賀 倩，胡 丹，顏天華

中國藥科大學(xué)生理教研室，南京 210009

XY02是CA4P的衍生物。CA-4是從產(chǎn)于南非的風(fēng)車子屬植物Combretum caffrum的根、皮中分離得到的具有抗腫瘤作用的順式二苯乙烯類化合物之一；為增加其水溶性，將其衍生化為磷酸酯，稱CA-4P（見圖1）[1-2]。為進(jìn)一步提高其抗腫瘤活性，對CA-4的結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾，XY02是其衍生物之一，本文對XY02的抗人非小細(xì)胞肺癌的藥效進(jìn)行初步研究。

圖1 CA-4P的結(jié)構(gòu)式

1 材 料

1.1 儀器

微量注射器（中國藥科大學(xué)校衛(wèi)生室提供）；高壓蒸汽滅菌鍋（上海騰宇生物科技有限公司，型號LDZX-50KB）；顯微鏡（上海光學(xué)儀器廠）；電子天平（北京賽多利斯天平有限公司）。

1.2 試藥

XY02由中科院上海藥物研究所合成并提供，使用時用生理鹽水配制到所需要的濃度；陽性對照藥注射用順鉑[cis-Dichlorodiammine platinum（Ⅱ），DDP]由云南個舊生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號：071001，規(guī)格 2 mL/10 mg；陽性對照藥 CA4P（Combretaftation A-4P，CA4P），由中國藥科大學(xué)生命科學(xué)院于2011年8月合成，使用時用生理鹽水配制到所需要的濃度。

1.3 細(xì)胞和動物

腫瘤細(xì)胞株NCI-H460，中科院上海藥物研究所傳代培養(yǎng)；SPF級裸小鼠Balb/c-nu（雄性，42只，體重22～24 g，常規(guī)喂養(yǎng)），由北京協(xié)和實(shí)驗(yàn)動物中心（北京華阜康生物科技有限公司）提供,動物合格證號：SCXK（京）2011-0001。

2 方法與結(jié)果

2.1 動物模型的建立、分組以及數(shù)據(jù)處理

取未經(jīng)處理的NCI-H460細(xì)胞接種于全部42只裸小鼠背部皮下[3]，皮下接種（約 5×106～10×106個細(xì)胞）0.2mL/只[4]，建立裸鼠人肺癌移植瘤模型,待瘤結(jié)節(jié)直徑＞5mm后[3],進(jìn)行分組。共分為6組：生理鹽水對照組、陽性對照DDP組、CA4P組、XY02高（120 mg·kg-1）、中（80 mg·kg-1）、低（40 mg·kg-1）劑量組。所有配制的藥物和相關(guān)器械均滅菌處理。

2.2 化合物XY02對裸鼠體內(nèi)非小細(xì)胞肺癌NCIH460的影響

按上述方案分組后稱重，立即首次尾靜脈注射（iv）給藥并測量初始腫瘤體積，記為V0。以后隔天稱重、測量體積并給藥一次。第24天最后一次測量體重和腫瘤體積，隨后處死各組裸鼠。記錄第24天各組小鼠數(shù)量，并且測量每只裸小鼠腫瘤體積：TV=1/2×a×b2（a、b 分別表示長、寬），相對腫瘤體積：RTV=Vn/V0（V0為分組首次給藥時測得的腫瘤體積，Vn第24天測量時的腫瘤體積）。相對腫瘤增殖率：T/C=RTV實(shí)驗(yàn)給藥組/RTV對照組×100%，此值表示對腫瘤的抑制。XY02對人肺癌NCI-H460抗腫瘤作用見圖2。

結(jié)果如表1所示，XY02的高、中劑量組、陽性對照DDP組的RTV與生理鹽水對照組均有顯著差異（P＜0.01）。XY02對人肺癌NCI-H460有療效。

表1 XY02對人體肺癌NCI-H460抗腫瘤療效

圖2 XY02對人肺癌NCI-H460抗腫瘤作用中腫瘤動態(tài)變化

3 討 論

腫瘤嚴(yán)重威脅著人類的健康和生活質(zhì)量，近幾年來我國的腫瘤發(fā)病率有增長并低齡化趨勢。惡性腫瘤致死率高，故開發(fā)新的抗腫瘤藥物刻不容緩。

