蘇日古格，佟春蘭，包海鷹

（吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130118）

蒙古口蘑（Tricholoma mongolicum Imai），又稱白蘑、口蘑、草原白蘑、珍珠蘑、查干蘑菇、云盤蘑、銀盤蘑等。由日本真菌學(xué)者今井三子（S.Imai）于1937年定名發(fā)表，并記載其漢語名稱為白蘑菇[1]。隸屬于傘菌目（A-garicales）、口蘑科（Tricholomataceae）、口蘑屬（Tricholoma）真菌。夏秋季尤其在立秋前后大量地產(chǎn)生在草原上群生并形成蘑菇圈。分布于我國(guó)東北、河北張家口以北及內(nèi)蒙古中東部,東起呼貝爾盟[2]，西達(dá)包頭地區(qū)[3]，蒙古，俄羅斯的亞洲地區(qū)（阿爾泰）[4，5]。蒙古口蘑子實(shí)體較大，菌肉肥厚、質(zhì)地鮮嫩、味鮮香濃，為著名食藥用菌[6]。民間用于消化不良，脘腹脹滿，胃氣痛，泄瀉等癥，在民間也流傳著許多單驗(yàn)方及食療方[7]。在蒙藥中用于治療外傷及解毒[8]。

蒙古口蘑（Tricholoma mongolicum）是我國(guó)寶貴的食藥用菌資源，由于蒙古口蘑自然生長(zhǎng)季節(jié)性強(qiáng)，加之生態(tài)環(huán)境惡化、資源銳減，至今尚不能實(shí)現(xiàn)人工馴化栽培[9，10]，所以蒙古口蘑的產(chǎn)量和質(zhì)量每況愈下，難以滿足商品化、市場(chǎng)化的要求，導(dǎo)致蒙古口蘑價(jià)格上漲,每公斤蒙古口蘑要幾百元甚至上千元。由于價(jià)格昂貴市場(chǎng)上出現(xiàn)了大量的蒙古口蘑劣質(zhì)品及偽品。本文從性狀鑒定、薄層色譜鑒定、紅外檢測(cè)、石油醚提取物的化學(xué)成分GC－MS分析等化學(xué)檢識(shí)方面分別對(duì)蒙古口蘑及其混淆品進(jìn)行了系統(tǒng)研究。

1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

蒙古口蘑子實(shí)體于2008年采自內(nèi)蒙古呼倫貝爾市陳巴爾虎旗草原，由吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)菌物研究所圖力古爾教授鑒定。蒙古口蘑樣品1、樣品2、樣品3是2008年購(gòu)于呼倫貝爾盟海拉爾市新橋市場(chǎng)。

1.2 儀器與試劑

電熱鼓風(fēng)干燥箱，上海實(shí)驗(yàn)儀器廠有限公司；SHB－B95型循環(huán)水式多用真空泵，鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司；FW－200型高速萬能粉碎機(jī)，北京中興偉業(yè)儀器有限公司；紫外燈，AUY220型電子分析天平，日本島津公司；XS－212－201生物學(xué)顯微鏡紅外檢測(cè)儀，德國(guó) Bruker WERTREX型紅外檢測(cè)儀。

試劑：水合氯醛、稀甘油、氫氧化鉀、濃硝酸。

2 研究方法

2.1 性狀鑒別

通過眼觀、手摸、鼻聞、口嘗及水試的方法對(duì)新鮮子實(shí)體的形狀、大小、色澤、表面、質(zhì)地、斷面、氣味等特點(diǎn)進(jìn)行鑒別。

2.2 理化檢識(shí)鑒別

蒙古口蘑、樣品1、樣品2、樣品3干燥子實(shí)體粉碎，各樣稱取品8 g，梯度提取法分別用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇索式提取10 h，減壓濃縮各提取液。

2.2.1 薄層色譜鑒定

將其各個(gè)層4種提取液溶于有機(jī)溶劑后在薄層板上分別點(diǎn)樣，以下展開劑條件下薄層展開，如氯仿層以氯仿：石油醚=1∶2；乙酸乙酯層以乙酸乙酯：氯仿=3∶4；丙酮層以乙酸乙酯：氯仿=1∶1。

