趙麗華，林 競，石 柏，林秋蘭，槐英麗，王克杰

(北京民航總醫(yī)院病理科，北京 100025)

甲狀腺乳頭狀癌(papillary thyroid carcinoma，PTC)是甲狀腺惡性腫瘤中最常見的一種類型，約占全部甲狀腺惡性腫瘤的80%，PTC病理診斷依據(jù)特征性的細胞核形態(tài)，包括毛玻璃樣核、核溝、核內(nèi)包涵體等。但實際工作中，一些良性病變，如結(jié)節(jié)性甲狀腺腫、濾泡性腺瘤、橋本氏甲狀腺炎等?？砂橛腥轭^狀增生或毛玻璃樣核等改變。這使PTC的診斷有時變得很困難。本研究檢測P53，ki-67，galectin-3，HBME-1，34βE12和 CK-19蛋白在 PTC 和良性病變中的表達，為臨床鑒別PTC與良性病變提供有價值的參考。

1 材料與方法

1.1 材料

選取民航總醫(yī)院病理科2003～2008年保存的PTC蠟塊43例，其中男性9例，女性34例;年齡24～73歲，中位數(shù)49歲。PTC診斷標(biāo)準(zhǔn)參照最新版世界衛(wèi)生組織腫瘤學(xué)分類［1］。患者術(shù)前皆未接受化療或放療，以結(jié)節(jié)性甲狀腺腫37例、甲狀腺腺瘤33例和橋本氏甲狀腺炎17例作為對照組。全部病例HE染色經(jīng)2名有副高級以上職稱的病理醫(yī)師復(fù)檢。

1.2 方法

免疫組織化學(xué)法:所有標(biāo)本均經(jīng)10%中性甲醛固定，常規(guī)組織處理，石蠟包埋，4 μm切片，常規(guī)HE染色。免疫組織化學(xué)采用SP法，PBS代替一抗做空白對照，免疫組化方法按試劑說明書操作，DAB顯色，蘇木精復(fù)染。P53，ki-67，galectin-3，HBME-1，34βE12和CK-19鼠抗人單克隆抗體工作液(福州邁新生物公司)。

1.3 結(jié)果

P53，ki-67表達于胞核，galectin-3主要胞質(zhì)著色，HBME-1主要表達于胞膜，部分有胞核著色，34βE12主要胞質(zhì)和細胞膜，CK19表達于胞質(zhì)和包膜，以上部位出現(xiàn)黃色顆粒分布并明顯高于背景著色為陽性，每張切片均選取5個高倍鏡視野(×400)，分別計數(shù)每一視野中陽性細胞占總細胞數(shù)的百分數(shù)。5個視野陽性細胞百分數(shù)之平均數(shù)為該例陽性細胞百分數(shù)的結(jié)果。參考Beesley［2］分級方法。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

檢測的 P53，ki-67，galectin-3，HBME-1，34βE12和CK-19表達按以下公式進行計算:敏感性=真陽性/(真陽性+假陰性)，特異性=真陰性/(真陰性+假陽性)，診斷正確率=(真陽性+真陰性)/(所有陽性+所有陰性)，陽性預(yù)測值=真陽性/(真陽性+假陽性)，陰性預(yù)測值=真陰性/(真陰性+假陰性)。所有統(tǒng)計數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS12.0軟件包處理，以χ2進行分析。

2 結(jié)果

2.1 各種指標(biāo)在甲狀腺病變中的表達情況

P53，ki-67，galectin-3，HBME-1，34βE12 和CK-19在PTC陽性表達率顯著高于結(jié)節(jié)性甲狀腺腫、甲狀腺腺瘤和橋本氏甲狀腺炎的陽性表達率(P＜0.01)(表 1)，P53，ki-67，galectin-3，HBME-1，34βE12和CK-19蛋白在PTC的表達(圖1～6)。

表1 P53，ki-67，galectin-3，HBME-1，34βE12和CK-19種指標(biāo)在甲狀腺乳頭狀癌及其他良性病變中的陽性表達Table 1 The expression of p53，ki-67，galectin-3，HBME-1，34βE12 and CK-19 in the papillary thyroid carcinoma and benign lesions(%)

2.2 各種指標(biāo)在PTC診斷的參考價值

P53，ki-67，galectin-3，HBME-1，34βE12 和 CK-19在PTC診斷的敏感性、特異性、診斷正確率、陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值方面有參考價值(表2)。

