陳紅云，申元英

（大理學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院，云南大理 671000）

車前草幾種提取物的抗菌活性研究

陳紅云，申元英*

（大理學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院，云南大理 671000）

目的：比較車前草不同提取物的抗菌活性。方法：采用分光光度比濁法，用車前草的8種溶劑室溫提取物對(duì)3種細(xì)菌進(jìn)行抗菌活性研究，8種溶劑分別是自來水、超純水、無水乙醇、甲醇、乙醚、石油醚、三氯甲烷和苯。結(jié)果：車前草提取物C、D、E、G、H均有抗菌活性（P＜0.05），提取物A、B沒有抗菌活性（P＞0.05）。結(jié)論：車前草的不同有機(jī)溶劑提取物均有良好的體外抗菌活性。

車前草；抗菌活性；最小抑菌濃度

上個(gè)世紀(jì)以來，隨著抗生素的發(fā)現(xiàn)和工業(yè)化生產(chǎn)，使細(xì)菌引起的傳染病得到了極大的控制。但是抗生素的濫用狀況也不容樂觀，由此產(chǎn)生了大批的耐藥菌，致使半合成和改良抗生素的耐藥周期越來越短，給臨床治療帶來了困難〔1〕。因此，盡快研究和開發(fā)新的天然來源的或具有新作用機(jī)制的抗生素成為世界各國藥物學(xué)家、微生物學(xué)家研究的熱點(diǎn)。車前草（Plantago asiatica L.）屬車前科（Plantaginaceae）植物，在民間多用干燥全草入藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品。具有清熱利尿、祛痰、涼血、解毒等功效，用于水腫尿少，熱淋澀痛，暑濕瀉痢，痰熱咳嗽，吐血衄血，痛腫瘡毒等諸癥〔2〕。本研究在楊亞軍等〔3-5〕研究報(bào)道的基礎(chǔ)上，采用車前草多個(gè)溶劑的8種提取物對(duì)3種細(xì)菌進(jìn)行抗菌活性研究，從而比較車前草不同提取物的抗菌活性，為細(xì)菌性感染的治療及車前草的開發(fā)應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥材 車前草于2011年7月采集于云南省大理市蒼山腳下，海拔高度為1 981 m的將軍洞，樣品經(jīng)有關(guān)專家鑒定為車前草植物〔6〕。草藥經(jīng)洗凈，除去泥沙及雜草，于室內(nèi)自然陰干得干燥植株全草，用搖擺式高速中藥粉碎機(jī)粉碎成長短不規(guī)則狀粗粉（過40目篩），儲(chǔ)藏于4℃冰箱，備用。

1.2 儀器 隔水式恒溫培養(yǎng)箱（上海一恒科技有限公司），高壓蒸汽滅菌器（MLS-3780，三洋電機(jī)株式會(huì)社），雙人單面超凈工作臺(tái)（AIRTECH，蘇凈集團(tuán)安泰公司制造），無菌瓶（高溫121±0.5℃，高壓0.2± 0.05 Mpa滅菌的試劑瓶）。

1.3 試劑 MH瓊脂（生化試劑杭州天和微生物試劑有限公司，批號(hào)：110908），MH肉湯（生化試劑杭州天和微生物試劑有限公司，批號(hào)：110806）。

1.4 供試菌株 供試菌株為金黃色葡萄球菌（ATCC 25923）、大腸桿菌（ATCC 25922）、銅綠假單胞菌（ATCC 27853）由大理學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)綜合實(shí)驗(yàn)室提供。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 提取物制備 取8份車前草粗粉各50 g，分別加入自來水、超純水、無水乙醇、甲醇、乙醚、石油醚、三氯甲烷和苯200 mL，20～25℃浸潤提取，每次24 h，共提取4次，合并提取液，減壓干燥的干粉，依次編號(hào)為提取物A、B、C、D、E、F、G、H號(hào)提取物。儲(chǔ)存于無菌瓶中4℃以下保存?zhèn)溆谩?-9〕。

2.2 供試菌株活化 將供試菌株菌種于MH瓊脂平板上，置37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h活化，待用。

2.3 菌液制備 挑取活化好的瓊脂平板上形態(tài)相同的菌落，用滅菌生理鹽水校正菌液濃度，使其相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)比濁管，再用MH液體培養(yǎng)基稀釋后，備用，稀釋后的菌液在15 min內(nèi)接種完〔10-11〕。

2.4 最低抑菌濃度（MIC）測(cè)定 取無菌小試管15支為一組，共30組。其中第13、14、15管分別為“原液對(duì)照管”、“MH肉湯對(duì)照管”、“供試菌生長對(duì)照管”。每支試管加入肉湯2 mL。配制8種不同提取物原液濃度為250 mg/mL，用移液器吸取藥液1 mL放入第1管內(nèi)，混勻后吸取1 mL放入第2管，依次逐管進(jìn)行稀釋到第12管，最后第12管混勻后取出1 mL棄之。除第13、14管外，每支管加入菌液1 mL，置37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)24 h后觀察結(jié)果。在對(duì)照符合要求的條件下，凡無肉眼可見的細(xì)菌生長的藥物最低濃度即為藥物對(duì)該供試菌的MIC〔12-13〕。

2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法 數(shù)據(jù)資料采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件Epidata 3.1版錄入，檢驗(yàn)數(shù)據(jù)資料的有效性，SPSS 16.01進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，統(tǒng)計(jì)數(shù)值P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