2.2.2 紅外檢測(cè)

4個(gè)蘑菇的氯仿提取物、丙酮提取物、甲醇提取物分別減壓濃縮至完全晾干之后分別加5 ml甲醇溶解。

2.2.3 石油醚提取物的化學(xué)成分GC－MS分析

4種蘑菇石油醚提取物通過GC－MS分析，其色譜條件為：HP－5 型毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm），汽化室溫度 270℃，流速 1.0 mL·min－1，柱溫 80℃（3 min）→150℃→270℃（5 min），接口280℃。質(zhì)譜條件為：離子源溫230℃，采集方式全掃描，掃描范圍45 amu～460 amu，不分流，四極桿150℃，溶劑延遲2.0 min，閥值150。各組分的相對(duì)含量是從總離子流色譜圖中用封面積歸一化方法計(jì)算而得，采用WILEY.L譜庫(kù)檢索，并結(jié)合質(zhì)譜圖中基峰、負(fù)荷比以及相對(duì)豐度與標(biāo)準(zhǔn)圖譜的比較，鑒定其化合物。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 來源鑒定及性狀鑒定

蒙古口蘑鮮品：子實(shí)體中等至較大；菌蓋直徑5 cm～17 cm，半球形、扁半球形至近平展，白色，光滑，初期邊緣內(nèi)卷；菌肉白色，厚，具香氣；菌肉肥厚，質(zhì)地細(xì)嫩；菌褶白色，彎生，稠密，不等長(zhǎng)；菌柄粗壯至肥大，長(zhǎng)3.5 cm～7 cm，粗1.5 cm～4.6 cm，基部稍膨大，白色，內(nèi)實(shí)；孢子印白色。干品：蒙古口蘑子實(shí)體干后，質(zhì)脆，易碎；菌蓋成乳白色；菌褶白色至土黃色；菌柄長(zhǎng)度與菌蓋直徑比例不超過1；表面光滑有網(wǎng)狀紋理，質(zhì)地疏松，易折斷，斷面純白色呈粉性，有濃郁的蘑菇香氣（圖2）。蒙古口蘑（Tricholoma mongolicum）又稱白蘑、口蘑、草原白蘑、珍珠蘑、查干蘑菇、云盤蘑、銀盤蘑等。屬傘菌目（Agaricales）、口 蘑 科（Tricholomataceae）、口 蘑 屬（Tricholoma）真菌。夏秋季尤其在立秋前后大量地產(chǎn)生在草原上群生并形成蘑菇圈。

圖2 蒙古口蘑子實(shí)體

劣質(zhì)品：某些商家為使蒙古口蘑增重，把新鮮蒙古口蘑子實(shí)體泡入水中。泡過水的蒙古口蘑子實(shí)體顏色會(huì)迅速變褐，甚至變黑，尤其是菌蓋邊緣，并且菌蓋掰開就能看到吸收的水分（圖3）。

圖3 蒙古口蘑劣質(zhì)品圖片

樣品1鮮品：子實(shí)體中等，菌蓋2 cm～8 cm，常常顏色多變化，呈現(xiàn)為灰褐、煙灰色至近淡黃色；菌蓋邊緣平滑無條棱，但有時(shí)成波浪狀或近似花瓣?duì)睿痪拚?，污白色，稍延生；菌柄長(zhǎng)5 cm～9 cm，粗達(dá)3 cm；表面白色，基部往往膨大，中空；孢子印白色。干品：子實(shí)體干后，質(zhì)脆，易碎；菌蓋成黃色至褐色；菌褶土黃色；菌柄長(zhǎng)度與菌蓋直徑比例超過1.5；表面粗糙、皺褶狀，質(zhì)地疏松，易折斷，斷面純白色至土黃色呈粉性，有濃郁的蘑菇香氣（圖4）。根據(jù)以上特征鑒定樣品1為水粉傘菌（Clitocybe nebularis），又稱水粉蕈、煙云杯傘，當(dāng)?shù)啬撩穹Q之為二白蘑、灰頂二白蘑。屬傘菌目（Agaricales）、口蘑科（Tricholomataceae）、杯傘屬（Clitocybe）真菌。 通常在晚秋季出現(xiàn)在林地上形成大的蘑菇圈。

