易麗君 ，龔道新，陳 金，張素芳

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)煙草工程技術(shù)研究中心，湖南 長沙 410128；2.桃源縣煙草專賣局，湖南 常德 415700；3.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)環(huán)境保護(hù)研究所，湖南 長沙 410128）

吡嘧磺隆和苯噻酰草胺是目前應(yīng)用較為廣泛、使用比較安全的除草劑，同時也是生產(chǎn)除草混劑較好的原料藥品。采用高效液相色譜法分別測定分析這兩種農(nóng)藥單劑的研究已有報道，而且單獨測定的方法成熟、簡便、易操作，但同時檢測分析這兩種農(nóng)藥的研究卻未見報道。為了同時檢測分析土壤中吡嘧磺隆和苯噻草胺混合顆粒劑的殘留，特以植煙土壤為材料進(jìn)行高效液相色譜分析，分析效果較為理想。

1 材料與方法

1.1 儀器和試劑

儀器：HP1100 型高效液相色譜儀（HPLC），SHY-2AS 水浴恒溫振蕩器，TP-220A 電子天平，SHZ-D（III）循環(huán)水式真空泵，RE-2000A 型旋轉(zhuǎn)濃縮儀，玻璃層析柱（長20 cm，直徑1.5 cm），梨形抽濾瓶，具塞三角瓶，量筒，250 mL 分液漏斗，布氏漏斗，容量瓶，移液管，滴定管，玻璃棒等常用實驗儀器。

試劑：弗羅里硅土（用前在650℃下烘3～5 h，冷卻后以2%蒸餾水脫活，保存在130℃的烘箱中，備用），二氯甲烷、冰乙酸，甲醇、無水硫酸鈉、氯化鈉等，以上試劑均為分析純級別。

1.2 試驗方法

1.2.1 藥品檢測 （1）樣品的制備。在未施用過吡嘧磺隆和苯噻草胺農(nóng)藥的植煙土壤中隨機采10 個點取0～15 cm 的耕作層土壤約500 g，去除植物根系及礫石等非土壤部分，混合均勻后過10 目篩，按四分法留樣300 g，盛裝在潔凈的封口塑料袋中，置于-20℃條件下冷凍保存。（2）提取。準(zhǔn)確稱取已制備好的土壤樣品20.0 g，置于250 mL 具塞三角瓶中，加入80 mL 甲醇，并加入適量冰乙酸調(diào)節(jié)pH值至5～6，在水浴恒溫（25℃）振蕩器中振蕩30 min，經(jīng)布氏漏斗減壓抽濾，再用甲醇洗滌殘渣和抽濾瓶2 次（30 mL/次），合并抽濾液無損轉(zhuǎn)入250 mL 具塞三角瓶中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮近干，轉(zhuǎn)入盛有20 mL 10%NaCl 溶液的250mL 分液漏斗中，再分別用二氯甲烷30 mL，30 mL，20 mL 連續(xù)萃取3 次，合并二氯甲烷萃取液，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮近干，用5 mL 二氯甲烷和甲醇的混合液（1∶1，v∶v）溶解，待弗羅里硅土層析柱凈化。（3）凈化。弗羅里硅土（Florisil）層析柱從下至上依次裝填有少許脫脂棉、2 cm 厚無水硫酸鈉、5 g 弗羅里硅土、2 cm 厚無水硫酸鈉，在裝柱的過程中要敲緊敲實，在層析柱裝好后，先用20 mL 二氯甲烷和甲醇的混合液（1∶1，v∶v）預(yù)淋，再將上述提取濃縮液無損移入弗羅里硅土凈化柱中，用70 mL 二氯甲烷和甲醇的混合液（1∶1，v∶v）淋洗（每次5 mL 左右），收集淋出液，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮近干，再用色譜甲醇定容至5.0 mL，待HPLC 檢測。（4）液相色譜檢測。液相色譜柱：150 mm×4.6 mm，Cl8 不銹鋼色譜柱；檢測波長：240 nm；流動相為甲醇∶水∶冰乙酸的混合液（70∶30∶0.3，v∶v∶v）；流速：0.6 mL/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20 μL；檢測運行時間：14 min。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 采用梯度稀釋法配制吡嘧磺隆和苯噻酰草胺的濃度分別為0.05、0.10、0.25、0.50、1.00、2.00 mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，在上述選定的HPLC 條件下檢測，測定出各濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液所對應(yīng)色譜峰的峰面積。然后以標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的濃度（X，mg/L）與所對應(yīng)的色譜峰的峰面積（Y）繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。

