楊文超，吳安杏，吳珍紅，繆曉青

(福建農(nóng)林大學(xué)蜂學(xué)學(xué)院，蜂產(chǎn)品加工與應(yīng)用教育部工程研究中心，福建福州 350002)

蜂王漿蛋白和脂類降血脂功能的研究

楊文超，吳安杏，吳珍紅，繆曉青*

(福建農(nóng)林大學(xué)蜂學(xué)學(xué)院，蜂產(chǎn)品加工與應(yīng)用教育部工程研究中心，福建福州 350002)

為研究蜂王漿中的蛋白和脂類的降血脂功能，建立高血脂癥大鼠模型，以大鼠血清中TC、TG和HDL－C水平，動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)(AI)以及體重，肝重、脾重與體重比作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，考察蜂王漿蛋白和脂類的降血脂作用。結(jié)果表明，蜂王漿蛋白能顯著降低高血脂癥大鼠血清中TC、TG水平，提高血清HDL－C水平，抑制AI值的上升，減少體重、肝臟和脾臟重量的增加，且與鮮蜂王漿效果接近;但是脂類沒有降血脂功能。因此，蜂王漿的降血脂功效成分主要是蜂王漿蛋白。

蜂王漿蛋白，降血脂功能，高血脂癥

蜂王漿又名蜂皇漿、王漿、蜂乳，是工蜂舌腺和上顎腺所分泌的漿狀物［1］。蛋白質(zhì)是蜂王漿的主要組成部分，占蜂王漿干重的50%［2］。其中的單一蛋白組分，如MRJP3、Jelleine－I－IV、Royalisin、MRJP1、57ku蛋白、Apisimin等已被分離、表達(dá)，并開展了相應(yīng)的功能研究［3］。蜂王漿中的脂類有飽和、不飽和直鏈脂肪酸，飽和、不飽和支鏈二羧酸，大約有80%～90%是含C8和C10的短鏈脂肪酸，其中王漿酸含量占總脂肪酸21%以上。研究表明，王漿酸具有抗菌消炎、增強(qiáng)免疫、抗癌、防輻射等重要的生理活性，是評(píng)價(jià)蜂王漿質(zhì)量重要的指標(biāo)之一［4］。蜂王漿是一種天然的營養(yǎng)保健食品，富含多種生物活性成分，諸多研究表明其具有抗氧化、降血脂、抗菌、調(diào)節(jié)心腦血管系統(tǒng)、免疫調(diào)節(jié)等多種營養(yǎng)保健功效［5－8］。據(jù)報(bào)道，新鮮王漿經(jīng)180目濾網(wǎng)過濾的濾渣、經(jīng)0.5μm陶瓷膜過濾的濾渣和再經(jīng)0.1μm陶瓷膜陶過濾的濾渣均能顯著降低大鼠血清TC含量［9］。但是蜂王漿降血脂的功能成分尚不明確。本研究旨在通過對(duì)比鮮蜂王漿、蜂王漿蛋白以及蜂王漿中的脂類對(duì)高血脂大鼠血脂的影響，分析蜂王漿蛋白和脂類的降血脂作用，為確定蜂王漿降血脂的活性成分提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

蜂王漿(蜜粉源植物:油菜) 福建省神蜂科技開發(fā)有限公司提供;清潔級(jí)SD大鼠 雄性，體重(230±20)g;大鼠基礎(chǔ)飼料、大鼠高脂飼料 福建醫(yī)科大學(xué)吳氏實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心;石油醚、硫酸銨、甲醇、無水乙醚 分析純。

透析袋 北京經(jīng)科宏達(dá)生物技術(shù)有限公司; LGJ－25C型冷凍干燥機(jī) 北京四環(huán)科學(xué)儀器廠有限公司;GL－16－II型高速冷凍離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠;WFJ 7200型可見分光光度計(jì) 上海尤尼柯儀器有限公司;測(cè)試試劑盒 浙江東甌診斷產(chǎn)品有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 蜂王漿中蛋白的提取 蜂王漿蛋白的提取采用硫酸銨沉淀法［10］。新鮮蜂王漿→蒸餾水溶解→離心(2000r/min、10min)→取上清液→加入硫酸銨固體至過飽和(4℃條件下)→靜置過夜(4℃)→冷凍離心(4℃、10000r/min、30min)→棄上清→蒸餾水透析(截留分子量14000透析袋、4℃、48h，分別隔4、8、12h換水三次)→凍干→蜂王漿蛋白凍干粉。