圖4 樣品1子實(shí)體

樣品2鮮品：菌蓋半圓形，中凸，后期微平展，徑6 cm～8 cm，蓋表光滑，干；后期微有龜裂，蓋中央或具不明顯的小鱗片；白色、乳白色或乳黃色，緊壓后微呈黃色；菌肉白色；菌褶密而離生，初白色，成熟后呈粉紅色、深咖啡色；菌柄柱狀，近等粗；中端與蓋緣銜接處層外具絮狀環(huán)膜，白色或乳黃色，脆而易碎；氣香，味特異。干品：子實(shí)體干后，質(zhì)脆，易碎；菌蓋白色至微黃色，微有龜裂；菌蓋邊緣與菌柄銜接處具絮狀環(huán)膜；菌柄長(zhǎng)度與菌蓋直徑比例超過1.5；菌褶初白色，成熟后呈粉紅色、深咖啡黃色；表面白色至微黃色，粗糙，質(zhì)地疏松，易折斷，斷面白色至土黃色呈粉性，有濃郁的蘑菇香氣（圖5）。根據(jù)以上特征鑒定樣品2為野蘑菇（Agaricus arvensis），也叫田蘑菇、雜蘑、哈日蘑菇，當(dāng)?shù)啬撩穹Q之為雷窩子，長(zhǎng)在白蘑蘑菇圈上的二茬白蘑。屬傘菌目（A-garicales）、蘑菇科（Agaricaceae）、蘑菇屬（Agaricus）真菌。夏季生于曠野、肥土、林旁、草原及草地。

圖5 樣品2子實(shí)體

樣品3鮮品：子實(shí)體中等至較大；菌蓋直徑4 cm～12cm，扁半球形至平展，邊緣內(nèi)卷變至平展和波狀，粘，淺紅褐色，趨向邊緣色淺，被棕褐色細(xì)小鱗片；氣味香；菌肉較厚，污白色，傷處變暗；菌褶密，較窄，污白色帶淺紅褐色，不等長(zhǎng)，傷處色變暗；菌柄比較粗壯，內(nèi)實(shí)至松軟，長(zhǎng)3 cm～8 cm，粗1 cm～3 cm，有的下部膨大，白色擦傷處帶紅褐色；孢子印白色。干品：子實(shí)體干后，質(zhì)脆，易碎；菌蓋黃色至褐色，被棕褐色細(xì)小鱗片；菌褶黃色；表面紫褐色附有白色粉狀小顆粒，質(zhì)地疏松，易折斷，斷面白色至土黃色呈粉性，有濃郁的蘑菇香氣（圖6）。根據(jù)以上特征鑒定樣品3為楊樹口蘑（Tricholoma populinum），又稱楊林口蘑，楊口蘑，當(dāng)?shù)啬撩穹Q之為油蘑、土豆蘑。 屬傘菌目（Agaricales）、口蘑科（Tricholomataceae）、口蘑屬（Tricholoma）真菌。秋季在楊樹林中沙質(zhì)的土地上群生、散生。

3.3 4種樣品的理化鑒定

圖6 樣品3子實(shí)體

3.3.1 薄層色譜鑒定

丙酮層Rf=0.712和Rf=0.76處，4種菌物都有粉色斑點(diǎn)，Rf=0.712處樣品3和蒙古口蘑色深。Rf=0.76處樣品2和蒙古口蘑色比較深。乙酸乙酯層Rf=0.677處四種菌物都有灰色斑點(diǎn)，顏色都比較深。Rf=0.74處樣品2、樣品3和蒙古口蘑有藍(lán)色斑點(diǎn)，樣品2色深。Rf=0.84處只有蒙古口蘑有紫粉色斑點(diǎn)，具有鑒定意義。氯仿層Rf=0.46處4個(gè)菌物都有粉色斑點(diǎn)，顏色都比較深。Rf=0.58處樣品2和蒙古口蘑色有粉色斑點(diǎn)，樣品2顏色都比較深。

