周建川 趙麗紅 黃 薇 馮光德 計(jì) 成 馬秋剛*

(1.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，動物營養(yǎng)學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100193；2.鐵騎力士集團(tuán)，綿陽 621006)

魚油中含有功能性的營養(yǎng)成分二十碳五烯酸(eicosapntemacnioc acid，EPA)、二十二碳六烯酸(docosahexaenic acid，DHA)等多不飽和脂肪酸(PUFA)，具有促進(jìn)體內(nèi)飽和脂肪酸代謝等獨(dú)特的生物學(xué)功能。由于魚油的不飽和程度高，在貯存過程中，尤其是在高溫高濕的環(huán)境條件容易被氧化，產(chǎn)生有害的初級、次級氧化物，發(fā)生酸敗導(dǎo)致飼料品質(zhì)下降，直接影響著動物對其利用的效果，過分酸敗會影響飼料安全［1］。近年來，有關(guān)于氧化魚油對仔豬［2－3］、育肥豬［4］、種雞［5］、肉雞［1］和魚［6－8］生長性能方面研究報(bào)道較多。前人研究表明，動物飼糧中添加魚油可改善動物的生產(chǎn)性能，通過調(diào)控飼糧中n－3與n－6型PUFA保持適當(dāng)?shù)谋壤?，可以不同程度地改善動物對疾病和異物的抵抗能力，增?qiáng)機(jī)體健康。魚油被氧化后，會不同程度地對動物生長性能和機(jī)體抗氧化能力產(chǎn)生一定的負(fù)面影響，降低動物對疾病的抵抗力，降低動物產(chǎn)品品質(zhì)。目前尚沒有發(fā)現(xiàn)有關(guān)氧化魚油對蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)影響的相關(guān)報(bào)道。且現(xiàn)行的飼料標(biāo)準(zhǔn)中還沒有魚油質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可供參考，許多飼料生產(chǎn)企業(yè)對于魚油的質(zhì)量控制往往自定標(biāo)準(zhǔn)或參考其他行業(yè)的標(biāo)準(zhǔn)，標(biāo)準(zhǔn)參差不齊，導(dǎo)致許多酸敗魚油應(yīng)用于飼料生產(chǎn)中。油脂氧化后對蛋雞生產(chǎn)性能及雞蛋品質(zhì)的相關(guān)研究極為匱乏，而氧化魚油對蛋雞機(jī)體抗氧化酶活性的影響很少見報(bào)道。本文以氧化魚油為研究對象，探討不同氧化程度的魚油對蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)及機(jī)體抗氧化能力的影響，為蛋雞飼料生產(chǎn)中魚油的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 氧化魚油的制備

在 魚 油 中 添 加 Fe2+30mg/kg、Cu2+15 mg/kg、H2O2600 mg/kg和0.3%的水、充分混合后，于37℃條件下通氧攪拌氧化168 h，獲取過氧化物值(POV)為1 200.10 meq O2/kg的氧化魚油，制好后的氧化魚油于20℃條件下儲存，飼喂前一周取樣配制。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及試驗(yàn)飼糧

試驗(yàn)選擇720只體重相近的38周齡海蘭灰蛋雞，隨機(jī)分為4個組，每組6個重復(fù)，每個重復(fù)30只雞。將新鮮魚油和POV為1 200.10 meq O2/kg的氧化魚油按不同比例分別加入基礎(chǔ)飼糧中，組成新鮮魚油組(未添加氧化魚油，F(xiàn)FO組)、0.25%氧化魚油組(OFO1組)、0.50%氧化魚油組(OFO2組)和1.00%氧化魚油組(OFO3組)。

以玉米－豆粕為基礎(chǔ)配制飼糧，將POV為1 200.10 meq O2/kg的氧化魚油分別按12.5%、25.0%和50.0%的比例與新鮮魚油(POV為0.40 meq O2/kg)進(jìn)行混合，再將新鮮魚油和混合魚油按2%的比例分別加入到玉米－豆粕型基礎(chǔ)飼糧中。試驗(yàn)開始時(shí)先混合好除魚油外的其他組分。在每周開始時(shí)按要求加入已經(jīng)配制好的新鮮或氧化魚油，混合均勻制成試驗(yàn)飼糧，基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)采用雙層鍍鋅雞籠飼養(yǎng)，每個重復(fù)為一籠。每天光照16 h，自由采食，自由飲水。溫度、免疫程序按常規(guī)進(jìn)行，試驗(yàn)期為4周。

1.4 測定指標(biāo)及方法

1.4.1 氧化魚油指標(biāo)測定

油脂氧化程度的評價(jià)通常用酸價(jià)(AV)、POV、皂化價(jià)(SV)、硫代巴比妥酸反應(yīng)物(TBARS)和碘價(jià)(IV)指標(biāo)。POV、AV、SV和IV測定方法分別參照 GB/T 5538—2005、GB/T 5530—998、GB/T 5534—1995 和 GB/T 5532—1995的方法，TBARS 測定方法按黃偉坤［9］的方法。

