劉紅宇 楊勵 曾建國
1.湖南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院藥劑科,湖南長沙 410007;2.湖南省長沙市中心醫(yī)院,湖南長沙 410004
RP-HPLC法測定益肺通絡顆粒中巖白菜素的含量
劉紅宇1楊勵2曾建國2
1.湖南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院藥劑科,湖南長沙 410007;2.湖南省長沙市中心醫(yī)院,湖南長沙 410004
目的建立益肺通絡顆粒有效成分巖白菜素的含量測定方法。方法采用RP-HPLC法,Agillent高效液相色譜儀,Kromasil ODS(250mm×4.6mm,5μm)色譜柱;甲醇-水(20∶80)為流動相;流速為1mL/min;柱溫為30℃;檢測波長為275 nm;靈敏度為0.05 AUFS。進樣量10μL。結(jié)果在該方法中,巖白菜素進樣量在0.054~0.540μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系,r=0.999 06,平均回收率為98.53%,RSD為1.32%。結(jié)論本方法準確簡便,準確,重復性好,可用于益肺通絡顆粒中有效成分巖白菜素的含量測定。
益肺通絡顆粒;巖白菜素;含量測定;高效液相色譜法
益肺通絡顆粒由黃精、百部、天冬、鱉甲、白及、矮地茶、絲瓜絡、紫花地丁、太子參、款冬花、大薊11味中藥組成,具有益氣養(yǎng)陰、化瘀通絡、去腐生新的功效,主治氣陰兩虛夾瘀型肺結(jié)核。處方中除鱉甲單煎外,其余十味藥全部煎煮提取,合并二煎液濃縮制成顆粒。方中矮地茶化痰止咳,清利濕熱,活血化痰。全株主含揮發(fā)油0.1%~0.2%,在去油后的殘渣中分離得鎮(zhèn)咳有效成分矮茶素1號(即巖白菜素,bergenin)和矮茶素2號,尚含2-羥基-5-甲氧基-3-十五烯基苯醌等化合物及三萜類化合物。其活性成分矮茶素1號對電刺激貓喉上神經(jīng)所引起的咳嗽及氨水噴霧引起的小鼠咳嗽都有明顯的止咳作用[1];矮地茶有降低大鼠氣管-肺組織耗氧量的作用,矮茶素1號作用于含硫氫基必需基團的酶體系,因而降低了組織呼吸;每日吸入二氧化硫產(chǎn)生慢性氣管炎的大鼠,內(nèi)服矮茶素1號有一定的預防及治療作用,表現(xiàn)為杯狀細胞減少、炎細胞浸潤、肺氣腫及肺萎縮程度減輕[2-3]。為控制益肺通絡顆粒中矮地茶的質(zhì)量,本文在綜合相關(guān)色譜分析方法的基礎上[4-7],建立了益肺通絡顆粒中巖白菜素的RP-HPLC含量測定方法,為益肺通絡顆粒中矮地茶的質(zhì)量控制提供了方法和依據(jù)。
1.1 儀器
Agillent高效液相色譜儀,色譜柱KromasilODS(250mm× 4.6 mm,5μm);超聲波清洗器(KQ-600型);萬分之一電子分析天平。
1.2 試劑及樣品
試劑:甲醇為色譜純(天津市科密歐化學試劑有限公司,20110406),水為重蒸餾水,其他試劑均為分析純。巖白菜素對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號:1532-200202)。益肺通絡顆粒(自制,批號:110605、110615、110625)
2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應性
Kromasil ODS(250 mm×4.6 mm,5μm)色譜柱;甲醇-水(20∶80)為流動相;流速為1 mL/min;柱溫為30℃;檢測波長為275 nm;靈敏度為0.05 AUFS,理論塔板數(shù)大于3 000,拖尾因子(T)為0.940。
2.2 溶液的制備
2.2.1 對照品溶液的制備精密稱取干燥至恒重的巖白菜素5.4mg,用甲醇溶解制成0.054mg/mL的對照品溶液,備用。
2.2.2 供試品溶液的制備取本品顆粒約0.5 g,精密稱定,置入50mL量瓶中,加入甲醇40mL,超聲處理40min,放冷后加入甲醇至刻度,濾過,取續(xù)濾液10μL進樣,測定。
2.2.3 陰性溶液的制備按本品制劑工藝制備不含矮地茶的制劑,同供試品溶液制備方法制備,進樣量同上,測定。各溶液色譜見圖1。
2.3 線性關(guān)系考察
精密量取巖白菜素對照品溶液(0.054 mg/mL)1、2、4、6、8、10μL進樣。測定其峰面積,以峰面積值(A)對進樣量(C)進行回歸,得標準曲線方程A=63.705 84C-1.775 24(r= 0.999 06)。以上結(jié)果表明,在0.054~0.540μg范圍內(nèi),巖白菜素峰面積值與進樣量有良好的線性關(guān)系。
2.4 精密度試驗
精密吸取上述對照品溶液8μL,重復進樣6次,測定巖白菜素峰面積,結(jié)果分別為497.22、510.34、509.00、504.60、508.24、507.02,RSD為0.94%。
2.5 穩(wěn)定性試驗
取供試品溶液(批號:110615)在0、1、2、4、8、24 h,分別進樣8μL,測定樣品中巖白菜素峰面積,結(jié)果分別為175.47、176.54、175.64、177.67、178.40、174.48,RSD為0.83%,表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。