表2 P53，ki-67，galectin-3，HBME-1，34βE12和CK-19的敏感性、特異度、診斷正確率、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值Table 2 The sensitivity，specificity，diagnostic accuracy，positive prediction and negative prediction of P53，ki-67，galectin-3，HBME-1，34βE12 and CK-19(%)

3 討論

PTC是最常見的甲狀腺惡性腫瘤。世界衛(wèi)生組織腫瘤學(xué)分類將PTC界定為具有明確的濾泡細胞分化，典型的乳頭及濾泡結(jié)構(gòu)，特征性胞核改變的甲狀腺惡性上皮腫瘤［3］。但是在臨床病理診斷中，常遇到不典型病例，因此我們嘗試利用免疫組織化學(xué)方法輔助診斷PTC。

P53基因是重要的抑癌基因，編碼于17號染色體，其表達產(chǎn)物可通過多種方式參與細胞周期的調(diào)控［4］。由于基因編碼序列的改變，可導(dǎo)致野生型P53蛋白功能的喪失，突變型P53蛋白在細胞內(nèi)蓄積，進而可導(dǎo)致細胞的惡性轉(zhuǎn)化。突變性P53基因的半衰期長，在活躍生長的細胞中蛋白增高，穩(wěn)定性強，用免疫組化的方法可以檢測到。P53陽性表達提示腫瘤多為惡性、分化程度低，而P53陰性提示腫瘤多為良性、分化程度高。本研究中P53在PTC中的陽性率顯著高于各良性病變組。與文獻報道一致，因此其可以作為鑒別診斷的分子標(biāo)志物。

ki-67是一類與細胞周期相關(guān)的增生細胞核抗原，只存在于周期性細胞的細胞核內(nèi)，可準(zhǔn)確地反映細胞增殖活性。人類編碼ki-67的基因定位于第10號染色體長臂(10q25)上。國內(nèi)外文獻［5］報道多種惡性腫瘤中均存在Ki67過度表達。ki-67在腫瘤的診斷價值和預(yù)后價值已經(jīng)得到了廣泛的認可。本研究表明，ki-67在PTC中陽性表達顯著高于甲狀腺腺瘤、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫和甲狀腺炎，提示檢測ki-67的表達可為甲狀腺腫瘤的良惡性鑒別提供參考。

Galectin-3是一種分子質(zhì)量為26 000的β-半乳糖苷結(jié)合蛋白，屬于植物血凝素家族，它廣泛分布于從線蟲到人類的各級動物，其編碼基因位于染色體1P13［6］。Galectin-3在甲狀腺腺瘤中不表達或低水平表達，在大多數(shù)乳頭狀癌中高水平表達，其免疫組化染色可以輔助常規(guī)的病理檢查進行乳頭狀癌與腺瘤的鑒別診斷［7］。從上述國內(nèi)外研究結(jié)果，可以得出galectin-3對甲狀腺癌尤其是乳頭狀癌的診斷具有重要的參考價值。本研究結(jié)果顯示，galectin-3在PTC中蛋白表達陽性率顯著高于結(jié)節(jié)性甲狀腺腫、腺瘤及橋本氏甲狀腺炎，galectin-3可作為識別PTC的特異指標(biāo)。

HBME-1是間皮細胞表面微絨毛的一種抗原成分，一種酸性氨基多聚糖蛋白，主要成分為透明質(zhì)酸。這種抗體在大多數(shù)上皮型間皮瘤中呈強陽性細胞膜表達，是新近在用于甲狀腺病理診斷中的一種抗體，HBME-1在甲狀腺乳頭狀癌中呈高表達［8］。本研究發(fā)現(xiàn)，HBME-1在PTC中的陽性表達率為93.02%，在良性病變中大多數(shù)為陰性，僅少數(shù)陽性表達，良惡性組間有差異，可作為PTC診斷和鑒別診斷的依據(jù)，這一結(jié)論與以往的文獻報道相一致［9］。

34βE12高分子質(zhì)量細胞角蛋白抗體(34βE12)是前列腺基底細胞的特異性抗體，在正常甲狀腺組織中一般不表達，但在PTC中呈強陽性表達。高分子量角蛋白34βE12表達陽性率在甲狀腺癌有轉(zhuǎn)移組最高，無轉(zhuǎn)移組次之，甲狀腺乳頭狀增生組最低［10］。本研究結(jié)果，34βE12在 PTC中的陽性表達率與結(jié)節(jié)性甲狀腺腫、甲狀腺腺瘤和橋本氏甲狀腺炎的陽性表達率比較有顯著差異，可以作為良、惡性鑒別診斷的分子標(biāo)志物。

