馮素芳

患者，男，62歲，漢族，既往無輸血史，有糖尿病史，2011年4月因發(fā)熱，便血，下肢疼痛入我院治療。血常規(guī):HB:58 g/L，RBC:1.93×1012/L，申請懸浮紅細(xì)胞2 U，血漿400 ml。復(fù)檢血型時發(fā)現(xiàn)正反定型不一致，正定型為AB型，反定型與A細(xì)胞，B細(xì)胞，O細(xì)胞均凝集，正反定型不符，經(jīng)近一步檢測，證實為AB型，正反定型不一致是由于其自身含有冷凝集素所致。

1 血型血清學(xué)檢查

1.1 試劑與儀器 抗A、抗B單克隆血清(長春博德，批號:20100712);反定型試劑紅細(xì)胞:自制;篩選試劑紅細(xì)胞(長春博訊，批號:20110206);抗Ig-G，C3d、抗IgG、抗C3d(上海醫(yī)藥，批號:20100608);凝聚胺試劑(珠海貝索，批號:110053);抗人球蛋白交叉配血卡(長春博訊，批號:20100608);BASO-2002-2離心機(jī)。FYQ型免疫微柱孵育器、TD-3A型血型血清學(xué)離心機(jī)(長春博研)。37℃水浴箱。

1.2 血型鑒定 取干燥潔凈的試管三支，分別加入抗A、抗B、抗AB血清各兩滴，再分別加入患者3%紅細(xì)胞懸液一滴，混合;另取干燥清潔的試管3支，各加入患者血清2滴，再分別加入A、B、O型3%紅細(xì)胞懸液1滴，混合;另取一只試管，加入患者血清2滴及患者紅細(xì)胞懸液1滴，混合。1 000 r/min，1 min。鏡下觀察。將患者正反定型試管均放入37℃水浴箱中10 min，取出輕輕混勻觀察記錄結(jié)果。

1.3 吸收冷凝集素 用37℃0.9%氯化鈉溶液洗滌患者紅細(xì)胞3次，然后用患者的血清與等體積3洗后的壓積紅細(xì)胞混合，置4℃冰箱中過夜，次日將該血清與A細(xì)胞，B細(xì)胞，0細(xì)胞及自身細(xì)胞在20℃反應(yīng)，記錄結(jié)果。

1.4 直接抗人球蛋白實驗 取潔凈干燥試管三支，分別加入抗-IgG，C3d、抗-IgG、抗-C3d血清各1滴，各加入患者洗滌3次后配制的3%紅細(xì)胞懸液1滴，混合，1 000 r/min，離心1 min。

1.5 抗體篩選試驗 按照不規(guī)則抗體篩查操作說明書進(jìn)行。

1.6 冷凝集素效價測定［1］將患者血清經(jīng)連續(xù)倍量稀釋，分別加入3%O型紅細(xì)胞1滴，混勻，置于4℃反應(yīng)，1 000 r/min，離心1 min，記錄結(jié)果。

1.7 交叉配血實驗 與AB型獻(xiàn)血者在室溫(20℃)聚凝胺配血中，主側(cè)出現(xiàn)凝集，次側(cè)無凝集，配血不相和，放37℃ 10 min，取出試管輕輕混合觀察結(jié)果，主側(cè)凝集消失，配血相合。在微柱凝膠配血法中，主側(cè)和此側(cè)均相合。

2 結(jié)果

2.1 ABO血型鑒定結(jié)果 見表1。

表1 高效價冷凝集素患者血型鑒定

2.2 直接抗人球蛋白試驗 抗-IgG，C3d:2+、抗-IgG:1+、抗C3d:1+。

2.3 不規(guī)則抗體篩選實驗陰性。

2.4 用處理后的患者血清，紅細(xì)胞做凝聚胺交叉配血試驗，主次側(cè)均無凝聚，無溶血。

3 討論

高效價冷凝集素是患者體內(nèi)產(chǎn)生了抗自身紅細(xì)胞的嗜異性冷抗體。此抗體為IgM類，在體外4℃或室溫條件下可與自身紅細(xì)胞或ABO系統(tǒng)其它各個血型的紅細(xì)胞發(fā)生非特異性凝集反應(yīng)，不規(guī)則抗體可呈強(qiáng)陽性。一般健康人血清中含少量冷凝集素，效價很低，一般在1∶16以下。這種抗體在32℃以下(0～4℃)時活性最強(qiáng)，能與紅細(xì)胞結(jié)合，當(dāng)溫度升高時凝集的紅細(xì)胞呈可逆性散完全散開，可迅速從紅細(xì)胞表面解離，因此不引起非特異性凝集，但在某些病理情況下，自身免疫性貧血，淋巴系統(tǒng)惡性腫瘤、支原體肺炎、EB病毒感染及某些腫瘤等會表達(dá)高效價［2］。本例患者直抗實驗結(jié)果陽性，在室溫自身對照陽性。37℃自身對照無凝聚，無溶血，提示患者血清中存在自身冷抗體。首先將患者的紅細(xì)胞用37℃0.9%氯化鈉溶液洗滌3遍，用洗滌后紅細(xì)胞在4℃條件吸收患者血清中高效價冷凝集素至自身對照和直抗陰性時進(jìn)行正反血型鑒定和交叉配血實驗。本患者血型鑒定為AB型RhD(+)。給其AB型RhD(+)懸浮紅細(xì)胞2 U，血漿400 ml，適當(dāng)加溫緩慢輸注，無不良反應(yīng)。

寒冷凝集素所致凝集現(xiàn)象應(yīng)與ABO亞型引起弱凝集相區(qū)別，不規(guī)則抗體篩查與鑒定實驗可排除血清中含有其他不規(guī)則抗體。高效價冷凝集素所致同型配血不合多為弱凝集，37℃水浴后凝集消失。亞型同型配血也為弱凝集，但37℃水浴后凝集不消失，交叉配血不合，需進(jìn)行抗體鑒定實驗，輸血需選擇抗原陰性，交叉配血相合的紅細(xì)胞輸注。本例患者無輸血史，家族史，不規(guī)則抗體篩查陰性，正反定型不一致是由其自身冷抗體造成。

1 劉達(dá)莊主編.免疫血液學(xué).第1版.上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社，2002.214-218.

2 蘭炯采.冷激素綜合征三例報告.中國輸血雜志，1993，6:99.