張秀環(huán)，胡昌江，戴德蓉，馮 健

(四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司藥物研究所，四川 成都 611930)

赤芍為毛茛科植物芍藥 Paeonia lactiflora Pall.或川赤芍Paeonia veitchii Lynch.的干燥根，性微寒、味苦，具有清熱涼血、散瘀止痛之功效[1]。赤芍的主要有效成分為芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、氧化芍藥苷等多種苷類物質(zhì)，總稱為赤芍總苷，其中芍藥苷為赤芍中含量較高的主要有效成分之一[2]?，F(xiàn)代藥理研究表明，赤芍具有多種藥理功能，主要作用于心血管系統(tǒng)，還具有抗腫瘤、抗內(nèi)毒素等[3-4]功效。赤芍配方顆粒由芍藥或川赤芍中藥飲片經(jīng)現(xiàn)代制藥工藝提取、濃縮、干燥、制粒而成，目前其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究未見文獻(xiàn)報(bào)道，國(guó)家也尚未出臺(tái)中藥配方顆粒標(biāo)準(zhǔn)。為給國(guó)家制訂赤芍配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考，也為有效控制赤芍配方顆粒的質(zhì)量，筆者參照2010年版《中國(guó)藥典(一部)》方法，并對(duì)其加以改進(jìn)，采用薄層層析(TLC)法建立了定性方法，采用高效液相色譜(HPLC)法建立了含量測(cè)定方法，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Linomat 5_17065 CAMAG(瑞士制造);170513 CAMAG TLC visualizer(瑞士制造);Agilengt 1200型高效液相色譜儀;Agilengt 1200化學(xué)工作站;BP-211D型電子天平(德國(guó)Satorius);KQ3200B型超聲波清洗器(昆山市儀器有限公司)。芍藥苷對(duì)照品(批號(hào)為0736-9912，中國(guó)藥品生物制品檢定所);赤芍購(gòu)自河北安國(guó)中藥材市場(chǎng)，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院胡昌江教授鑒定為毛茛科植物芍藥 Paeonia lactiflora Pall.的干燥根。赤芍配方顆粒(四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司);乙腈(色譜純，迪馬公司 )，水為重蒸水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 定性鑒別

取本品顆粒1 g，加乙醇20 mL使溶解，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖? mL使溶解，作為供試品溶液。精密稱取在五氧化二磷減壓干燥器中干燥36 h的芍藥苷對(duì)照品，加乙醇制成每1 mL含2 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。取赤芍藥材2 g，加乙醇20 mL使溶解，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖? mL使溶解制成對(duì)照藥材溶液。另取赤芍配方顆粒的陰性對(duì)照品3.0 g，照供試品溶液的制備方法，制成陰性對(duì)照品溶液。照薄層色譜法2010年版[《中國(guó)藥典(一部)》附錄ⅥB]試驗(yàn)，吸取上述4種溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠 G薄層板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10 ∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置日光下檢視。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同的藍(lán)紫色斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品溶液色譜圖則無(wú)此斑點(diǎn)(見圖 1)。

圖1 赤芍薄層色譜圖

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Phenomenex C18柱(150 mm×4.60 mm，5μm);流動(dòng)相:乙腈-0.1%磷酸(14∶86);流速:1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):230 nm;柱溫:35℃。在此條件下，赤芍配方顆粒中芍藥苷的分離度好，理論板數(shù)較高，峰形對(duì)稱性好。色譜圖見圖2。

圖2 高效液相色譜圖

2.2.2 溶液制備

精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥器中干燥36 h的芍藥苷對(duì)照品1.7 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，微孔濾膜(0.45μm)過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得對(duì)照品溶液。取赤芍配方顆粒(批號(hào)為090401)約0.1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇溶液50 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，冷卻至室溫，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾紙過(guò)濾，濾液用微孔濾膜(0.45μm)過(guò)濾，取續(xù)濾液即得供試品溶液。

