中藥飲片對中成藥非法添加檢驗的影響

北京市西城區(qū)藥品檢驗所（100037）趙鳴舒 安瑩 王靜 張仕杰 宿威 王敏

伴隨著藥品制假水平的不斷提高，近年來對于中成藥非法添加的研究日趨深入[1][2][3][4][5][6][7][8][9][10]，但并沒有關(guān)于中藥飲片對非法添加檢驗方法影響的相關(guān)研究。為了能更深入地研究非法添加的檢驗方法，避免因中藥飲片自身因素而影響檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，北京市西城區(qū)藥品檢驗所的檢驗人員特地針對中藥飲片進(jìn)行了非法添加的檢驗，從而可以有效地避免假陽性現(xiàn)象的產(chǎn)生。

通過前期對轄區(qū)醫(yī)院制劑非法添加的檢驗，檢驗人員發(fā)現(xiàn)激素類成分即可應(yīng)用于止咳平喘類藥品中，也可應(yīng)用于祛風(fēng)除濕類藥品中，而且激素類成分的相關(guān)檢驗方法抗干擾能力較差，假陽性、假陰性率較高。此次，檢驗人員針對目前止咳平喘類藥品和祛風(fēng)除濕類藥品中常用的中藥飲片，應(yīng)用醋酸潑尼松非法添加的檢驗方法進(jìn)行全面檢測，評估中藥飲片對相關(guān)檢驗方法的影響程度。

1 儀器與試藥

1.1儀器 LC-20A型高效液相色譜儀（日本島津公司)；AE240型電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。

1.2試藥 醋酸潑尼松對照品（中國藥品生物制品檢定所，100012-200706）。青黛、沒藥、雞血藤、穿山甲、乳香、郁金、夏枯草、連翹、當(dāng)歸、白芷、丹參（中國藥品生物制品檢定所，批號分別為1170-200001、120967-201104、121173-200902、121027-200403、120970-200904、120949-200504、120993-200403、120908-200613、120927-200613、120945-200406、120923-200509）。乙腈、四氫呋喃為色譜純，其余為分析純，水為純化水。

附表2 色譜圖結(jié)果舉例

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件

2..1.1色譜柱 Agilent C18柱（150mm×4.6mm，5um）；流動相：乙腈-水（33∶67）；檢測波長：240nm；流速：1.0mL/min。2.1.2梯度洗脫方法 色譜柱：Agilent C18柱（150mm×4.6mm，5um）；流動相：A（水-四氫呋喃=100∶1），B（乙腈-水-四氫呋喃=80∶20∶1）；梯度洗脫程序（見附表1）；檢測波長：240nm；流速：1.0mL/min。

2.2 溶液制備

2.2.1對照品溶液制備 精密稱取醋酸潑尼松對照品10mg，置100mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45um微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為醋酸潑尼松對照品溶液。

附表1 梯度洗脫程序表

2.2.2供試品溶液制備 精密稱取青黛對照藥材1g，置于100mL量瓶中，加入甲醇適量，超聲處理（功率250W，頻率35kHz）30分鐘，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45um微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為青黛供試品溶液。同樣方法分別制成沒藥、雞血藤、穿山甲、乳香、郁金、夏枯草、連翹、當(dāng)歸、白芷、丹參供試品溶液。

2.2.3陽性對照液的制備 精密量取醋酸潑尼松對照品溶液1mL，置10mL量瓶中，加青黛供試品溶液稀釋至刻度，搖勻，用0.45um微孔濾膜濾過，即得。同法分別制成沒藥、雞血藤、穿山甲、乳香、郁金、夏枯草、連翹、當(dāng)歸、白芷、丹參陽性對照溶液。

2.3HPLC法測定

2.3.1精取醋酸潑尼松對照品溶液、供試品溶液和陽性對照液各20uL，分別注入液相色譜儀，按“2.1.1”項下色譜條件測定。試驗結(jié)果顯示：青黛、雞血藤、穿山甲、乳香、郁金、夏枯草、連翹、當(dāng)歸、白芷的供試品色譜中未出現(xiàn)與對照品保留時間相同的色譜峰；相應(yīng)的陽性對照液色譜中出現(xiàn)與對照品保留時間相同的色譜峰。沒藥、丹參供試品色譜中出現(xiàn)與對照品保留時間相同的色譜峰；相應(yīng)的陽性對照液色譜中，與對照品保留時間相同的色譜峰數(shù)值明顯增大。（色譜圖舉例見附表2）。

2.3.2梯度洗脫法測定 精取醋酸潑尼松對照品溶液；沒藥、丹參供試品溶液和相應(yīng)的陽性對照液各20uL，分別注入液相色譜儀，按照“2.1.2”項下色譜條件測定。結(jié)果顯示：供試品色譜中未出現(xiàn)與對照品保留時間相同的色譜峰；相應(yīng)的陽性對照液色譜中出現(xiàn)與對照品保留時間相同的色譜峰。

2.4樣品分析 “2.1.1”項下色譜條件是《中國藥典》2010年版二部[11]對醋酸潑尼松的檢測方法，青黛、雞血藤、穿山甲、乳香、郁金、夏枯草、連翹、當(dāng)歸、白芷等9味中藥飲片對該方法無干擾，而沒藥、丹參只有在按照“2.1.2”項下梯度洗脫檢測系統(tǒng)中，才對檢測方法無干擾。但是梯度洗脫方法存在操作過程繁瑣、檢測時間長、色譜圖影響因素多等缺點(diǎn)。因此，如果要對成藥進(jìn)行醋酸潑尼松的非法添加檢測時，應(yīng)考慮到上述的干擾因素，靈活利用各種方法排查藥品的非法添加情況。

3 討論

中藥成分復(fù)雜，單味藥中就可能含有多種成分。近年來，伴隨著藥品制假工藝的不斷提高，中成藥中非法添加西藥成分的案例已經(jīng)屢見不鮮。當(dāng)前對于非法添加的檢驗，僅僅停留在非法添加成分是否可以檢測到或某一品種成藥可以測到非法添加成分，而未考慮中藥材對相關(guān)檢測方法的影響。此次，檢驗人員僅對部分藥材進(jìn)行了醋酸潑尼松非法添加的檢驗，就發(fā)現(xiàn)2種飲片對部分檢驗方法有明顯影響。因此，檢驗人員在進(jìn)行非法添加方法研發(fā)的時候，首先應(yīng)考慮到中藥自身的影響因素，需要進(jìn)行全面地、系統(tǒng)地研究，明確各類干擾因素后，再進(jìn)行相關(guān)研究，有效地降低相關(guān)方法假陽性、假陰性出現(xiàn)的概率，確保檢測的準(zhǔn)確性。

研究中藥飲片對非法添加方法的影響，首先應(yīng)考慮到相關(guān)非法添加成分的藥效，有的放矢地排查相關(guān)飲片，并不需要對所有市面上的飲片進(jìn)行排查。在發(fā)現(xiàn)僅有少數(shù)對相關(guān)方法有影響時，可以采取更為精密、先進(jìn)的儀器進(jìn)行檢測。確定其影響因子以后，再重新引入相關(guān)方法中，確保非法添加檢測方法的科學(xué)性和準(zhǔn)確性，提高相關(guān)方法的抗干擾能力。