1.4.2 生產(chǎn)性能

每日以重復(fù)為單位記錄產(chǎn)蛋數(shù)、破蛋數(shù)、產(chǎn)蛋量、雞只死亡數(shù)和耗料量，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)計(jì)算入舍母雞產(chǎn)蛋率、平均蛋重、平均日采食量、死淘率。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet(air－dry basis) %

1.4.3 蛋品質(zhì)

蛋殼顏色:蛋殼顏色用3個指標(biāo)進(jìn)行表示。L值:亮度值，由白色到黑色的程度；a*值:紅度值，由紅色到綠色的程度；b*值:黃度值，由黃色到藍(lán)色的程度。

蛋黃顏色:蛋黃色澤用羅氏比色扇(Roche yolk color fan，rycf)測定。

蛋白高度:用蛋白高度測定儀測量蛋黃邊緣與濃蛋白邊緣的中點(diǎn)的蛋白高度，避開系帶，測量成正三角型的3個點(diǎn)，取平均值。

哈氏單位:哈氏單位=100×log(H－1.7×W×0.37+7.57)，式中H為蛋白高度(mm)，W為蛋重(g)。

1.4.4 抗氧化指標(biāo)

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每重復(fù)隨機(jī)取3只雞，頸靜脈取血抗凝，用試劑盒測定全血中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH－Px)、過氧化氫酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)的含量，試劑盒購自南京建成生物功能研究所。

1.5 數(shù)據(jù)分析

使用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件ANOVA對各指標(biāo)進(jìn)行方差分析，LSD進(jìn)行多重比較，以P＜0.05為顯著平準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 氧化魚油對蛋雞生產(chǎn)性能的影響

試驗(yàn)制作的氧化魚油各指標(biāo)測定結(jié)果見表2，測定結(jié)果表明本試驗(yàn)新鮮魚油氧化168 h后其POV 為1 200.10 meq O2/kg。

表2 氧化魚油各指標(biāo)測定結(jié)果Table 2 Results of antioxidant indices in oxidized fish oil

氧化魚油對蛋雞生產(chǎn)性能的影響見表3。飼喂氧化魚油第1、2、3、4周后，隨氧化魚油添加量的增加，平均蛋重有下降的趨勢，其中OFO3組平均蛋重顯著低于FFO組(P＜0.05)。試驗(yàn)全期，OFO1、OFO2和OFO3組平均蛋重比FFO組分別降低了0.9%、0.9%和1.7%(P＜0.05)。氧化魚油對蛋雞產(chǎn)蛋率、平均日采食量和料蛋比均沒有顯著影響(P＞0.05)。

2.2 氧化魚油對蛋品質(zhì)的影響

由表4可見，氧化魚油對雞蛋蛋黃顏色有一定影響，隨著氧化魚油添加量的增加蛋黃顏色下降，其中OFO3組蛋黃顏色顯著低于FFO組(P＜0.05)。與FFO組相比，OFO1、OFO2和 OFO3組雞蛋哈氏單位顯著低于FFO組(P＜0.05)，但各氧化魚油組雞蛋哈氏單位差異不顯著(P＞0.05)。氧化魚油對蛋殼L值、a*值和b*值以及蛋白高度沒有顯著影響(P＞0.05)。

2.3 氧化魚油對蛋雞血清抗氧化指標(biāo)的影響

由表5可知，與 FFO組相比，OFO1、OFO2、OFO3組蛋雞血清 GSH－Px活性分別降低了2.01%、4.56%和12.88%，其中OFO3組顯著低于其他各組(P＜0.05)。氧化魚油提高了蛋雞血清MDA含量，其中OFO3組MDA含量顯著高于其他各組(P＜0.05)。氧化魚油對蛋雞血清SOD和CAT活性沒有顯著影響(P＞0.05)。

3 討論

魚油的氧化程度對動物生產(chǎn)性能的影響已有一些學(xué)者進(jìn)行了研究，多數(shù)研究表明氧化油脂損害動物的生產(chǎn)性能、降低營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收利用率。袁施彬等［10］研究發(fā)現(xiàn)，在斷奶仔豬飼糧中添加3%的POV為1 065.74 meq O2/kg的氧化魚油可誘導(dǎo)氧化應(yīng)激，引起生產(chǎn)性能和養(yǎng)分利用率的下降，氧化應(yīng)激效應(yīng)明顯，使仔豬平均日增重降低了8.16%，料重比提高了9.22%，粗蛋白質(zhì)表觀消化率和表觀利用率下降了21.91%和30.55%，干物質(zhì)和粗脂肪表觀消化率分別降低了13.05%和35.18%。任澤林等［11］研究氧化魚油對鯉魚生產(chǎn)性能和肌肉組織結(jié)構(gòu)的影響，表明氧化魚油損害鯉魚生產(chǎn)性能，即降低了鯉魚增重率及增加飼料系數(shù)。本試驗(yàn)研究結(jié)果也表明，蛋雞飼糧中添加1%的POV為1 200.10 meq O2/kg的氧化魚油顯著降低了平均蛋重，分析其主要原因是氧化應(yīng)激降低了動物對養(yǎng)分的利用率，最終導(dǎo)致生產(chǎn)性能下降。

