楊瑞瑞 吳 芳 郄留霞 陜西省食品藥品檢驗(yàn)所 （西安 710061）

冰片為常用中藥，具有開竅醒神，清熱止痛的功效。多用于熱病神昏、驚厥，中風(fēng)痰厥，氣郁暴厥，中惡昏迷，胸痹心痛，目赤，口瘡，咽喉腫痛，耳道流膿。多入丸、散、片、膠囊等劑型使用。冰片、天然冰片、艾片在《中國藥典》2010年版一部中均有收載，【含量測(cè)定】項(xiàng)下分別測(cè)定龍腦、右旋龍腦、左旋龍腦，并且在各自的【檢查】項(xiàng)下收載了樟腦的檢查。

我們查到的《中國藥典》2010年版一部、《中成藥地標(biāo)升國標(biāo)》、《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑》、《新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)》等現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中共涉及到的含冰片制劑約890個(gè)品種，15類劑型，僅有74個(gè)品種在制劑項(xiàng)下對(duì)冰片含量進(jìn)行控制。大部分含冰片的制劑中沒有冰片的控制指標(biāo)，或有的僅在【鑒別】項(xiàng)下通過薄層色譜法、化學(xué)反應(yīng)等方法進(jìn)行控制。

為了有效控制含冰片制劑中冰片的質(zhì)量，通過大量的實(shí)驗(yàn)工作，建立了含冰片制劑中冰片的含量測(cè)定及樟腦限量檢查方法，并對(duì)部分常用制劑進(jìn)行了測(cè)定。

1 儀器、試藥及試劑 1.1 儀器 Agilent 6890N氣相色譜儀，F(xiàn)ID檢測(cè)器；XWK－Ⅲ無油空氣泵（天津華生分析儀器廠）；Sartorius AG ME 235S型電子分析天平。超聲波清洗器（無錫超聲電子設(shè)備有限公司）。

1.2 對(duì)照品及試劑 冰片對(duì)照品（批號(hào)為11671－200401），天然冰片對(duì)照品（批號(hào)為 111688－200501），樟腦對(duì)照品（批號(hào)為110747－200206）均購自中國藥品生物制品檢定所；水楊酸甲酯、乙醇、無水乙醇、乙酸乙酯等試劑均為分析純。

1.3 樣品 樣品均為市售，陰性對(duì)照樣品系按處方和生產(chǎn)工藝自制不含冰片的制劑。

2 對(duì)照品溶液、內(nèi)標(biāo)溶液及供試品溶液的制備

2.1 內(nèi)標(biāo)溶液的制備 精密稱取水楊酸甲酯2.0g，置于1000mL容量瓶中，加入乙酸乙酯至刻度，搖勻，作為貯備液；精密量取貯備液250mL，置于1000mL容量瓶中，加入乙酸乙酯至刻度，搖勻即得。

2.2 對(duì)照品溶液制備及校正因子計(jì)算 取冰片對(duì)照藥材適量，精密稱取兩份，分別置25mL量瓶中，加內(nèi)標(biāo)溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取2μL，注入氣相色譜儀，計(jì)算校正因子。見表1。

表1 校正因子計(jì)算結(jié)果

2.3 供試品溶液的制備 2.3.1 片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、散劑：樣品研細(xì)后取樣適量（使制成的溶液中冰片含量約為0.4mg／mL），置適宜的容量瓶中，加內(nèi)標(biāo)適量超聲15min，放涼，加內(nèi)標(biāo)溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3.2 液體制劑：注射劑、口服液等可用內(nèi)標(biāo)液直接稀釋制成供試品溶液（含冰片約0.4mg／mL）。

2.3.3 大蜜丸：取大蜜丸，剪碎，取適量，精密稱定，精密加入硅藻土等量，研勻，精密稱取適量，置錐形瓶中，精密加適量?jī)?nèi)標(biāo)液密塞，稱定重量，超聲處理15min，放冷，再稱定重量，用內(nèi)標(biāo)液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，取續(xù)濾液，即得（含冰片約0.4mg／mL）。

