呂青志，李珂珂，劉德勝，張曉帆（濱州醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，山東煙臺(tái) 264003）

醋酸潑尼松龍（Prednisolone acetate，PA）為腎上腺皮質(zhì)激素類(lèi)藥物，具有抗炎、抗過(guò)敏和抑制免疫等多種藥理作用，臨床主要用于活動(dòng)性風(fēng)濕、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療。目前，國(guó)內(nèi)該藥的制劑形式有醋酸潑尼松龍注射液、醋酸潑尼松龍片和醋酸潑尼松龍滴眼液。由于長(zhǎng)期全身給藥易引起庫(kù)欣綜合征、并發(fā)感染等不良反應(yīng)，患者順應(yīng)性較差[1]。為此，筆者將醋酸潑尼松龍制備成微乳經(jīng)皮給藥制劑，以提高其經(jīng)皮滲透速率和經(jīng)皮滲透量，維持病變部位較高的藥物濃度，以減少全身治療引起的不良反應(yīng)，提高患者的順應(yīng)性[2，3]。同時(shí)，筆者采用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定微乳中醋酸潑尼松的含量，藥物與輔料及溶劑得到了良好的分離。

1 儀器與試藥

600-2489型HPLC儀（美國(guó)waters公司）；ODS-2 C18柱（大連依利特有限公司）；EL-204型高精度電子分析天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）；SH23-2型恒溫磁力攪拌器（上海梅穎浦儀器儀表制造公司）；KQ5200DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

醋酸潑尼松龍（河南利華制藥有限公司，含量：99.4%，批號(hào)：K07A20091003）；醋酸潑尼松龍對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院）；醋酸潑尼松龍微乳（濱州醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院自制）；空白微乳（濱州醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院自制）；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Hypersil ODS-2 C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（65∶35）；檢測(cè)波長(zhǎng)：243 nm；流速：1.0 mL·min－1；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：20 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品貯備液的制備 精密稱(chēng)取醋酸潑尼松龍對(duì)照品20 mg，置于100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密稱(chēng)取醋酸潑尼松龍微乳0.1 g，置于100 mL容量瓶中，加甲醇超聲破乳（40 W，15 min），甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 空白微乳的制備 精密稱(chēng)取空白微乳0.1 g，置于100 mL容量瓶中，加甲醇超聲破乳（40 W，15 min），甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

分別制備一定濃度的醋酸潑尼松龍對(duì)照品溶液、空白微乳破乳液和醋酸潑尼松龍微乳破乳液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，色譜見(jiàn)圖1。由圖1可見(jiàn)，醋酸潑尼松龍各組分間分離良好，對(duì)照品的保留時(shí)間約為6.6 min，空白微乳只在3 min之前有色譜峰，表明輔料和溶劑對(duì)藥物含量的測(cè)定無(wú)干擾。

2.4 線性關(guān)系考察

精密量取對(duì)照品貯備液適量，加甲醇稀釋成濃度為0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、10.0 μg?mL－1的對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析。以濃度（C）為橫坐標(biāo)，峰面積（A）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程A＝44 755C－5 710.2（r＝0.999 9）。結(jié)果表明，醋酸潑尼松檢測(cè)濃度在0.5～10.0μg?mL－1范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

圖1 高效液相色譜圖A.醋酸潑尼松龍對(duì)照品；B.空白微乳；C.醋酸潑尼松龍微乳；1.醋酸潑尼松龍F(tuán)ig 1 HPLC chromatogramsA.prednisolone acetate control；B.blank microemulsion；C.prednisolone acetate microemulsion；1.prednisolone acetate

2.5 精密度試驗(yàn)

取“2.2”項(xiàng)下的對(duì)照品貯備液（1.0、3.0、10.0 μg?mL－1）適量，各重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)得日內(nèi)精密度和日間精密度，結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知，3個(gè)濃度的日內(nèi)、日間精密度RSD均＜2%，表明該方法精密度良好。

表1 日內(nèi)和日間精密度試驗(yàn)結(jié)果（n＝5）Tab 1 Result of intra-day and inter-day RSD tests

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.2”項(xiàng)下的對(duì)照品貯備液（3.0 μg?mL－1）適量，室溫放置，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別于0、2、4、6、8、12、24 h進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果，RSD＝1.28%，表明樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱(chēng)取醋酸潑尼松龍微乳40 mg（約相當(dāng)于醋酸潑尼松龍0.4 mg），共9份，置于100 mL容量瓶中，按照樣品中醋酸潑尼松量的80%、100%、120%分別精密加入對(duì)照品貯備液（醋酸潑尼松龍的濃度為0.2 mg?mL－1）1.6、2.0、2.4 mL，按“2.2”項(xiàng)下方法制備溶液，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過(guò)，進(jìn)樣分析，加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