蛋黃顏色反映了母雞體內(nèi)抗氧化的能力。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)飼糧氧化魚油對蛋雞蛋黃顏色有一定影響，隨著飼糧氧化魚油添加量的增加蛋黃顏色降低，蛋雞飼糧中添加1%的POV為1 200.10 meq O2/kg的氧化魚油顯著降低蛋黃顏色，分析其原因可能是由于氧化魚油降低了機(jī)體內(nèi)抗氧化酶的活性，加速葉黃素被氧化，從而降低了色素的沉積［12］。哈氏單位是衡量雞蛋蛋白質(zhì)品質(zhì)的重要指標(biāo)。哈氏單位值越大說明蛋白質(zhì)越黏稠，品質(zhì)越好。本試驗(yàn)研究不同濃度的氧化魚油對雞蛋哈氏單位的影響，與新鮮魚油組相比不同濃度的氧化魚油組顯著降低了雞蛋哈氏單位。也有研究表明飼料中添加抗氧化劑對蛋殼顏色有顯著改善作用，原因是抗氧化劑保護(hù)飼料中的維生素A、D和E，并且減少脂肪氧化降低自由基對機(jī)體的生物膜的氧化損傷，從而提高蛋殼顏色。

表3 氧化魚油對蛋雞生產(chǎn)性能的影響Table 3 Effects of oxidized fish oil on performance of laying hens

表4 氧化魚油對飼喂4周后蛋雞蛋品質(zhì)的影響Table 4 Effects of oxidized fish oil on egg quality of laying hens after feeding 4 weeks

表5 氧化魚油對飼喂4周后蛋雞血清抗氧化指標(biāo)的影響Table 5 Effects of oxidized fish oil on serum antioxidant indexes of laying hens after feeding 4 weeks

體內(nèi)抗氧化酶的活力可以反映機(jī)體氧化－抗氧化狀態(tài)，從側(cè)面體現(xiàn)動物的健康狀態(tài)。細(xì)胞在需氧代謝過程中，產(chǎn)生大量的活性氧族(ROS)，如O2－、H2O2、OH等。正常情況下機(jī)體內(nèi)部的氧化與抗氧化能力保持動態(tài)平衡［13］。如果動物機(jī)體的抗氧化體系不能及時(shí)清除ROS，就會產(chǎn)生氧化應(yīng)激，破壞生物大分子，引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的異常［14］。在許多對ROS敏感的物質(zhì)中，PUFA的敏感性高于其他物質(zhì)，通常認(rèn)為脂質(zhì)過氧化是細(xì)胞過氧化損傷的主要原因［15］。脂質(zhì)過氧化最普遍的檢測指標(biāo)是醛過氧化產(chǎn)物MDA的含量。研究表明，給試驗(yàn)動物飼喂氧化魚油可使動物機(jī)體ROS大量產(chǎn)生，MDA含量增加，體內(nèi)SOD、GSH－Px等活性降低，誘導(dǎo)氧化應(yīng)激［16］。本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，蛋雞飼糧中添加1%的氧化魚油顯著提高了血清MDA含量，降低了GSH－Px活性。袁施彬等［17］研究5%氧化魚油(過氧化值為786.50 meq O2/kg)對斷奶仔豬肝臟抗氧化酶活性的影響，發(fā)現(xiàn)氧化魚油可以對斷奶仔豬造成不同程度的氧化應(yīng)激，降低了試驗(yàn)豬肝臟抗氧化酶活性和提高了MDA含量。氧化魚油使抗氧化酶的活性降低的原因可能是氧化魚油導(dǎo)致細(xì)胞膜損傷，細(xì)胞中氧自由基等生物活性物質(zhì)的濃度降低，降低了抗氧化酶反應(yīng)底物的濃度，進(jìn)而降低GSH－Px的活性。劉雯雯等［4］在育肥豬飼糧中添加氧化魚油及硒和維生素E研究氧化魚油對育肥豬后期生產(chǎn)性能和冷藏生豬肉肉質(zhì)的影響以及硒和維生素E的抗氧化作用，研究發(fā)現(xiàn)油脂在平均日增重、滴水損失、肉色a*值、SOD和GSH－Px活性上表現(xiàn)顯著的互作效應(yīng)，這與本試驗(yàn)結(jié)果類似。

4 結(jié)論

①飼料中添加1%的POV為1 200.10 meq O2/kg的氧化魚油顯著降低雞蛋的平均蛋重，降低蛋黃顏色和哈氏單位，使蛋品質(zhì)變差。

②飼料中添加1%的POV為1 200.10 meq O2/kg的氧化魚油顯著降低蛋雞血清GSH－Px活性，著提高了血清中MDA含量，使機(jī)體抗氧化能力降低，抵抗疾病的能力下降。

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