2.3.4 膏劑：取適量膏劑，剪成條狀，置500mL圓底燒瓶中，加入150mL水，連結(jié)揮發(fā)油提取器，由揮發(fā)油測(cè)定器上端加水至溢流入圓底燒瓶為止，加入1mL甲苯，加熱回流4h，靜置冷卻，取甲苯層置于適宜的量瓶，并用適量的乙酸乙酯洗滌揮發(fā)油測(cè)定器，洗滌液并入量瓶中，加適量?jī)?nèi)標(biāo)貯備溶液后，用乙酸乙酯定容至刻度，搖勻即得（每mL含內(nèi)標(biāo)0.5mg、含冰片約為0.4mg）。

3.試驗(yàn)方法與結(jié)果 3.1 色譜條件選擇 條件一：采用彈性石英毛細(xì)管柱（柱長(zhǎng)30m，內(nèi)徑0.320mm，膜厚度0.50μm）DB－WAX（聚乙二醇－20M，Agilent公司）；程序升溫：初始溫度120℃，以每min10℃的速率升溫至180℃，保持3min；進(jìn)樣口溫度為220℃，檢測(cè)器溫度為250℃；分流比為5：1。

條件二：程序升溫：初始溫度110℃，以每min10℃的速率升溫至180℃，保持3min；其余同條件一。

條件三：采用彈性石英毛細(xì)管柱（柱長(zhǎng)30m，內(nèi)徑0.320mm，膜厚度0.25μm），HP－FFAP（聚乙二醇硝基苯改性，Agilent公司）；程序升溫：初始溫度120℃，以每分鐘10℃的速率升溫至180℃，保持3min；其余同條件一。

條件四：采用彈性石英毛細(xì)管柱（柱長(zhǎng)30m，內(nèi)徑0.320mm，膜厚度0.25μm）OV－17（苯基甲基硅酮，涂布濃度為10%）；其余同條件一。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，各條件下（除條件四外），分離度、理論塔板數(shù)等相關(guān)參數(shù)無顯著差異，龍腦、異龍腦及內(nèi)標(biāo)物（水楊酸甲酯）色譜峰分離度均大于4，理論板數(shù)按龍腦峰計(jì)算均不低于4000。條件四下，樟腦和龍腦、異龍腦不能達(dá)到基線分離。綜合考慮后選擇色譜條件一作為實(shí)驗(yàn)用色譜方法。

3.2 提取溶劑選擇 精密稱取3份研細(xì)后的樣品（冠脈寧膠囊）適量（約含冰片10mg），分別置于25mL；量瓶中，各加內(nèi)標(biāo)溶液（內(nèi)標(biāo)溶液分別用乙酸乙酯、乙醇和無水乙醇配制）20mL，超聲15min，放冷，加內(nèi)標(biāo)溶液至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過后，精密吸取2μL，注入氣相色譜儀，測(cè)得峰面積，計(jì)算含量。

試驗(yàn)結(jié)果表明，分別用乙酸乙酯、乙醇和無水乙醇作為溶劑，測(cè)定樣品中冰片含量，結(jié)果沒有顯著差異。乙酸乙酯提取的供試品溶液，雜質(zhì)相對(duì)較少，并且可用于對(duì)液體制劑進(jìn)行萃取，和《中國藥典》2010年版一部中冰片含量測(cè)定所用溶劑一致。故供試品溶液的提取（萃?。┻x乙酸乙酯作為溶劑。

3.3 專屬性試驗(yàn) 按測(cè)定用樣品的處方和生產(chǎn)工藝，自制不含冰片的陰性對(duì)照樣品，按照供試品溶液的制備方法，制成陰性對(duì)照品溶液。按擬定的色譜法測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果表明本方法測(cè)定冰片具有專屬性。見圖1。