3.3.2 紅外檢測(cè)

圖7 樣品1氯仿層紅外圖譜

圖8 樣品2氯仿層紅外圖譜

圖9 樣品3氯仿層紅外圖譜

圖10 蒙古口蘑氯仿層紅外圖譜

圖11 樣品1丙酮層紅外圖譜

圖12 樣品2丙酮層紅外圖譜

圖13 樣品3丙酮層紅外圖譜

圖14 蒙古口蘑丙酮層紅外圖譜

圖15 樣品1甲醇層紅外圖譜

圖16 樣品2甲醇層紅外圖譜

圖17 樣品3甲醇層紅外圖譜

圖18 蒙古口蘑甲醇層紅外圖譜

用移液槍吸取50 μL樣品，均勻涂在溴化鉀片上，將涂好的片子置于光路中，用電子計(jì)算機(jī)程序控制進(jìn)行測(cè)定400 cm－1～4 000 cm－1間的光譜。 結(jié)果分析見圖 7 至圖18。蒙古口蘑、樣品1、樣品2、樣品3的氯仿、丙酮和甲醇提取物的紅外光譜表明，在官能團(tuán)區(qū)（1 300 cm－1～4 000 cm－1），樣品 1、樣品 2、樣品 3 氯仿層在 1 651 cm－1～1 384 cm－1處有相同的吸收峰。而蒙古口蘑氯仿層在1 627 cm－1～1 665 cm－1處有個(gè)強(qiáng)吸收峰，1 732 cm－1處有較強(qiáng)吸收峰，其他3種無。類似這樣的小特征峰可做為鑒別蒙古口蘑及以上3種混淆品的依據(jù)。

指紋區(qū)（1 300 cm－1～910 cm－1），樣品 1、樣品 2、樣品 3 氯仿層在 1 012 cm－1～1 031 cm－1處有相同的強(qiáng)吸收峰，而蒙古口蘑氯仿層沒有這個(gè)吸收峰。蒙古口蘑氯仿層在1 172 cm－1處有吸收峰，其他3種無。4種樣品丙酮層提取物和甲醇提取物中，樣品1、樣品2、樣品3在1 018 cm－1～1 053 cm－1處有1個(gè)相同的強(qiáng)吸收峰。這些差異鑒別蒙古口蘑及其混淆品具有一定的鑒定意義。

芳香區(qū)（910 cm－1～650 cm－1）的吸收峰比較小，也有較大差異，如蒙古口蘑氯仿層提取物在723 cm－1處有1個(gè)小尖峰，其他3種都無。蒙古口蘑丙酮和甲醇層提取物在783 cm－1、721 cm－1、680 cm－1處有小尖峰，其他 3 種都無。這對(duì)用紅外方法鑒別蒙古口蘑有輔助意義。

3.3.3 4種樣品的石油醚提取物的GC－MS分析結(jié)果

4種樣品石油醚提取物的GC－MS總離子流色譜結(jié)果見圖19至圖22。

圖19 樣品1石油醚提取物GC-MS總離子流圖

圖20 樣品2石油醚提取物GC-MS總離子流圖

圖21 樣品3石油醚提取物GC-MS總離子流

圖22 蒙古口蘑石油醚提取物GC-MS總離子流圖

4種樣品的石油醚提取物各組分的相對(duì)含量是從總離子流色譜圖中用峰面積歸一化方法計(jì)算而得，結(jié)果見表1至表4。

采用WILEY.L譜庫(kù)檢索結(jié)果，并結(jié)合質(zhì)譜圖中基鋒、負(fù)荷比以及相對(duì)豐度與標(biāo)準(zhǔn)圖譜的比較，以上4種樣品分別鑒定出樣品1有5個(gè)化合物、樣品2鑒定出2個(gè)化合物、樣品3鑒定出3個(gè)化合物、蒙古口蘑鑒定出10個(gè)化合物。其中正－十六烷酸是四者共有的化學(xué)成分（表1～表4）。除蒙古口蘑外，其他3種蘑菇石油醚提取物都含有(Z,Z)－9,12－十八碳二烯酸。