車前草各提取物在各管中的濃度見表1，各提取物對(duì)供試菌的作用見表2。

表1 車前草各提取物在各管中的濃度（mg/mL）

表2 車前草各提取物對(duì)供試菌的MIC（mg/mL）

由表2結(jié)果顯示：車前草各種提取物對(duì)供試菌的抑制作用為，車前草提取物C、D、E、G、H均有抗菌活性（P＜0.05），提取物A、B沒有抗菌活性（P＞0.05），其中提取物F對(duì)銅綠假單胞菌沒有抗菌活性（P＞0.05）。

4 討論與結(jié)論

本次實(shí)驗(yàn)采用不同的溶劑對(duì)車前草的干品進(jìn)行有效成份的提取，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，車前草的自來水和超純水提取物無抗菌活性，而車前草的不同有機(jī)溶劑提取物均有良好的體外抗菌活性。此次試驗(yàn)結(jié)果與孔陽等〔14〕研究者采用濾紙片擴(kuò)散法對(duì)車前草乙醇提取物的抗菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。

通過車前草不同的有機(jī)溶劑提取物對(duì)3種菌株的MIC值大小不同，并且對(duì)同一菌株也有大小不同的MIC。說明不同有機(jī)溶劑提取的車前草中提取物是由不同種的化學(xué)成分組成，它們對(duì)不同菌株的抗菌機(jī)制有所不同。其抗菌結(jié)果差異和作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。本次實(shí)驗(yàn)為體外抗菌實(shí)驗(yàn)，至于在體內(nèi)能否有抗菌效果，還需要通過動(dòng)物模型進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究。

志謝 大理學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原微生物學(xué)綜合實(shí)驗(yàn)室的王濤老師，以及公共衛(wèi)生學(xué)院的張文、林麗佳同學(xué)在研究中給予幫助和支持！

〔1〕張堅(jiān)磊.細(xì)菌耐藥性的新問題〔J〕.國外醫(yī)學(xué)：臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊(cè)，2001，22（1）：45-45.

〔2〕羅晶，李景輝.車前草中有機(jī)酸的含量測(cè)定〔J〕.中國民族民間醫(yī)藥，2010（11）：34-41.

〔3〕楊亞軍，周秋貴，曾紅，等.車前草化學(xué)成分及新生物活性研究進(jìn)展〔J〕.中成藥，2011，33（10）：1771-1776.

〔4〕錢鶯，傅旭春，白海波，等.車前草醇提液降大鼠血尿酸作用的研究〔J〕.中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2011，28（5）：406-408.

〔5〕張彤，柳淑玉，柳晨，等.車前草的藥理作用及臨床應(yīng)用進(jìn)展〔J〕.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2005，16（1）：67-67.

〔6〕丁迪紅，霍春雁.云南植物志：種子植物：16卷〔M〕.北京：科學(xué)出版社，2006：334-340.

〔7〕陳紅云，獎(jiǎng)金元，王超芬，等.綿馬貫眾的抗菌活性研究〔J〕.大理學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，4（3）：22-23.

〔8〕申元英，楊占秋，劉建軍，等.大黃提取液抗柯薩奇病毒B3的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，1999，22（5）：65-69.

〔9〕張卓然.醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)學(xué)〔M〕.北京：科學(xué)出版社，2007：1-2.

〔10〕孔陽，馬養(yǎng)民，余博，等.蝙蝠葛莖葉抗菌活性成分的研究〔J〕.西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2005，33（4）：151-153.

〔11〕甘曉玲，黃建林.微生物學(xué)與免疫學(xué)實(shí)踐指導(dǎo)〔M〕.北京：人民衛(wèi)生出版社，2009：74-77.

〔12〕陳奇，卞如濂，陳修.中藥藥理研究方法學(xué)〔M〕.北京：人民衛(wèi)生出版社，2006：274-277.

〔13〕徐叔云.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)〔M〕.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：1649-1661.

〔14〕孔陽，馬養(yǎng)民，李彥軍，等.車前草提取物抗菌活性的研究〔J〕.中國釀造，2010（10）：151-153.

Study on the Antibacterial Activity of Plantago asiatic L.

CHEN Hongyun,SHEN Yuanying*
（College of Public Health，Dali University,Dali，Yunnan,671000，China）

Objective:To compare the antibacterial ability of extracts that was extracted by different dissolvent from plantain. Methods:Tap-water,ultra-pure water,ethanol,methanol,ether,petroleum ether,chloroform and benzene were used to extract the antibacterial ingredients of plantain at room temperature;three kind bacteria were medium containing different extracts,and Spectrophotometry assays were performed to measure the antibacterial ability of extracts.Results:The antibacterial ability of extracts according to C,D,E,G,H（P＜0.05）priority was ingredient extracted.Ingredients extracted by Tap-water,ultra-pure water display non-antibacterial ability（P＞0.05）.Conclusion:Organic solvents were more effective as dissolvent to extract antibacterial ingredients of plantain.

Plantago asiatica L.antimicrobial activity;MIC

Q949.36［文獻(xiàn)標(biāo)志碼］A［文章編號(hào)］1672-2345（2012）03-0021-03

2011-12-20

2012-01-11

陳紅云，碩士研究生，實(shí)驗(yàn)師，主要從事分子流行病學(xué)的研究.

*通信作者：申元英，教授.

（責(zé)任編輯 毛本勇）