宋更申 馮麗 王熳 張西如 張軼華 甄曉蘭 張菁

·實(shí)驗(yàn)研究·

GC法測(cè)定阿奇霉素原料中三氯甲烷的殘留量

宋更申 馮麗 王熳 張西如 張軼華 甄曉蘭 張菁

目的建立毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定阿奇霉素中三氯甲烷殘留量的方法。方法色譜柱為DB-624石英毛細(xì)管柱，載氣為氮?dú)?，柱溫采用程序升溫，檢測(cè)器為ECD檢測(cè)器，以N，N-二甲甲酰胺為溶劑。結(jié)果三氯甲烷檢測(cè)濃度的線性范圍為0.6～60 μg/ml，平均回收率為99.5%，定量限為0.98pg。3批樣品中三氯甲烷殘留量均符合規(guī)定。結(jié)論本方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、可用于阿奇霉素原料中三氯甲烷殘留量的測(cè)定。

氣相色譜法;阿奇霉素;三氯甲烷

阿奇霉素(Azithromycin)是由紅霉素衍生的15元大環(huán)內(nèi)酯類廣譜抗生素，具有優(yōu)于母體化合物的生物活性和藥理特性。阿奇霉素制備工藝中用到了三氯甲烷，根據(jù)《中國(guó)藥典》2010年版［1］的規(guī)定，應(yīng)建立三氯甲烷的測(cè)定方法，考察樣品中三氯甲烷的殘留量，并應(yīng)符合三類溶劑殘留限度要求。本文參考相關(guān)文獻(xiàn)［2，3］介紹的方法，建立了毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定阿奇霉素中三氯甲烷殘留量的方法。可為藥品標(biāo)準(zhǔn)增訂殘留溶劑檢查項(xiàng)提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilent 6890型氣相色譜儀，SartoriusBP211 d型電子天平。三氯甲烷對(duì)照品和色譜純N，N-二甲基甲酰胺均購(gòu)自美國(guó)Sigma公司。阿奇霉素(國(guó)內(nèi) S公司，批號(hào):20110601、20110602、20110603)。載氣為高純氮?dú)?純度大于99.999%)。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱為DB-624毛細(xì)管柱(60 m 530 μm 3 μm)，柱溫:80℃維持5 min，以35℃/min的速率升至220℃，維持10 min;分流進(jìn)樣方式，分流比為10∶1，進(jìn)樣口溫度為180℃;采用ECD檢測(cè)器，檢測(cè)器溫度為300℃，尾吹25 ml/min;載氣為氮?dú)猓魉贋?.5 ml/min，進(jìn)樣量為1 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液 精密稱取三氯甲烷對(duì)照品約12 mg，置200 ml容量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，精密量取10 ml，置100 ml容量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 精密稱取本品約1.0 g，置10 ml容量瓶中，加N，N-二甲基甲酰胺溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 取“2.2”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液和供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件注入氣相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果三氯甲烷的理論板數(shù)為30029，溶解介質(zhì)(N，N-二甲基甲酰胺)不干擾三氯甲烷的測(cè)定。2.4 線性關(guān)系 取三氯甲烷對(duì)照品，分別用N，N-二甲基甲0.6、1.2、6.0、12.0、24.0、60.0g/ml酰胺配置成濃度為 μ的溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積(A)為縱坐標(biāo)，濃度(C)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，線性方程為:A=1025.89 c+880.77，相關(guān)系數(shù)為:r=0.9999，線性范圍為:0.6 ～60 μg/ml。

3 討論

DB-624是中極性毛細(xì)管柱，適用于多核芳烴、酚、酯、碳?xì)浠衔?、藥物及醇等，比較適合用于殘留溶劑分析。在該研究條件下三氯甲烷和溶解介質(zhì)可達(dá)到有效分離，且峰形好，靈敏度高，重現(xiàn)性好。

《中國(guó)藥典》2010年版性狀項(xiàng)下規(guī)定:阿奇霉素在甲醇、丙酮、三氯甲烷、無(wú)水乙醇或稀鹽酸中易溶，在乙腈中溶解，在水中幾乎不溶。由于本文采用直接進(jìn)樣方式，嘗試用DMF和DMSO作溶劑，樣品在兩溶劑中的溶解性均較好，選擇沸點(diǎn)較低的DMF作溶解介質(zhì)。DMF對(duì)三氯甲烷有較好的溶解與提取能力，因其沸點(diǎn)高(152.8℃)，在色譜柱上保留時(shí)間長(zhǎng)，可使揮發(fā)性較強(qiáng)的三氯甲烷(沸點(diǎn)為61～62℃)先出峰，并且選擇程序升溫大大縮短了分析時(shí)間。

本方法三氯甲烷的定量限為0.98 pg，靈敏度完全可以滿足阿奇霉素中三氯甲烷殘留量測(cè)定的需要。本實(shí)驗(yàn)測(cè)得3批樣品中三氯甲烷均未檢出，說(shuō)明該原料藥后續(xù)工藝中對(duì)三氯甲烷的去除較為完全，工藝較好。

［1］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部).北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2010:61-65．

［2］ 宋更申，郭毅，付焱，等.毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定鹽酸美金剛原料中三氯甲烷的殘留量.中國(guó)藥房，2010，21(37):3536-3537．

［3］ 宋更申，姜建國(guó)，劉紅莉，等.頂空氣相色譜法測(cè)定美羅培南中有機(jī)溶劑的殘留量.中國(guó)藥房，2010，21(5):447-448．

050011 石家莊，河北省食品藥品檢驗(yàn)院

2.5 精密度試驗(yàn) 取三氯甲烷對(duì)照品和一批阿奇霉素原料藥(批號(hào):20110601)，按“2.2”項(xiàng)下的方法制備對(duì)照品溶液和供試品溶液，對(duì)照品溶液制備1份，供試品溶液平行制備6份，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件注入氣相色譜儀，對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，三氯甲烷對(duì)照品溶液峰面積的RSD為1.0%，按外標(biāo)法計(jì)算三氯甲烷的殘留量，結(jié)果3批樣品中三氯甲烷均未檢出。表明精密度良好。

2.6 定量限試驗(yàn) 精密稱取三氯甲烷對(duì)照品，加入N，N-二甲基甲酰胺逐級(jí)稀釋制成適宜濃度的對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件注入氣相色譜儀，當(dāng)信噪比約為10時(shí)計(jì)算三氯甲烷的定量限，結(jié)果定量限為0.98pg。

2.7 回收率試驗(yàn) 分別稱取同一批阿奇霉素原料藥(批號(hào):20110601)各約0.5 g，共9份，精密稱定，分別置5 ml容量瓶中，分別加入 0.06 mg/ml的對(duì)照品溶液 0.40 ml、0.50 ml、0.60 ml，各3份，再分別用N，N-二甲基甲酰胺溶解并稀釋至刻度，搖勻，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件注入氣相色譜儀，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，三氯甲烷的平均回收率為99.5%，RSD分別為0.6%。

2.8 樣品中三氯甲烷的殘留量測(cè)定 取三氯甲烷對(duì)照品和3批樣品，按“2.2”項(xiàng)下的方法制備對(duì)照品溶液和供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件注入氣相色譜儀，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算三氯甲烷的殘留量，結(jié)果3批樣品中三氯甲烷均未檢出。