2.8 樣品含量測(cè)定

取3批（每批5份）醋酸潑尼松龍微乳樣品適量，分別按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過(guò)，進(jìn)樣分析，記錄峰面積并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算供試品中醋酸潑尼松龍的含量（標(biāo)示量%），結(jié)果見(jiàn)表3。

2.9 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取3批醋酸潑尼松龍微乳樣品灌封于安瓿中，室溫（25℃）放置，于0、10、20、30 d取樣，觀察外觀，測(cè)定放置前、后的藥物含量，結(jié)果見(jiàn)表4。

表2 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab 2 Results of recovery tests

表3 樣品含量測(cè)定結(jié)果（標(biāo)示量%）Tab 3Results of content determination（labeled amount%）

表4 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果（±s，n＝5）Tab 4Result of stability test（±s，n＝5）

表4 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果（±s，n＝5）Tab 4Result of stability test（±s，n＝5）

時(shí)間/d 0 10 20 30外觀無(wú)色、透明無(wú)色、透明無(wú)色、透明無(wú)色、透明含量/%100.2±1.5 99.6±0.7 99.3±1.3 98.9±1.1黏度/mm2·s－1 7.19±0.13 7.24±0.32 7.33±0.45 7.34±0.37

由表4可知，室溫保存30 d時(shí)樣品色澤、澄明度未變，無(wú)分層、絮凝現(xiàn)象，含量無(wú)顯著變化，表明穩(wěn)定性較好。

3 討論

3.1 破乳方法的選擇

微乳含量的測(cè)定涉及破乳提取藥物的過(guò)程，破乳的方法有物理法和化學(xué)法。物理法包括加熱和高壓電破乳，前者難以在短時(shí)間內(nèi)破乳，后者不適于實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用。本研究采用化學(xué)破乳法，通過(guò)加入破乳劑破壞乳化劑或界面膜改變分散體系的界面性質(zhì)以達(dá)到破壞微乳結(jié)構(gòu)的目的[4]。采用甲醇作為破乳劑，所得溶液澄清透明，且不干擾測(cè)定，符合檢驗(yàn)要求。

3.2 分析方法的選擇

經(jīng)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，采用紫外分光光度法進(jìn)行含量測(cè)定時(shí)，微乳成分吐溫80及油酸在醋酸潑尼松龍的最大吸收波長(zhǎng)243 nm處有吸收，干擾醋酸潑尼松龍含量的測(cè)定。因此，筆者采用HPLC法測(cè)定。

3.3 流動(dòng)相的選擇

參照有關(guān)文獻(xiàn)[5～7]，選擇甲醇-水作為流動(dòng)相，對(duì)流動(dòng)相的不同比例進(jìn)行篩選。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，甲醇-水（65∶35）為最佳流動(dòng)相，輔料和溶劑對(duì)醋酸潑尼松龍無(wú)干擾，保留時(shí)間在6.6 min，峰形較好。

綜上所述，該方法具有靈敏度高、專(zhuān)屬性強(qiáng)、回收率高的特點(diǎn)，能夠排除輔料的干擾，可用于醋酸潑尼松龍微乳的含量測(cè)定。

[1]王 馨，黃 華.醋酸潑尼松龍固體脂質(zhì)納米粒的試制[J].中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，2007，38（7）：499.

[2]Chen HB，Chang XL，Weng T，et al.A study of microemulsion systems for transdermal delivery of triptolide[J].J Control Rel，2004，98（3）：427.

[3]Zhu W，Yu A，Wang W，et al.Formulation design of microemulsion for dermal delivery of penciclovir[J].Int J Pharm，2008，360（1-2）：184.

[4]董武軍，劉玉玲.HPLC法測(cè)定黃芩素靜脈注射亞微乳劑的含量[J].藥物分析雜志，2009，29（12）：2 121.

[5]林思榮.HPLC法測(cè)定醋酸潑尼松龍注射液的含量[J].海峽藥學(xué)，2008，20（12）：43.

[6]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（二部）[S].2010年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：847.

[7]常 明，李 靖，李淑芳.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定強(qiáng)氯滴眼液中 2組分的含量[J].中國(guó)藥房，2005，16（14）：1 106.