陳志恒 孫 玲 全吳敏

廣東省廣州市婦女兒童醫(yī)療中心生殖醫(yī)學中心

探討染色體核型對夫精人工授精(AIH)結局的影響，本文對本生殖中心行AIH治療的不孕夫婦的細胞遺傳學檢查結果以及治療結局進行資料分析，報告如下。

1 資料與方法

1.1 對象

2004年1月～2009年11月在本中心就診的245對不孕夫婦，其中原發(fā)不孕147例(60.0%)，繼發(fā)不孕98 例(40.0%);女方年齡 32.2 ±4.0 歲，男方年齡34.7 ±4.5 歲;不孕時間4.5 ±3.1 年。治療前男女雙方均按衛(wèi)生部相關要求進行排查，符合人工授精適應證，無人工授精禁忌證，245對夫婦共行AIH 422周期。

1.2 方法

1.2.1 中期染色體G顯帶分析不孕夫婦術前常規(guī)行染色體檢查，取抗凝血，接種于1640培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)72h，常規(guī)制片、G顯帶觀察，必要時行C顯帶、R顯帶觀察。每例計數(shù)30個中期核型，分析3個核型。如疑嵌合體，計數(shù)100個中期分裂相。

1.2.2 夫精人工授精①自然周期:于月經(jīng)第10～12天開始經(jīng)陰道B超監(jiān)測卵泡發(fā)育，當優(yōu)勢卵泡徑線＞14mm時，結合尿黃體生成激素(LH)監(jiān)測，出現(xiàn)尿LH峰后12～36 h行人工授精。②氯米芬促排卵周期:于月經(jīng)第5天給予氯米芬50～100mg/d×5d，停藥2d后開始監(jiān)測卵泡，視卵泡發(fā)育情況可加用尿促性素(hMG，珠海麗珠醫(yī)藥有限公司)75～150U/d，卵泡直徑達20mm時給予人絨毛膜促性腺激素(hCG)5 000～10 000U肌注，24～36h后行宮腔內(nèi)人工授精(IUI);③hMG組:在月經(jīng)周期的第3～5天開始注射hMG 150U/d，連續(xù)5d，根據(jù)卵泡發(fā)育調(diào)整劑量直至成熟后停藥。當LH峰出現(xiàn)或卵泡直徑平均達18mm時，注射hCG 5 000～10 000 U，24～36h后行 AIH。

1.2.3 妊娠判斷標準AIH術后14d通過血 βhCG檢測確定是否妊娠。妊娠者術后5周B超檢查了解胚胎情況，見妊娠囊、卵黃囊、胚芽及胎心搏動者為臨床妊娠。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，妊娠率比較采用χ2檢驗。

2 結果

2.1 染色體核型

245對不孕夫婦共檢出染色體異常及多態(tài)49例。其中平衡易位2例(0.41%)，4號、9號染色體臂間倒位 15例(3.06%)，Y染色體多態(tài) 2例(0.41%)，其他染色體多態(tài)30例(6.12%)。其中有2對夫婦同時為染色體臂間倒位，1對夫婦男方為Y染色體多態(tài)，女方為染色體臂間倒位。見表1。

2.2 AIH 結局

199對染色體核型正常夫婦共經(jīng)過352個AIH治療周期，臨床妊娠52例，周期妊娠率為14.77%。染色體核型異常和多態(tài)性49例中，2例染色體平衡易位行2個周期AIH均未孕，13對夫婦共查出15例染色體臂間倒位，共行AIH 21周期，臨床妊娠2例，周期妊娠率為9.52%，與核型正常組比較無差異(P＞0.05)。2例Y染色體多態(tài)行3個周期AIH均未孕。30例常染色體多態(tài)夫婦行AIH45周期，臨床妊娠13例，周期妊娠率(28.89%)與正常染色體組相比具有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。見表1。

3 討論

3.1 平衡易位對AIH妊娠率的影響

平衡易位攜帶者由于沒有造成染色體片段的增加和減少，一般個體表型正常，但由于其配子多不平衡，在形成配子的減數(shù)分裂前期Ⅰ的粗線期可形成四價體，從而產(chǎn)生18種類型的配子，其中只有1種正常，1種為表型正常的平衡易位攜帶者，其他均為單體或部分單體。三體或部分三體，這種不平衡配子是導致畸形、死胎及反復流產(chǎn)的主要原因［1］。但也有學者報道了194例平衡易位攜帶者中有20.1%的夫婦得到了正?；蚱胶庖孜缓蟠?，提示平衡易位攜帶者也有成功受孕并生育正常后代的可能性［2］。本研究中2例平衡易位者行2個周期AIH均未受孕，由于例數(shù)過少，需進一步總結研究。