1.2.3 添加回收率試驗 在植煙土壤空白對照樣品中分別添加吡嘧磺隆的標(biāo)準(zhǔn)溶液，使樣品中吡嘧磺隆和苯噻酰草胺的濃度分別為0.05、0.10、1.00 mg/kg，每個處理重復(fù)5 次，按上述所選定的分析方法及檢測條件進(jìn)行樣品的分析與檢測，

2 結(jié)果和討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

從圖1 和圖2 可知：當(dāng)藥品濃度在0.05～2.00 mg/L 范圍內(nèi)變化時，吡嘧磺隆和苯噻酰草胺標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的濃度與其所對應(yīng)的色譜峰的峰面積之間呈良好的線性關(guān)系，經(jīng)分析得到吡嘧磺隆和苯噻酰草胺的回歸方程式分別為：Y=115.84 x+0.970 8；Y=152.05 x-0.177 9，相關(guān)系數(shù)均為0.999 9，達(dá)到了極顯著水平。這表明該檢測方法可滿足定量分析吡嘧磺隆和苯噻酰草胺的要求。

圖1 吡嘧磺隆的標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖2 苯噻酰草胺的標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 最小檢出量和最小檢驗濃度

試驗結(jié)果表明：在所選定的液相色譜分析條件下，吡嘧磺隆和苯噻酰草胺的最小檢出量為：1.0×10-9g，最小檢出濃度為：1.25×10-2mg/kg。

2.3 添加回收率試驗

從表1 可知：當(dāng)添加濃度為0.05、0.10、1.00 mg/kg 時，吡嘧磺隆在土壤中的添加回收率在82.15%～97.12%之間，平均回收率為84.00%～95.32%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.39%～1.55%；苯噻酰草胺在土壤中的添加回收率在81.11%～101.15%之間，平均回收率為84.47%～98.53%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.85%～3.50%。結(jié)果表明吡嘧磺隆和苯噻酰草胺的添加回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均在農(nóng)藥殘留試驗準(zhǔn)則允許的范圍內(nèi)，這說明所選定的方法符合農(nóng)藥殘留量分析與檢測的技術(shù)要求。

表1 吡嘧磺隆和苯噻酰草胺在植煙土壤中的添加回收試驗

2.4 儀器檢測條件的選擇

苯噻酰草胺和吡嘧磺隆混劑在分別中性、弱堿性和弱酸性條件下的檢測情況顯示：在弱堿性條件下基本無峰；在中性條件下檢測峰形拖尾，苯噻酰草色譜峰與吡嘧磺隆色譜峰相距較近、不易分離，且線性關(guān)系不理想；在弱酸性條件下檢測峰較為理想。

3 討 論

研究并建立了采用高效液相色譜同時測定吡嘧磺隆·苯噻酰草胺混劑的分析方法，該方法有抗干擾能力強、操作簡易、準(zhǔn)確度和靈敏度較高等特點。當(dāng)添加濃度為0.05～1.00 mg/kg 時，吡嘧磺隆在土壤中的添加回收率在82.15%～97.12%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.39%～1.55%；苯噻酰草胺在土壤中的添加回收率在81.11%～101.15%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.85%～3.50%；該方法測定植煙土壤中殘留的吡嘧磺隆和苯噻酰草胺，其最小檢出濃度均為1.25×10-2mg/kg。綜上所述，說明該方法能有效檢測植煙土壤中的吡嘧磺隆和苯噻酰草胺殘留，可推廣應(yīng)用于其他類型土壤的農(nóng)殘檢測。

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