圖1 對(duì)照品、樣品、陰性溶液氣相色譜圖

3.4 線性關(guān)系考察 精密稱取冰片對(duì)照藥材122.56mg，置25mL容量瓶中，加內(nèi)標(biāo)溶液（水楊酸甲酯濃度0.5046mg／mL）至刻度，搖勻，制成每1mL中含冰片4.9024mg的溶液，作為儲(chǔ)備液；精密吸取上述儲(chǔ)備液適量，依次加內(nèi)標(biāo)溶液（每1mL中含水楊酸甲酯0.5046mg）稀釋，分別制成1.9610mg·mL－1、0.9805mg· mL－1、0.4902mg· mL－1、0.1961mg· mL－1、0.0980mg· mL－1、0.0490mg·mL－1的溶液做為對(duì)照溶液；分別吸取上述儲(chǔ)備液及稀釋后的各溶液2μL，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，計(jì)算峰面積。以冰片峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積之比對(duì)進(jìn)樣量進(jìn)行線性回歸，求得方程為y＝1.3582x-0.0108，r＝1.00；表明冰片在0.098048μg～9.8048μg間呈良好的線性關(guān)系。

3.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液2μL，注入氣相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜峰，計(jì)算冰片峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積之比。結(jié)果比值均值為1.1165（n＝6），RSD為0.62%。表明精密度良好。

3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液，每隔4h進(jìn)樣1次，測(cè)定樣品溶液在24h內(nèi)的峰面積，計(jì)算冰片峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積之比。結(jié)果比值均值為1.1158（n＝7），RSD為1.35%，表明樣品溶液制備后在24h內(nèi)進(jìn)樣穩(wěn)定性較好。

3.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取冠脈寧膠囊樣品，研勻，取約0.20g，精密稱定，置錐形瓶中，精密量取內(nèi)標(biāo)溶液（每1mL中含水楊酸甲酯為0.5046mg）10mL，稱定重量，超聲15min后，放冷，再次稱定重量，用內(nèi)標(biāo)溶液補(bǔ)足減失的重量。同法制備7份供試品溶液。按擬定的色譜方法測(cè)定，計(jì)算含量。結(jié)果冰片含量值為20.50mg·g－1，RSD為1.22%，表明重復(fù)性良好。

3.8 加樣回收率試驗(yàn) 取冠脈寧膠囊樣品，研勻，取約0.1g（含冰片為20.50mg／g），精密稱取7份，分別置于具塞錐形瓶中并依次編號(hào)1～7。精密稱取冰片對(duì)照藥材20.6mg置100mL容量瓶中，加內(nèi)標(biāo)溶液（每1mL中含水楊酸甲酯為0.5046mg）溶解至刻度，制成對(duì)照品溶液。精密量取對(duì)照品溶液10mL分別加入1～7號(hào)錐形瓶中，同供試品溶液制成測(cè)定用溶液，按擬定的色譜方法測(cè)定，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果表明加樣回收率良好。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及結(jié)果見表2。

表2 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖2

3.9 樣品測(cè)定結(jié)果 測(cè)定了282批含冰片制劑中冰片的含量，結(jié)果相差懸殊，統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表3。

表3 樣品中冰片測(cè)定結(jié)果

從測(cè)定結(jié)果可看出，除11批膠囊劑外，其他樣品中冰片含量98%達(dá)不到投料量的85%。說明樣品中普遍存在冰片投料不足或冰片質(zhì)量欠佳的情況。

4 含量測(cè)定限度制定 根據(jù)樣品中冰片的測(cè)定結(jié)果，結(jié)合冰片在制劑中均以原藥粉入藥，樣品中冰片的含量應(yīng)達(dá)到投料量的85%～115%。

5 討 論 采用氣相色譜法測(cè)定含冰片制劑中冰片的含量，方法簡(jiǎn)單，靈敏度高，可有效控制含冰片制劑中冰片的含量。

該方法可同時(shí)用于含冰片制劑中樟腦的限量檢查，也可用于其它制劑中薄荷腦、樟腦、異龍腦、龍腦、水楊酸甲酯等的含量測(cè)定。色譜圖見圖2。

對(duì)內(nèi)標(biāo)物進(jìn)行了選擇試驗(yàn)，萘也可作為本實(shí)驗(yàn)的內(nèi)標(biāo)物。

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