表1 不育夫婦染色體核型異常和多態(tài)分類及AIH結局

3.2 臂間倒位對AIH妊娠率的影響

臂間倒位幾乎涉及每條染色體，其中以9號染色體的發(fā)生率最高，在一般人群中可達0.82%［3］，有關9號染色體臂間倒位的生物學效應，有學者認為由于倒位并不導致遺傳物質的丟失，不具有病理學意義［4］。但也有報道認為當臂間倒位染色體攜帶者的生殖細胞發(fā)生減數(shù)分裂時，按同源染色體節(jié)段相互配對，形成特有的倒位環(huán)，在環(huán)內(nèi)進行交換可產(chǎn)生4種不同類型配子，一種完全正常，一種為倒位攜帶者，另兩種為部分重復和部分缺失。前兩種與正常細胞受精后一種發(fā)育成正常個體，另一種為倒位攜帶者，后兩種為不平衡配子，胚胎很難存活，將導致流產(chǎn)和死胎［5］。本研究中245對夫婦490例染色體檢查中9號染色體臂間倒位檢出率(2.86%)遠高于正常人群(0.82%)。此外本研究中臂間倒位行21個周期AIH，共獲得2例妊娠，周期妊娠率9.52%，與染色體正常組相比無統(tǒng)計學差異，表明臂間倒位并不影響AIH成功率，這與周友泉等［6］提出的染色體臂間倒位的主要臨床效應是不良孕產(chǎn)史而非不孕不育的觀點相符。

3.3 Y染色體多態(tài)性對AIH妊娠率的影響

關于Y染色體多態(tài)性是否會引起遺傳效應一直存在爭議。有學者認為，大Y染色體是一種正常的染色體多態(tài)性變異，不會引起臨床效應［7］。也有研究發(fā)現(xiàn)，大Y染色體與自然流產(chǎn)、胚胎停育、死胎等不良孕產(chǎn)史有關［8］。在輔助生育技術研究中，有作者認為大Y染色體對體外受精－胚胎移植的胚胎發(fā)育及近期妊娠結果均無顯著性影響［9］，本研究中Y染色體多態(tài)檢出率0.41%，3個周期AIH均未獲妊娠。由于例數(shù)過少有待進一步總結。

3.4 其他常染色體多態(tài)性對AIH妊娠率的影響

常染色體的多態(tài)主要以異染色質變異為主，含有高度重復DNA的異染色質尤為明顯，結構異染色質集中分布于著絲粒、端粒、隨體、次縊痕和Y染色體長臂。異染色質在著絲粒功能方面起著至關重要的作用，是姐妹染色單體結合和染色體分離所必需的［10］。異染色質的異常有可能影響減數(shù)分裂時染色體配對聯(lián)會和配子的形成，導致生育方面的異常。本研究中染色體多態(tài)性主要表現(xiàn)為隨體的有無和個數(shù)(D組和G組5對染色體)、副縊痕的增長等，檢出率6.12%，行AIH 45個周期，共獲得13例妊娠，周期妊娠率28.89%高于正常染色體組，因此染色體多態(tài)性表現(xiàn)中隨體變異和副縊痕的增長等對AIH妊娠率并無負面影響。

綜上所述，本研究檢測的染色體臂間倒位與核型正常者在AIH治療后臨床妊娠率未見差異，而常染色體多態(tài)核型攜帶者與核型正常者應用AIH治療后臨床妊娠率有差異，常染色體多態(tài)對AIH妊娠率無負面影響，由此推測，染色體臂間倒位和多態(tài)性并不是生育的絕對禁忌證，即使是染色體臂間倒位和多態(tài)性核型攜帶者，其成功妊娠并生育出表型正?；町a(chǎn)兒的可能性并不低于核型正常者。但本研究AIH人群均為不孕癥群體，其染色體異常及多態(tài)率(10%)高于一般人群(0.5%)［11］，因此，對將要進行輔助生殖治療的夫婦進行細胞遺傳學檢查非常必要。雖然部分染色體異常和多態(tài)性并不影響AIH的妊娠率和結局，但仍有將異常染色體和基因傳給后代的可能性，且女性攜帶者較男性更易出現(xiàn)異常妊娠的情況，應給以患者充分知情選擇權。

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2 張月萍，徐建忠，殷民，等.染色體平衡易位攜帶者妊娠風險及妊娠結局的研究［J］.中華婦產(chǎn)科雜志，2006，41(9):592－596.

3 李永全，鄭克勤，周汝斌，等.染色體臂間倒位的遺傳學效應分析［J］.廣東醫(yī)學院學報，1999，17(2):94－98.

4 李麓蕓，夏家輝，戴和平，等.染色體臂間倒位和臂內(nèi)倒位的遺傳咨詢［J］.遺傳與疾病，1998，2(1):35－38.

5 王新，劉鴻鶴，朱華，等.2700例遺傳咨詢者外周血染色體分析［J］.中國優(yōu)生與遺傳雜志，1998 ，6(4):33－38.

6 周友泉，史彩虹，劉芳，等.廈門地區(qū)不孕不育患者的染色體多態(tài)性分析［J］.中國優(yōu)生與遺傳雜志，2009，17(5):57－61.

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10 Zhimulev IF，Beliaeva ES.Heterochromatin，gene position effect and gene silencing［J］.Genetica，2003，39(2);187 －201.

11 周煥庚，夏家輝，張思促.人類染色體［M］.北京:科學出版社，1987:189.