周榮平 姚雯雯 傅紅興 李 慧 葉其純 夏 烽

溫州醫(yī)學院藥學院，浙江溫州 325035

撲爾敏PLGA緩釋微球的制備及體外質(zhì)量評價

周榮平 姚雯雯 傅紅興▲李 慧 葉其純 夏 烽

溫州醫(yī)學院藥學院，浙江溫州 325035

目的 以撲爾敏為模型藥物，開發(fā)一種PLGA緩釋微球給藥系統(tǒng)。 方法 采用復乳-溶劑揮發(fā)法制備撲爾敏PLGA緩釋微球，紫外分光光度法測定其載藥量、藥物釋放。 結(jié)果 制得的撲爾敏PLGA緩釋微球平均粒徑為（112±57）μm，含藥量為（798.33±145.00）μg，載藥量為（0.32±0.12）%；藥物9 d累積藥物釋放量可達87%。 結(jié)論 本研究撲爾敏PLGA緩釋微球制備方法簡單，藥物能達到長期緩慢釋放。

撲爾敏；乳酸/羥基乙酸共聚物；微球；復乳-溶劑揮發(fā)法

微球是指利用天然的或合成的高分子材料將固體微?；蛞旱伟饋淼奈⑿颓驙顚嶓w[1]。微球被用于藥物控緩釋體系來治療許多疾病，或者通過靶向作用使藥物到達特定的組織和器官后緩慢釋放，提高藥物的治療效果[2]。乳酸-羥基乙酸共聚物（PLGA）是FDA 批準用于臨床試驗的可生物降解高分子聚合物，體內(nèi)代謝終產(chǎn)物為CO2和H2O，常用于作為緩釋微球的載體[3]。撲爾敏為水中溶解藥物，主要用于抗過敏治療，臨床上有Smith Kline Beecham公司生產(chǎn)的撲爾敏緩釋小丸，作為組織胺H1受體拮抗劑，抗組胺作用較持久。本研究選擇撲爾敏做為模型藥物，采用復乳（W/O/W）-溶劑揮發(fā)法制備撲爾敏緩釋微球，探討了其制備條件對微球的粒徑大小及其分布、包封率和載藥量的影響。

1 儀器與試藥

1.1 試藥

撲爾敏（99.8%，湖北興銀河醫(yī)藥化工有限公司）；聚乳酸-羥基乙酸共聚物（PLGA，山東省醫(yī)療器械研究所提供，LA-GA：50∶ 50，M.W.10 000）；泊洛沙姆 188（F68，德國巴斯夫公司）；吐溫-80、司盤-80（中國醫(yī)藥集團上?；瘜W試劑公司）。

1.2 儀器

紫外可見分光光度計（UV-7502 PC，上海欣茂儀器有限公司）；冷凍干燥機（北京博醫(yī)康實驗儀器有限公司）；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；掃描電鏡（S-3000N，HITACHI，日本）。

2 實驗方法

2.1 撲爾敏PLGA緩釋微球的制備

資料[4]及本實驗室已有基礎，稱取撲爾敏8 mg至1.5 mLEP管中，加入50 μL蒸餾水中溶解，加1 mLPLGA溶液（二氯甲烷∶丙酮=3∶1為溶劑）混勻，吸至5 mL注射器，逐滴加至20 mL含F(xiàn)-68的蒸餾水中，用磁力攪拌器攪拌，轉(zhuǎn)速500 rpm。滴加完后將含藥PLGA溶液迅速倒至100 mL攪拌的蒸餾水中，室溫下攪拌12 h，使PLGA固化。將溶液放置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至約30 mL，加入5%乳糖作為凍干保護劑在真空下凍干即得。

2.2 撲爾敏含量測定

2.2.1 撲爾敏標準曲線的繪制 精密稱定撲爾敏25 mg置250 mL容量瓶中，加生理鹽水溶解并定容作為母液。移取上述母液 1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、30.0 mL 置 100 mL 容量瓶，加生理鹽水定容，得到濃度為1.0～30.0 μg/mL，在223 nm處用紫外測定吸收度A，以空白生理鹽水調(diào)零，對濃度（C）和吸收度（A）進行回歸得到標準曲線方程：C=22.721A+0.161 1，R2=0.999 7；說明撲爾敏在1.0～30.0 μg/mL范圍內(nèi)濃度與吸收度之間線性關系良好。

2.2.2 制劑總含藥量測定 精密稱取微球凍干制劑（含撲爾敏約1 mg）至15 mL離心管中，加入5 mL生理鹽水充分混懸，移取1 mL至25 mL的容量瓶中，用生理鹽水定容，再加入二氯甲烷1 mL，超聲破膜1 min，3 000 rpm離心5 min，取上層水相，稀釋后在223 nm處測定吸光度A，代入標準曲線計算微球的總含藥量。

2.3 微球粒徑的測定

取撲爾敏PLGA緩釋微球凍干粉末，加生理鹽水3 mL，分散均勻后，吸取微球混懸液1 mL，光鏡下測定其平均粒徑。記錄為平均粒徑（± s）。

2.4 微球的體外藥物釋放實驗

精密稱取微球適量（含撲爾敏藥量約2 mg），均勻分散于6 mL 生理鹽水中，裝入密閉透析袋，置于100 mL 生理鹽水中，在磁力攪拌器中（37.0±0.5）℃，500 r/min，分別于 0、2、4、8、12、24、36、48、60、72、120、144、168、192、216 h 取 出 釋 放介質(zhì)5 mL，同時補充生理鹽水5 mL，可見分光光度法測定吸光度。代入標準曲線計算不同時間的藥物釋放量和累積釋放百分率。