2.2.3 方法學(xué)考察

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:分別精密吸取芍藥苷對(duì)照品溶液(0.485 g/mL)0.5，1.0，2.0，5.0，10.0 μL，依次進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。以進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)(Y)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=1 289.2 X-2.165 2，r=0.999 97(n=5)。結(jié)果表明，芍藥苷進(jìn)樣量在0.243～4.850μg范圍內(nèi)與峰面積線呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):精密吸取對(duì)照品溶液(0.17 g/L)10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。結(jié)果芍藥苷峰面積平均值為2 657，RSD為1.93%(n=6)，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn):稱取同一批樣品(批號(hào)為090401)，精密稱定，依法制備供試品溶液，共6份，測(cè)定峰面積。結(jié)果的 RSD為0.42(n=6)，表明方法重現(xiàn)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):精密吸取對(duì)照品溶液(0.17 g/L)和供試品溶液各 10 μL，置室溫下放置，分別于 0，2，4，6，8，10 h 時(shí)進(jìn)樣，按擬訂的色譜條件測(cè)定峰面積。結(jié)果對(duì)照品溶液的 RSD為1.03(n=6)，供試品溶液的 RSD為0.60(n=6)，表明對(duì)照品溶液和供試品溶液在10 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn):精密稱取已知含量的供試品溶液(批號(hào)為090401)6份，分別精密加入對(duì)照品溶液適量，按供試品溶液制備方法和測(cè)定方法，在上述條件下測(cè)定含量。結(jié)果見表1。

表1 芍藥苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.2.4 樣品含量測(cè)定

分別取不同批號(hào)的赤芍配方顆粒約0.1 g，精密稱定，依法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣10μL，按擬訂的色譜條件測(cè)定芍藥苷峰面積，計(jì)算芍藥苷含量。結(jié)果批號(hào)分別為091116，0909111，1012046，1012050，081201，090401，090501 的樣品中芍藥苷含量分別為 52.95，52.62，50.16，47.09，77.63，77.63，77.63 mg/g。7批樣品含量測(cè)定結(jié)果顯示，芍藥苷含量在47.09～77.63 mg/g之間，建議本品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中芍藥苷含量不得少于40 mg/g。

3 討論

采用薄層色譜法對(duì)赤芍配方顆粒進(jìn)行定性鑒別。2010年版《中國(guó)藥典(一部)》赤芍薄層色譜[鑒別]項(xiàng)下，供試品的處理方法采用振搖提取。為了適應(yīng)配方顆粒制備工藝的要求，本研究在藥典方法的基礎(chǔ)上加以改進(jìn)，供試品采用超聲提取30 min，以便赤芍的有效成分充分溶出。同時(shí)，以芍藥苷對(duì)照品和赤芍對(duì)照藥材作為參照，相關(guān)性強(qiáng)，說(shuō)明了赤芍配方顆粒制備工藝的合理。經(jīng)多批樣品的重復(fù)試驗(yàn)，證明該薄層色譜法簡(jiǎn)便、靈敏、專屬性強(qiáng)，可用于樣品的定性鑒別。

本研究對(duì)赤芍配方顆粒進(jìn)行了多展開系統(tǒng)的薄層色譜考察。在其他條件相同的情況下，以三氯甲烷-甲醇-醋酸乙酯(5∶1)展開系統(tǒng)進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)，結(jié)果也能將芍藥苷較好分離，但薄層色譜圖譜上斑點(diǎn)比較少，不能將其他成分有效分離。

現(xiàn)行藥典以甲醇-0.05 mol/L磷酸二氫鉀(40∶65)為流動(dòng)相，芍藥苷分離度、理論板數(shù)均較好，但峰拖尾現(xiàn)象較嚴(yán)重。本研究以乙腈-0.1%磷酸溶液(14∶86)為流動(dòng)相，色譜柱Phenomenex C18柱 (150 mm ×4.6 mm，5μm)為固定相，對(duì)樣品進(jìn)行分析，分離度好，理論板數(shù)較高，峰形對(duì)稱性好。

中藥配方顆粒作為單味中藥濃縮制成的顆粒劑，其標(biāo)準(zhǔn)與一般的顆粒劑比較，應(yīng)更加完善。只有提高配方顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，才能顯示其與一般顆粒劑或傳統(tǒng)飲片的不同之處，才能保證其內(nèi)在質(zhì)量。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2010:147-148.

[2]阮金蘭，趙鐘祥.赤芍化學(xué)成分和藥理作用的研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2003，19(9):965-970.

[3]冀蘭鑫，黃 浩.赤芍藥理作用的研究進(jìn)展[J].藥物評(píng)價(jià)研究，2010，33(3):233-236.

[4]劉 超，王 靜.赤芍總甙活血化瘀作用的研究[J].中藥材，2000，23(9):557.

[5]張海燕.免煎中藥配方顆粒的臨床應(yīng)用[J].華北煤炭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，12(4):496-498.