn)下表。

3 討論

表1 放療前后T細(xì)胞亞群分析()

T細(xì)胞亞群在腫瘤免疫中起重要作用，T細(xì)胞各亞群間數(shù)量比例適當(dāng)，才能發(fā)揮正常的抗腫瘤作用。T細(xì)胞亞群包括總T細(xì)胞數(shù)(CD3+)、輔助T細(xì)胞數(shù)(CD4+)、抑制T細(xì)胞數(shù)(CD8+)以及后兩者的比值(CD4+/CD8+)，此四項(xiàng)指標(biāo)中，CD3+的檢測(cè)意義已逐漸減小，CD4+和CD8+的結(jié)果相互影響，功能相互牽制，單獨(dú)分析有一定的局限性，而CD4+/ CD8+的值在判斷結(jié)果時(shí)相對(duì)穩(wěn)定，檢測(cè)更具有實(shí)用價(jià)值。

CD4+/CD8+比值低于正常時(shí)被認(rèn)為是免疫調(diào)節(jié)功能紊亂，易發(fā)生惡性腫瘤。CD4+T細(xì)胞可識(shí)別腫瘤細(xì)胞分泌的可溶性抗原，參與B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞的激活，進(jìn)而起到抗腫瘤作用；CD4+T淋巴細(xì)胞還可釋放IL-2、IFN-γ、IL-4等細(xì)胞因子以激活NK細(xì)胞、促進(jìn)B細(xì)胞活化和抗體形成以達(dá)到抗腫瘤效應(yīng)。而CD8+T 淋巴細(xì)胞是抑制性T細(xì)胞，其功能主要是抑制免疫應(yīng)答。機(jī)體維持正常的免疫功能狀態(tài)，有賴(lài)于各種免疫細(xì)胞之間的相互制約，以產(chǎn)生適度的免疫應(yīng)答，CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平在腫瘤患者中常常出現(xiàn)異常[4,5]。

許多外周血T細(xì)胞亞群檢測(cè)的研究結(jié)果表明，多種惡性腫瘤患者有T 淋巴細(xì)胞亞群狀態(tài)異常和比例失調(diào)，腫瘤患者外周血CD3+細(xì)胞、CD4+細(xì)胞、CD4+/CD8+比值均低于正常人，而CD8+則明顯高于正常人。不同腫瘤組之間各項(xiàng)指標(biāo)無(wú)顯著性差異，說(shuō)明腫瘤患者免疫功能較正常人明顯低下，細(xì)胞免疫受到抑制，降低了清除腫瘤細(xì)胞的能力，其機(jī)制可能與腫瘤在發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中分泌大量的免疫抑制因子有關(guān)[6,7]。

放療后由于T細(xì)胞亞群數(shù)量及比例均有改變，對(duì)患者產(chǎn)生強(qiáng)大而持久的抑制作用，降低其免疫功能。本研究結(jié)果示，134例患者放療后CD3+、CD4+、CD4+/CD8+的均值比放療前明顯降低 (P＜0.01)，CD8+明顯升高。統(tǒng)計(jì)學(xué)檢測(cè)有極顯著性差異，表明放療在使鼻咽癌病灶消退的同時(shí)也損傷機(jī)體的免疫功能，致使CD4+/CD8+比例降低或者倒置、細(xì)胞免疫功能抑制，減弱宿主免疫細(xì)胞抗腫瘤的能力。隨著時(shí)間的推移，機(jī)體的免疫功能是否仍處于抑制狀態(tài)、放療后T細(xì)胞亞群變化目前仍在隨訪中，以觀察其與生存率的關(guān)系，從而得到鼻咽癌預(yù)后的指標(biāo)。

鼻咽癌患者免疫力低下，在放射治療中，射線將使T細(xì)胞亞群發(fā)生變化，對(duì)細(xì)胞免疫功能和T細(xì)胞亞群產(chǎn)生影響，對(duì)淋巴細(xì)胞增殖功能有抑制作用；在放射治療后T細(xì)胞亞群檢測(cè)CD4+/CD8+的比值比在治療前顯著下降，因此外周血T細(xì)胞亞群檢測(cè)對(duì)預(yù)測(cè)放射治療效果、預(yù)后、轉(zhuǎn)移等有重要價(jià)值。在放射治療時(shí)給以免疫增強(qiáng)劑治療將有助于提高療效，尤其是中藥在放射治療中具有增敏和固護(hù)機(jī)體正氣，保護(hù)機(jī)體免疫功能的作用，同時(shí)能刺激骨髓造血功能，保護(hù)和促進(jìn)正常組織的修復(fù)，鞏固療效[8]。

[1]Uh S,Lee SM,Kim HT,et al.The effect of radiation therapy on immune function in patients with squamous cell lung carcinoma[J].Chest,1994,105(1):132－137.

[2]Parkin DM.Global cancer statistics in the year 2000[J].Lancet,2001,2(9):533－543.

[3]周 丹，何進(jìn)才.鼻咽癌血清或血漿標(biāo)志物研究進(jìn)展[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2012,30(1):37-39.

[4]董春華，劉志強(qiáng)，徐 坤.幼年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎患者免疫功能測(cè)定及臨床意義[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2011,29(2):123-124.

[5]劉長(zhǎng)安,孫 武,邵玉霞,等.大腸癌患者T細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞活性檢測(cè)的臨床意義[J].實(shí)用癌癥雜志,2001,16(5):476.

[6]趙東輝,周正端,齊德林.中晚期大腸癌患者外周血單核細(xì)胞免疫活性的實(shí)驗(yàn)研究[J].第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),1997,17 (1):26-28.

[7]李 寧,張 紅,王燕玲,等.低劑量碳離子全身輻射對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞增殖及血清干擾素的影響[J].中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù),2007,11(8):6581-6584.

[8]孫艷紅,沈玉梅.中藥對(duì)腫瘤放射治療增敏作用的研究進(jìn)展[J].上海中醫(yī)藥雜志,2007,41(6):82-84.