表1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案Table 1 The protocol of experiment

表2 不同成分對(duì)大鼠血清中TC和TG水平的影響Table 2 The effect of compositions on TC and TG of serum of rats

1.2.2 蜂王漿中脂類的提取 新鮮蜂王漿凍干后，研磨粉碎，過40目篩，制得蜂王漿凍干粉。取凍干粉100g，用甲醇－石油醚(1∶3，V/V)混合溶劑400mL在室溫條件下振蕩提取24h，過濾。重復(fù)三次后合并濾液，經(jīng)減壓除去溶劑后得到蜂王漿中的脂類物質(zhì)。

1.2.3 高血脂動(dòng)物模型的建立 雄性Wistar大鼠適應(yīng)飼養(yǎng)1周后，正常對(duì)照組飼喂大鼠基礎(chǔ)飼料，實(shí)驗(yàn)組飼喂高脂飼料。飼喂4周后，禁食12h，稱量每只大鼠的體重，用熔點(diǎn)毛細(xì)管從眼眶靜脈采血，3000r/min下離心15min得到血清。

用試劑盒法測(cè)定血清總膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)和高密度脂蛋白膽固醇(HDL－C)水平。對(duì)比正常組大鼠與高脂大鼠的體重和血清TC、TG、HDL－C水平，以確定高血脂動(dòng)物模型是否建立成功。

1.2.4 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分組和設(shè)計(jì) 將建模成功后的大鼠隨機(jī)分為9組，每組10只，分組及處理情況詳見表1。

采血后立即處死大鼠，解剖并摘取肝臟和脾臟，用生理鹽水沖洗，用濾紙吸干水分后稱重。

1.2.5 動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)計(jì)算 血液樣本在3000r/min下離心15min，測(cè)定所得血清中TC、TG和HDL－C水平。動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)(AI)通過以下公式計(jì)算出:

2 結(jié)果和分析

2.1 不同成分對(duì)大鼠血清中TC和TG的影響

測(cè)試各處理組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的血清TC和TG水平，利用SPSS13.0軟件對(duì)組間數(shù)據(jù)的差異性進(jìn)行t檢驗(yàn)，結(jié)果見表2。

由表2可見，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組血清TC水平顯著升高(p＜0.01)，蜂王漿脂類各組也顯著升高(p＜0.01)，而蜂王漿組和RJPM組、RJPH組無顯著差異。與模型對(duì)照組相比，蜂王漿組血清TC下降了15.8%(p＜0.05)，RJPM組、RJPH組分別下降了12.4%(p＜0.05)、14.0%(p＜0.05)，其他各組則無顯著差異。與蜂王漿組相比，蜂王漿蛋白中、高劑量組均無顯著差異;而蜂王漿脂類各組中RJLL組和RJLM組顯著升高(p＜0.05)，而RJLH組與蜂王漿組相比則無顯著差異。

與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組、RJPL組和蜂王漿脂類各劑量組血清 TG水平均顯著升高(p＜0.05)，蜂王漿組和RJPM組、RJPH組則差異不顯著。與模型對(duì)照組相比，蜂王漿組血清TG水平下降明顯，下降了13.3%(p＜0.05);除此之外，RJPH組血清TG水平亦顯著下降，下降了16.3%(p＜0.05);蜂王漿脂類各組無顯著差異。而蜂王漿蛋白各組與蜂王漿組相比，只有RJPL組存在差異(p＜0.05)，RJPM組和RJPH組則差異不顯著。

2.2 不同成分對(duì)大鼠血清HDL-C和AI的影響

從表3數(shù)據(jù)分析可以看出，與正常組相比，RJPL組血清HDL－C水平顯著降低(p＜0.05)，模型對(duì)照組、蜂王漿脂類各劑量組血清HDL－C水平也顯著下降(p＜0.01)，其余差異不顯著。與模型對(duì)照組相比，蜂王漿組血清HDL－C水平有了明顯的上升，上升了17.4%(p＜0.05);此外，RJPM組和RJPH組也顯著升高，分別上升了15.9%(p＜0.05)和20.3%(p＜0.05);其余則沒有顯著差異。與蜂王漿組相比，蜂王漿脂質(zhì)降低了血清中HDL－C水平，低劑量組血清HDL－C水平差異顯著(p＜0.05)，其高、中劑量組差異極顯著(p＜0.01)，蜂王漿蛋白各組血清HDL－C水平無顯著差異。

