徐維華 王守彪

1.山東省蓬萊市人民醫(yī)院普外科，山東蓬萊 265600；2.青島大學(xué)解剖教研室，山東青島 266021

FGFR2基因多態(tài)性與乳腺癌相關(guān)性研究

徐維華1王守彪2▲

1.山東省蓬萊市人民醫(yī)院普外科，山東蓬萊 265600；2.青島大學(xué)解剖教研室，山東青島 266021

目的 研究成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體2（FGFR2）基因單核苷酸多態(tài)性（SNP）與乳腺癌發(fā)生相關(guān)性。方法 實(shí)驗(yàn)組為280例乳腺癌患者，對(duì)照組為280名健康女性，運(yùn)用等位基因擴(kuò)增-聚合酶鏈反應(yīng)（ASA-PCR）方法，對(duì)其FGFR2基因3個(gè)位點(diǎn) （rs2912778、rs2981578、rs2981582）進(jìn)行檢測(cè)，并對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，分析其中2個(gè)位點(diǎn)（rs2912778、rs3135718）單核苷酸多態(tài)性與乳腺癌風(fēng)險(xiǎn)關(guān)系。結(jié)果 兩個(gè)位點(diǎn)（rs2912778、rs3135718）基因型分布及等位基因頻率在乳腺癌組和對(duì)照組差異具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.01）。 結(jié)論 FGFR2基因兩個(gè)位點(diǎn)（rs2912778、rs3135718）單核苷酸多態(tài)性可能與乳腺癌的發(fā)生有關(guān)。

單核苷酸多態(tài)性；成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體2；乳腺癌；相關(guān)性

乳腺癌是女性主要死亡原因之一，發(fā)達(dá)國(guó)家及發(fā)展中達(dá)國(guó)家均出現(xiàn)增長(zhǎng)趨勢(shì)。成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體2（FGFR2）參與胚胎形成、維持人體內(nèi)穩(wěn)態(tài)及癌變過(guò)程。國(guó)外研究表明，F(xiàn)GFR2可能與乳腺癌發(fā)生相關(guān)，可能成為雌激素受體陽(yáng)性乳腺癌治療的靶點(diǎn)[1]。本文運(yùn)用等位基因擴(kuò)增-聚合酶鏈反應(yīng)（ASA－PCR）結(jié)合基因測(cè)序，分析FGFR2基因單核苷酸多態(tài)性與乳腺癌發(fā)生的關(guān)系?，F(xiàn)報(bào)道如下:

1 資料與方法

1.1 一般資料

乳腺癌組280例，為青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2009年10月～2010年4月普外科確診的女性乳腺癌患者，均行乳腺癌改良根治術(shù)，年齡24～71歲，中位年齡45歲。對(duì)照組280例，為青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院體檢健康的女性，年齡28～69歲，中位年齡47歲。兩組年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

抽取實(shí)驗(yàn)對(duì)象外周靜脈血5 mL置于抗凝管中于-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.1 提取DNA采用TIANGEN試劑盒提取DNA。

1.2.2 設(shè)計(jì)、合成引物 采用Primer Premier 5軟件設(shè)計(jì)引物，由上海桑尼生物科技有限公司合成引物。3個(gè)位點(diǎn)的引物序列、目的條帶長(zhǎng)度見(jiàn)表1。

表1 3個(gè)位點(diǎn)的ASA引物序列

1.2.3 PCR擴(kuò)增 配置ASA-PCR反應(yīng)混合物，反應(yīng)物均為：DNA 模板 0.8 μL、上游引物 0.8 μL、下游引物 0.8 μL、TaqMIX 0.5 μL，用超純水補(bǔ)至 10 μL。rs2912778 反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性 5 min，94℃變性 30 s，60℃退火 30 s，72℃延伸30 s，30 個(gè)循環(huán)后，72℃延伸7min。rs3135718反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性5 min，94℃變性 30 s，60℃退火 30 s，72℃延伸 30 s，30 個(gè)循環(huán)后，72℃延伸 7 min。

1.2.4 擴(kuò)增條帶分析 以marker2000作為參照，將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳，拍照記錄，并將目的條帶進(jìn)行基因測(cè)序檢驗(yàn)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 17.0版統(tǒng)計(jì)建立數(shù)據(jù)庫(kù)，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01為差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ASA-PCR結(jié)果

PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果、測(cè)序結(jié)果見(jiàn)圖1～4。

2.2 基因型及等位基因頻率在乳腺癌組與對(duì)照組之間的分布

經(jīng)檢測(cè)，對(duì)照組符合Hardy-Weinberg定律。rs2912778、rs3135718基因型、等位基因頻率分布在乳腺癌組與對(duì)照組之間均有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見(jiàn)表1、2。

3 討論

傳統(tǒng)的乳腺癌治療方法主要有手術(shù)、化療、放療、內(nèi)分泌治療等綜合治療，盡管使乳腺癌患者因此獲益，但仍不能徹底消滅腫瘤細(xì)胞。癌變根本問(wèn)題在于基因，即癌基因激活或是抑癌基因失活，因此，要想從根本上解決癌癥問(wèn)題，必須從基因著手。

表1 rs2912778位點(diǎn)基因型與等位基因頻率分布統(tǒng)計(jì)[n（%）]