表1 樣品1石油醚提取物GC-MS聯(lián)機(jī)分析結(jié)果

表2 樣品2石油醚提取物GC-MS聯(lián)機(jī)分析結(jié)果

表3 樣品3石油醚提取物GC-MS聯(lián)機(jī)分析結(jié)果

表4 蒙古口蘑石油醚提取物GC-MS聯(lián)機(jī)分析結(jié)果

4 討論

本論文通過來源鑒定和性狀鑒定方法相結(jié)合，鑒定樣品1為水粉傘菌（C.nebularis）、樣品2為野蘑菇（A.arvensis）、樣品3為楊樹口蘑（T.populinum）。并且將三者和蒙古口蘑進(jìn)行性狀特征和薄層色譜、紅外檢測(cè)、石油醚提取物GC－MS等理化特征進(jìn)行對(duì)比鑒定，結(jié)果顯示四者具有不同程度的差異性。

水粉傘菌與蒙古口蘑干品鑒別要點(diǎn)：蒙古口蘑菌柄粗短、肥大、白色、光滑，水粉傘菌菌柄較長(zhǎng)基部膨大、褐黃色、條狀紋理；蒙古口蘑菌柄長(zhǎng)度與菌蓋直徑比例不超過1，而水粉傘菌菌柄長(zhǎng)度與菌蓋直徑比例超過1.5。

野蘑菇與蒙古口蘑干品鑒別要點(diǎn)：蒙古口蘑菌柄長(zhǎng)度與菌蓋直徑比例不超過1，而野蘑菇菌柄長(zhǎng)度與菌蓋直徑比例超過1.5；蒙古口蘑菌褶白色，而野蘑菇菌褶初白色，成熟后呈粉紅色、深咖啡色；蒙古口蘑菌蓋白色、光滑，而野蘑菇菌蓋白色粗糙、微有龜裂；野蘑菇菌蓋邊緣與菌柄銜接處具絮狀環(huán)膜，白色或乳黃色，脆而易碎，而蒙古口蘑沒有。

楊樹口蘑與蒙古口蘑干品鑒別要點(diǎn)：蒙古口蘑菌褶白色，而楊樹口蘑菌褶污白色帶淺紅褐色；蒙古口蘑菌蓋白色、光滑，而楊樹口蘑菌蓋紅褐色、被棕褐色細(xì)小鱗片；蒙古口蘑有濃郁的鮮味而楊樹口蘑有股略發(fā)咸的香氣。

從紅外圖譜上蒙古口蘑氯仿層在1 627 cm－1～1 665 cm－1處有個(gè)強(qiáng)吸收峰，1 732 cm－1處有較強(qiáng)吸收峰，其它3種無；在1 172 cm－1處有吸收峰；在723 cm－1處有1個(gè)小尖峰，其他3種都無。蒙古口蘑丙酮和甲醇層提取物在783 cm－1、721 cm－1、680 cm－1處有小尖峰，其他 3 種都無。 薄層色譜鑒別，蒙古口蘑乙酸乙酯層Rf=0.84處有紫粉色斑點(diǎn)，其他3種均沒有。石油醚提取物GC－MS分析，水粉杯傘石油醚層鑒定出5個(gè)化合物；野蘑菇石油醚層鑒定出2個(gè)化合物；楊樹口蘑石油醚層鑒定出3個(gè)化合物而蒙古口蘑石油醚層鑒定出10個(gè)化合物。其中正－十六烷酸（n－Hexadecanoic Acid）是四者共有的化學(xué)成分。除了蒙古口蘑外，其他3種菌物石油醚提取物都含有 (Z,Z)－9,12－十八碳二烯酸。這些差異在鑒別蒙古口蘑及其混淆品方面具有一定的鑒定意義。

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