CK19是一種分子質(zhì)量為40 ku的細胞角蛋白，屬于中微絲蛋白家族，可用于標(biāo)記單層上皮(如腺上皮)，而并非PTC特異性標(biāo)志物。文獻報道，PTC可以強烈而彌漫地表達CK19，而在正常的甲狀腺組織，濾泡性腺瘤，結(jié)節(jié)性甲狀腺腫和乳頭狀增生中不表達或灶狀表達CK19。CK19表達對于PTC的診斷與鑒別有很高的應(yīng)用價值［11］。本研究結(jié)果CK19的表達率在PTC與甲狀腺良性病變中表達有差異。在6種標(biāo)記物中特異度最高，支持CK19是診斷與鑒別的良好標(biāo)志物。

綜合上述6種指標(biāo)特點，CK19、HBME-1敏感性高，且HBME-1特異性稍差，P53敏感性稍差，而特異性很高，其中 CK19準(zhǔn)確度最高，其次是 P53。Barut等［12］的研究發(fā)現(xiàn) CK19、Galectin-3 和 HBME-1聯(lián)合應(yīng)用在甲狀腺乳頭狀癌鑒別診斷中的敏感性、特異性和準(zhǔn)確度分別為89%、96.9%、93.9%。本研究為小樣本研究，實驗對象中未能包括所有類型的甲狀腺癌和甲狀腺良性病變。有待進一步研究探討它們在PTC與其他類型甲狀腺病變診斷與鑒別診斷中的作用。由于免疫組化方法存在假陽性與假陰性結(jié)果，PTC的診斷仍需以形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)。在沒有找到一種特異性標(biāo)記PTC而不標(biāo)記正常甲狀腺組織及其他甲狀腺病變的免疫標(biāo)志物之前，聯(lián)合幾種免疫標(biāo)志物檢測可以提高診斷效能。

［1］Cheung CC，Ezzat S，F(xiàn)ree man JL，et al.Immunohistochemical diagnosis of papillary thyroid carcinoma［J］.Mod Pathol，2001，14:338 －342.

［2］Beesley MF，Mclaren KM.Cytokeratin 19 and galectin-3immunohistochemistry in the differential diagnosis ofsolitary thyroid nodules［J］.Histopathology，2002，41:236 －243.

［3］Ronald A.Delellis，Ricardo V.Lloyd，Philill U.Heitz，Charis Eng. WHO classification ［J］. PatholGenet Tumours Endocrine Organs，2004，51 －61.

［4］Malagnannera R，Vellav，vigneri R，et al.P53 family nroteins in thyroid cancer［J］.Endocr Relat Coneer，2007，14:43－60.

［5］Kerkhof M，Steyerberg EW，Kusters JG，et al.Aneuploidy and high expression of p53 and Ki67 is associated with neoplastic progression in barrett esophagus［J］.Cancer Biomark，2008，4:1 －10.

［6］Raz A，Carmi P，Raz T，et al.Molecular cloning and chromosomal mapping of a human galactoside binding protein［J］.Cancer Res，1991，51:2173 －2178.

［7］彭年春，郭曉蕙，袁振芳，等.CD26/DPPⅣ、galectin-3在甲狀腺乳頭狀癌的表達及意義［J］.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2009，29:1079－1082.

［8］Wiseman SM，Melck A，Masoudi H，et al.Molecular phenotyping of thyroid tumors identifies a marker panel for differentiated thyroid cancer diagnosis ［J］.Ann Surg Oncol，2008，15:2811 －2826.

［9］Prasad ML，Huang Y，Pellegata NS，et al.Hashimoto's thyroiditis with papillary thyroid carcinoma(PTC)-likenuclear alterations express molecular markers of PTC ［J］.Histopathology，2004，45:39－46.

［10］莫祥蘭，周祥禎，丁志敏，等.高分子量角蛋白在甲狀腺乳頭狀癌診斷中的作用［J］.四川大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2003，34:748－749.

［11］王曉紅，劉雨飛，鮑宇濃，等.甲狀腺乳頭狀癌RET，CK19，TG，ki-67的表達［J］.臨床與實驗病理學(xué)雜志，2006，22:692－695.

［12］Barut F，kandemir NO，Bektas S，et al.Universal markers of thyroid malignancies:Galectin-3，HBME-1，and cytokeratin-19 ［J］.Endocr Pathol，2010，21:80 －89.