表3 不同成分對(duì)大鼠血清HDL－C和AI指數(shù)的影響Table 3 The effect of compositions on HDL－C and AI of serum of rats

表4 不同組分對(duì)大鼠體重、肝臟和脾臟的影響Table 4 The effect of compositions on weight，liver and spleen of rats

與正常組相比，各組AI值均顯著升高，其中除蜂王漿組顯著水平為p＜0.05外，其他組顯著水平都為p＜0.01。而與模型對(duì)照組相比，蜂王漿組、RJPM組和RJPH組AI值均顯著降低(p＜0.01)，分別下降了47.2%、42.9%和39.7%;蜂王漿脂類各組則差異不顯著。與蜂王漿組相比，蜂王漿蛋白各劑量組AI值差異都不顯著;蜂王漿脂類各劑量組AI值都顯著升高(p＜0.01)。

2.3 不同組分對(duì)大鼠體重、肝臟和脾臟的影響

經(jīng)4周灌胃處理后，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組體重增加明顯(p＜0.05)，而其余各組體重沒有顯著差異。與模型對(duì)照組相比，蜂王漿組和RJPH組體重分別減少了 8.7%(p＜0.01)和10.0%(p＜0.05);其余各組則無顯著差異。與蜂王漿組相比，各組大鼠體重除模型對(duì)照組外均無顯著差異。

與正常組相比，模型對(duì)照組肝體比和脾體比均顯著升高(p＜0.01)，RJPL組和RJPM組肝體比上升明顯(p＜0.05)，蜂王漿脂類各組也顯著升高(p＜0.01);蜂王漿蛋白各組脾體比均無顯著差異，而蜂王漿脂類各組脾體比顯著上升(p＜0.01)。與模型對(duì)照組相比，蜂王漿組肝體比和脾體比均下降明顯(p＜0.05)，分別下降了10.7%和11.3%;RJPM組脾體比下降10.7%(p＜0.05)，RJPH組肝體比和脾體比分別下降了8.2%(p＜0.05)和12.5%(p＜0.05)，而蜂王漿脂類各組肝體比和脾體比均無顯著差異。與蜂王漿組相比，RJPL組和RJPM組肝體比差異顯著(p＜0.05)，RJPH組差異不顯著。蜂王漿蛋白各組與蜂王漿組脾體比均沒有顯著差異。

3 結(jié)論

研究表明蜂王漿蛋白類成分能明顯降低血清TC、TG水平和AI值，且適當(dāng)劑量的蜂王漿蛋白可達(dá)到與蜂王漿相近的效果，具有較強(qiáng)的降血脂功能。蜂王漿中的脂類物質(zhì)在實(shí)驗(yàn)中則未顯示出降血脂的效果，對(duì)高脂飲食引起的各項(xiàng)指標(biāo)的異常沒有明顯的改善效果。

但蜂王漿中蛋白種類很多，具體是哪種蛋白具有該功能，以及其降血脂功能的機(jī)理還有待于進(jìn)一步研究。

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The antilipemic function of royal jelly proteins and lipids

YANG Wen－chao，WU An－xing，WU Zhen－h(huán)ong，MIAO Xiao－qing*
(College of Bee Science，F(xiàn)ujian Agriculture and Forestry University，Bee Products Processing and Application Engineering Research Center of the Ministry of Education，F(xiàn)uzhou 350002，China)

Aim to research the antilipemic function of protein and lipids of royal jelly(RJ).Its indexes were TC，TG and HDL－C in serum，atherosclerosis index(AI)as well as body weight，the ratio of liver and spleen to body of hyperlipidemia models rat.The results showed that royal jelly proteins could significantly reduce the level of TC，TG and the elevation of AI，body weight and the ratio of liver and spleen to body，and increase the level of HDL－C of hyperlipidemia rat.And there were no significant difference between the functions of RJ and RJ proteins.But lipids of RJ had no hypolipidemic function.The results showed the main component on antilipemic function was protein of RJ.

protein of royal jelly;antilipemic function;hyperlipidemia

TS218

A

1002－0306(2012)21－0345－04

2012－04－20 *通訊聯(lián)系人

楊文超(1980－)，男，講師，博士，研究方向:蜂產(chǎn)品加工與應(yīng)用。

國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)(蜂)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系項(xiàng)目(CARS－45－KXJ19)。