2.5 微球外觀形態(tài)的觀察

稱取撲爾敏 PLGA緩釋微球凍干粉末適量，用蒸餾水混懸后過0.22 μm微孔濾膜后，室溫下自然干燥或凍干，在真空下噴金，再利用電鏡的二次電子方式進行觀測。

3 結(jié)果

3.1 撲爾敏PLGA緩釋微球的外觀及平均粒徑

撲爾敏PLGA緩釋微球凍干粉外觀呈均勻的白色疏松塊狀物，色澤均勻，外觀飽滿，表面細膩光潔。稱取10 mg凍干樣品加生理鹽水2 mL混懸后在光學顯微鏡下觀察測量，結(jié)果顯示撲爾敏 PLGA微球平均粒徑為（112±57）μm。

3.2 微球質(zhì)量評價

3.2.1 含量測定結(jié)果（表1）

表1 撲爾敏微球制劑總含量測定（ ± s，n=10）

表1 撲爾敏微球制劑總含量測定（ ± s，n=10）

指標 含藥量（μg） 載藥量（%） 藥物利用率（%）結(jié)果 798.33±145.00 0.32±0.12 32.70±5.77

由表1可知，PLGA微球中藥物的含量和載藥量依然比較低。

3.2.2 藥物釋放度的實驗結(jié)果 以37℃的生理鹽水溶液為釋放介質(zhì)，對撲爾敏PLGA緩釋微球的體外釋藥，見圖1。

圖1 微球藥物釋放度曲線圖

由圖1可見，微球體外釋藥9 d累積藥物釋放量可達87%，最初24 h內(nèi)，吸附在微球表面的藥物快速釋放，形成突釋，有利于藥物的快速起效；而24 h 后藥物釋放較勻速，接近零級釋放，可減少藥物濃度的波動和副反應，可延長藥物濃度處于有效期的時間。

3.2.3 PLGA微球外觀形態(tài)的觀察

由圖2、3可見，在自然干燥條件下，撲爾敏PLGA微球呈現(xiàn)圓潤光滑的球體；而在烘干條件下，微球則出現(xiàn)塌陷和皺縮的情況。這說明溫度升高，PLGA微球會產(chǎn)生變形。

圖2 撲爾敏PLGA微球自然干燥

圖3 撲爾敏PLGA微球烘干

4 討論

水溶性藥物的包封率一般均比較低，尤其在以水為外水相時，本研究采用復乳-溶劑揮發(fā)法來制備載藥微球，理論上較0/W或W/0法的對水溶性藥物的包封率要高[5]。實驗中也發(fā)現(xiàn)，隨著PLGA濃度提高，相同條件下形成的納米粒包封率、藥物利用率都隨之增大。其原因可能為當PLGA濃度增大時，油相粘度隨之上升，使得納米粒在分散形成過程中速度減慢，藥物不易隨著有機溶劑揮發(fā)而向球外擴散，因此藥物損失減小。今后研究重點是通過配方和制作工藝的改進從而完善此緩釋系統(tǒng)，以便更好地應用于醫(yī)學領域。

[參考文獻]

[1] 朱家蕙，沈正榮，王芳，等.含睪丸酮的乳酸聚乳酸共聚物微球的制備及外釋放 [J].中國藥學雜志，1997，32（10）：595-598.

[2] 賈文娟.藥物緩釋微球的制備、表征及性能研究[D].成都：四川大學，2007，24（5）：38-42.

[3] Gomes A J，F(xiàn)austino A S，Machado A E H，et al.Characterization of PLGA microparticles as a drug carrier for 3-ethoxycarbonyl-2H-benzofuro [3，2-f]-1-benzopyran-2-one ultrastructral study of cellular uptake and intracellular distribution[J].Drug Deliv，2006，13（2）：447-454.

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[5] Gomes A J，F(xiàn)austino A S，LunardiC N，et al.Evaluation of nanoparticles loaded with benzopsoralen in rat peritoneal exudates cells[J].Int J Pharm，2007，332：153-160.

Preparation of Chlorpheniramine PLGA sustained release microspheres and quality evaluation in vitro

ZHOU Rongping YAO Wenwen FU Hongxing LI Hui YE Qichun XIA Feng
Wenzhou Medical College Pharmacy School,Wenzhou 325035,China

ObjectiveTo develop of a new type of PLGA microspheres drug delivery system of Chlorpheniramine.MethodsThe PLGA sustained-release microspheres were made by double emulsion-solvent evaporation technique. The contents and the drug release were determined by ultraviolet spectrophotometry.ResultsThe mean diameter of PLGA microspheres is(112±57)μm,the contents of the drug is(798.33±145.00)μg, and the drug loading is(0.32±0.12)%.Drug accumulate release in 9 days can reach 87%.ConclusionThe Chlorpheniramine PLGA sustained-release microspheres are easily made,and the drugs can achieve long-term sustained release.

Chlorpheniramine;Poly lactic-co-glycolic acid;Microspheres;Double emulsion-solvent evaporation technique

R917

A

2095-0616（2012）09-52-02

溫州醫(yī)學院本?？茖W生科研立項資助課題（wyx201101052）?！?/p>

（收稿日期：2012-03-22）