裸鼠荷瘤模型是腫瘤體內(nèi)藥物篩選的最常用模型，特別是針對實(shí)體腫瘤的篩選。人體腫瘤在裸鼠體內(nèi)的轉(zhuǎn)移有如下幾個階段：局部生長、腫瘤細(xì)胞體內(nèi)游走、浸潤、入侵淋巴管、血管附著、增殖、著落于遠(yuǎn)隔器官內(nèi)再生長[5]。移植瘤實(shí)驗(yàn)時可以取臨床腫瘤標(biāo)本或已經(jīng)建立瘤株的細(xì)胞系，在裸鼠皮下形成穩(wěn)定傳代的腫瘤,觀察腫瘤的轉(zhuǎn)移是否和臨床現(xiàn)象一致，再取出移植瘤反復(fù)篩選，直至形成高轉(zhuǎn)移模型[6]。其中，肺癌的移植成功率為51%[7]，本實(shí)驗(yàn)選擇T細(xì)胞免疫缺陷裸小鼠Balb/c。有研究發(fā)現(xiàn)Balb/c裸鼠體內(nèi)NK細(xì)胞活性比同齡NIH （S）裸鼠NK細(xì)胞活性低，故前者移植瘤易發(fā)生轉(zhuǎn)移；同時傳代瘤株使用某種免疫缺陷動物后，宜繼續(xù)使用同一品系動物，否則就會使瘤株發(fā)生變異，從而可能成為另一種瘤株[8]。理論上，腎包膜應(yīng)該是接種的首選。因?yàn)槠浣馄式Y(jié)構(gòu)清晰，缺乏免疫監(jiān)視，血流豐富,為腫瘤細(xì)胞存活和生長提供充足營養(yǎng)，有利于腫瘤轉(zhuǎn)移侵襲，有利于定量分析[9]；但是其接種難度較大、容易引發(fā)感染。其它接種部位還有鼠的爪墊、耳緣后等。由于本實(shí)驗(yàn)所用裸鼠周齡較小，接種在這些部位不易測量腫瘤大小。故本實(shí)驗(yàn)選擇接種部位是背部。

本實(shí)驗(yàn)選擇順鉑 [cis-Dichlorodiammine platinum（Ⅱ），DDP]作為陽性對照藥。因?yàn)镈DP是臨床上經(jīng)典的抗腫瘤藥物，雖然該藥在低劑量下毒副作用較嚴(yán)重，但其對卵巢癌及睪丸癌療效顯著，對肺癌、惡性淋巴瘤、乳腺癌、腎細(xì)胞癌、前列腺癌、軟組織肉瘤、惡性黑色素瘤有一定療效[10]?？傮w上順鉑是抗實(shí)體瘤的一種藥物。實(shí)驗(yàn)用的是7 mg·kg-1的低劑量，盡可能減少動物毒副反應(yīng)造成的死亡。

實(shí)驗(yàn)各組均沒有出現(xiàn)動物死亡，說明各組均未出現(xiàn)嚴(yán)重的毒副反應(yīng)。XY02的劑量在安全范圍內(nèi)；但也有可能是各給藥組的動物數(shù)量偏少 （只有6只），無法反映全面出毒副反應(yīng)。生理鹽水組初始采用12只動物，比其他組多，其安排的目的是由于該組動物沒有給藥治療，所以可能會由于腫瘤引起死亡。為確保對照組在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時仍有足夠的動物，故該組的初始動物數(shù)量比其他給藥組多。

實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)XY02給藥時對腫瘤相對增長率（T/C）%的影響是劑量依賴性的。所用劑量愈高，腫瘤（T/C）%值越低。XY02的高、中劑量組腫瘤（T/C）%比CA4P組低，但低劑量組比CA4P組高。DDP組的相對腫瘤增長率是所有組中最低的，僅為7.38%，而其他組均沒有低于30%。說明DDP作為一種經(jīng)典抗腫瘤藥物對腫瘤增長抑制效果良好。不過，不同抗腫瘤藥物的（T/C）%不同，可能是其抗腫瘤生長的機(jī)制不同所致，這有待進(jìn)一步研究。

各組的初始腫瘤體積 （d0時TV）沒有顯著差異，說明造模的成功。XY02高、中劑量組的相對腫瘤體積（RTV）與空白對照組RTV相比，均有極顯著差異。但是，CA4P組的RTV與空白對照組相比卻無顯著差異。這提示CA4P的長時間（實(shí)驗(yàn)中24天）使用對腫瘤瘤體生長的抑制不如XY02組，即它的長時間藥效可能不如XY02。而DDP組的RTV與空白對照組差異顯著，且所用劑量最少（僅7 mg·kg-1），再次證明它是一個經(jīng)典的抗腫瘤藥。

圖2中所有組的腫瘤體積都在隨時間的增加而增大，DDP組的增長趨勢是所有組中最緩慢平穩(wěn)的。16天以后，除DDP組以外，XY02各組增長速率明顯增加，且與劑量增加成反比。腫瘤對XY02很可能產(chǎn)生了耐受性。CA4P組腫瘤體積的增長速度比XY02中劑量組略快，但低于XY02低劑量組腫瘤增長速度。說明XY02中劑量組的腫瘤抑制效果略好于CA4P組；而低劑量組XY02的長期腫瘤生長抑制效果不如CA4P組。

經(jīng)過實(shí)驗(yàn)，可以初步證明XY02體內(nèi)對人非小細(xì)胞肺癌NCI-H460具有一定的生長抑制作用，為其進(jìn)一步開發(fā)成抗該腫瘤的藥物奠定了基礎(chǔ)。

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