表2 rs3135718位點(diǎn)基因型與等位基因頻率分布統(tǒng)計(jì)表[n（%）]

FGFR2基因編碼跨膜酪氨酸激酶，在細(xì)胞生長(zhǎng)、侵襲和血管生成等方面起作用。細(xì)胞系的功能研究提示，F(xiàn)GFR2通過(guò)選擇性剪接在C-末端結(jié)構(gòu)域，在腫瘤形成過(guò)程中發(fā)揮作用[2]。FGFR2與多種腫瘤有關(guān)，如乳腺癌、腎癌等[3-4]。FGFR2在乳腺腫瘤中出現(xiàn)擴(kuò)增或過(guò)度表達(dá)[5-6]，一些關(guān)于人類和大鼠的實(shí)驗(yàn)證明，F(xiàn)GFR2是乳腺癌致病基因[7-11]。乳腺癌變小鼠模型的建立表明FGF信號(hào)通路是乳腺腫瘤形成的一個(gè)主要因素[4]，在乳腺上皮細(xì)胞，F(xiàn)GFR2特異性激活途徑可能是依賴于此基因的不同剪接形式的平衡[12]。眾所周知，F(xiàn)GFR2在人類乳腺癌的ER陽(yáng)性腫瘤中表達(dá)增高，然而，F(xiàn)GFR2基因作為乳腺癌風(fēng)險(xiǎn)因子的機(jī)制尚未明了。

本文對(duì)乳腺癌組與對(duì)照組 rs2912778、rs3135718基因型、等位基因頻率分布進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，其中，rs2912778位點(diǎn)A/A基因型、A/G基因型在乳腺癌組和正常組中分別為8例（2.86%）、196 例（70.00%）和 60 例（21.43%）、151 例（53.93%），rs3135718位點(diǎn)T/T基因型、T/C基因型在乳腺癌組和正常組中分別為 26例（9.29%）、238例（85.00%）和 105例（37.50%）、144例（51.43%）。 結(jié)果表明，rs2912778、rs3135718基因型、等位基因頻率分布在乳腺癌組與對(duì)照組之間均有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。同時(shí)，筆者對(duì)乳腺癌患者FGFR2基因兩個(gè)SNP位點(diǎn)rs2912778、rs2981578進(jìn)行檢測(cè)，表明這兩個(gè)位點(diǎn)突變可能是乳腺癌發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)因子。西伯利亞人口研究中，F(xiàn)GFR2基因的rs2912778增加了乳腺癌的患病風(fēng)險(xiǎn)[13]。Katoh M等[3]研究表明，F(xiàn)GFR2rs2981578位點(diǎn)與乳腺癌發(fā)生相關(guān)，本文結(jié)果與此較一致。乳腺癌是多因素綜合作用的結(jié)果，因此，仍需更大量的樣本進(jìn)行進(jìn)一步研究。

在腫瘤形成方面，F(xiàn)GFR2具有雙重作用，可以是癌基因，也可以是抑癌基因。FGFR2基因突變的確定使我們進(jìn)一步了解了腫瘤的病因?qū)W，通過(guò)對(duì)FGFR2基因一系列的生殖細(xì)胞系或體細(xì)胞系的突變研究，進(jìn)一步擴(kuò)展了FGFR2基因相關(guān)疾病的范圍。針對(duì)FGFR2突變導(dǎo)致惡性腫瘤，抑制FGFR2突變或?qū)⑼蛔兊幕蜻M(jìn)行修復(fù)，有針對(duì)性地進(jìn)行個(gè)體化治療，可為FGFR2基因突變相關(guān)惡性腫瘤提供一個(gè)合理的、可能有效的新途徑，具有重要的研究?jī)r(jià)值和應(yīng)用前景。

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Relative research of FGFR2 gene SNPs and breast neoplasm

XU Weihua1WANG Shoubiao2▲
1.General Surgery Department,the People's Hospital of Penglai City in Shandong Province,Penglai 265600,China;2.Anatomy Department,Medical College of Qingdao University,Qingdao 266021,China

Objective To study the relationship of the single nucleotide polymorphisms(SNP)in the fibroblast growth factor receptor 2 gene(FGFR2)and the development of breast neoplasm.Methods Two hundred and eighty patients with breast neoplasm and 280 healthy women were randomly selected.Allele amplification-polymerase chain reaction(ASA-PCR)method was used to detect the FGFR2 gene three loci(rs2912778,rs2981578,rs2981582),and the amplified products were sequenced.The risk relationship between the two sites(rs2912778,rs3135718)single nucleotide polymorphisms and breast cancer were analyzed.Results There were significant differences in the genotype frequency and allele frequency between the two groups(P＜0.01).Conclusion The SNP of rs2912778 and rs3135718 in the FGFR2 is probably connected with the development of breast neoplasm.

Single nucleotide polymorphism;FibrobIast growth factor receptor 2;Breast neoplasm;Correlation

R737.9

A

1674-4721（2012）11（c）-0017-03

徐維華（1973-），男，青島大學(xué)2008級(jí)在讀碩士研究生，主治醫(yī)師，主要從事胃腸、乳腺、甲狀腺等方面疾病的診治工作。

▲通訊作者：王守彪，青島大學(xué)解剖教研室，教授。

2012-10-17 本文編輯：陳 ?。?/p>