2.6 重現(xiàn)性試驗
按擬定的含量測定方法,對同一批樣品(批號:110615)分別制備供試品溶液,測得峰面積值并計算含量,RSD為1.47%,表明方法重現(xiàn)性良好。
2.7 加樣回收率試驗
精密稱取已知含量的樣品(批號:110615)約0.1 g,分別加入對照品溶液(0.054 mg/mL)3 mL,按上述樣品制備方法和色譜條件,制備加樣回收供試品溶液并注入高效液相色譜儀,計算回收率。見表1。試驗結(jié)果表明,此方法可靠性良好。
表1 回收率試驗結(jié)果
2.8 樣品測定
取3批樣品,按供試品溶液制備方法操作,按擬定的色譜條件測定其峰面積,每批樣品測定6份,結(jié)果取平均值,3批樣品中巖白菜素的含量分別為1.76、1.67、1.84 mg/g,見表2。
表2 樣品中巖白菜素含量測定結(jié)果
矮地茶為本方主藥之一,且用量較大,其功用化痰止咳,清利濕熱,活血化痰,符合本方益肺通絡的中醫(yī)基本理論,巖白菜素為矮地茶的有效成分之一,故選擇巖白菜素作為控制本品質(zhì)量的指標成分。
在巖白菜素的高效液相色譜法試驗中,在對巖白菜素進行全波長掃描中,發(fā)現(xiàn)該化合物有2個吸收峰,分別位于220 nm和275 nm,考慮流動相中甲醇在220 nm波長處對基線有影響,故試驗中檢測波長選擇為275 nm[8],參照《中國藥典》2010年版[9]及相關(guān)文獻[10-12],流動相考察了甲醇-水(15∶85),甲醇-水(20∶80),甲醇-水(25∶75)等,系統(tǒng)流速設置為1.0 mL/min,試驗結(jié)果顯示用甲醇-水(15∶85)洗脫,出峰時間超過20min,而用甲醇-水(25∶75)來洗脫則出現(xiàn)與其他峰相隔較近及基線不平現(xiàn)象,最后選用甲醇-水(20∶80)為流動相,色譜圖中巖白菜素的保留時間為12min左右,峰形較好,且無其他雜質(zhì)峰干擾;供試品制備考察中,則對不同的超聲時間(30、40、50min)作了比較,結(jié)果表明40min和50min測得的含量相差不大,30 min得出的含量較低,故采用超聲40min為宜。試驗結(jié)果表明該方法具有分離效果好、靈敏度高、準確度高等優(yōu)點,可作為益肺通絡顆粒的質(zhì)控方法。
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RP-HPLC determ ination of bergenin in Yifei Tongluo Granules
LIU Hongyu1 YANG Li2 ZENG Jian'guo2
1.Department of Pharmacy,the First Affiliated Hospital to Hu′nan University of Chinese Medicine,Hu′nan Province, Changsha 410007,China;2.The Central Hospital in Changsha City,Hu′nan Province,Changsha 410004,China
ObjectiveTo establish amethod for determination of bergenin in compound Yifei Tongluo Granules.MethodsThe RP-HPLC method was adopted.The Kromasil ODS column(4.6 mm×250 mm,5μm)was used at the column temperature of 30℃.The mobile phase consisted ofmethanol-water(20∶80)with the flow rate of 1.0 mL/min and the detection wavelength was 275 nm.ResultsThere was a good linear relationship between the peak area and the sample size of bergenin within the range of 0.054-0.540μg,r=0.999 06,and the average recovery rate was 98.53%with the RSD of 1.32%(n=6).ConclusionThemethod is simple,accurate and repeatable,which can be used for the quality control of Yifei Tongluo Granules.
Yifei Tongluo Granules;Bergenin;Content determination;HPLC
R927
A
1673-7210(2012)10(c)-0108-03
2011年度湖南省中醫(yī)藥科研計劃項目(項目名稱:“益肺通絡顆粒”的研制;項目編號:201113)。
劉紅宇(1973.1-),女,湖南長沙人,博士研究生,副主任藥師,主要從事中藥質(zhì)量標準研究。
曾建國,男,湖南長沙人,本科,主任藥師,主要從事新藥研發(fā)工作。
2012-07-25 本文編輯:衛(wèi)軻)