黃幀檜，楊 帆，張 培，丁伯平

(皖南醫(yī)學院藥理學教研室及中藥藥理國家三級實驗室，安徽蕪湖241002)

業(yè)已證明美托洛爾對腎性高血壓小鼠的心功能具有保護作用［1］。近年來又發(fā)現(xiàn)，阿伐他汀對高血壓大鼠左室重構也具有逆轉作用［2］。而高血壓患者常合并糖尿病，對靶器官心臟損傷更大。本研究探討美托洛爾聯(lián)用阿伐他汀對腎性高血壓大鼠左室重構以及對心肌基質金屬蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2，MMP-2)和金屬蛋白酶組織抑制劑-1(tissue inhibitor of metalloproteinase 1，TIMP-1)水平的影響，為臨床上可能聯(lián)合使用這兩種藥物治療腎性高血壓伴糖尿病患者提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物模型制備及分組:清潔級雄性Sprague-Dawley大鼠50只，體質量180～220 g［南京青龍山實驗動物中心提供，許可證號:SCXK(浙)2008-0033］。觀察喂養(yǎng)1周后，隨機抽取8只為假手術組，其余42只大鼠行兩腎一夾手術(2K1C)造模。造模時，分離左腎動脈、放置內徑為0.2mm的銀夾并打結固定。假手術組操作方法同上，但不放置銀夾。術后3 d連續(xù)給予青霉素4×105U肌注預防感染。術后4周收縮壓≥21.28 kPa者確定已形成穩(wěn)定高血壓，即為造模成功。將造模成功的34只大鼠隨機分成4組:模型組(n=8);美托洛爾組(5 mg/kg·d，n=9);阿伐他汀組(30 mg/kg·d，n=9);聯(lián)合用藥組(美托洛爾+阿伐他汀，n=8)。術后第5周開始給藥，每日上午9時將上述藥物連續(xù)灌胃6周。假手術組與模型組以等量0.9%氯化鈉注射液灌胃(0.1 mL/100 g)。

1.2 藥物和試劑:美托洛爾(阿斯利康制藥有限公司);阿伐他汀鈣(輝瑞公司);羥脯氨酸試劑盒(南京建成生物工程公司);MMP-2與TIMP-1 ELISA試劑盒(武漢博士德生物工程有限公司)。

1.3 左心室質量指數(shù)(LVMI)測定:沿室間隔剔除心房和右心室，保留完整左心室及室間隔，以精密電子天平準確測量左心室及室間隔濕重，作為左心室質量(LVM)，計算出左室重量指數(shù)LVMI(mg/g)。

1.4 心肌羥脯氨酸含量測量:將100 mg心肌組織制成勻漿，消化、水解，取上清液，使用分光光度計在550 nm處測各管吸光度。通過堿水解法測定羥脯氨酸含量，嚴格按試劑說明書操作。羥脯氨酸含量=［(測定管吸光度－空白管吸光度)/(標準管吸光度－空白管吸光度)］×標準管含量(5 mg/L)×［水解液總體積(10 mL)/組織濕重(mg)］。

2 結果

2.1 各組大鼠LVMI、HYP含量:模型組LVMI、HYP較假手術組顯著增加(P≤0.01)。聯(lián)用組LVMI較美托洛爾組降低(P≤0.05)，心肌HYP含量明顯降低(P≤0.01)。聯(lián)用組心肌HYP含量較阿伐他汀組降低(P≤0.05)(表1)。

表1 各組LVMI及心肌HYP含量Table 1 LVMI and contents of cardiac HYP in all groups

表2 各組心肌MMP-2、TIMP-1含量及其比值Table 2 Contents of cardiac MMP-2 and TIMP-1 and their ratios in all groups

2.2 各組大鼠心肌MMP-2、TIMP-1含量及其比值:模型組心肌MMP-2及TIMP-1含量升高(P≤0.05或P≤0.01)。聯(lián)用組在降低MMP-2含量和MMP-2/TIMP-1比值上較美托洛爾組及阿伐他汀組均有顯著性差異(P≤0.05或P≤0.01)(表2)。

3 討論

左室重構是高血壓并發(fā)癥之一，在治療高血壓的同時防止和逆轉左室重構已成為治療心血管疾病的重要目標。MMP-2的激活在心肌重構中起重要作用。TIMP-1是MMP-2的天然抑制物，心肌中存在的MMP-2和TIMP-1平衡的破壞可導致心臟重構。

本實驗用2K1C建立高血壓大鼠模型，結果發(fā)現(xiàn)模型組心肌羥脯氨酸含量明顯高于假手術組，這與文獻［3］報道一致。模型組心肌MMP-2與TIMP-1含量升高。結果顯示，心肌重構不僅與MMP-2和TIMP-1含量變化有關，還與MMP-2/TIMP-1比值有關。

實驗結果表明，聯(lián)用組減輕左室重構優(yōu)于模型組和單獨用藥組。結果還發(fā)現(xiàn)，聯(lián)用組的藥物干預作用對其降低心肌MMP-2、升高心肌TIMP-1含量及降低MMP-2/TIMP-1比值非常顯著，提示藥物聯(lián)用對減輕左室重構的作用與其調節(jié)MMP-2和TIMP-1的平衡、降低MMP-2/TIMP-1比值有關。

［1］Harris DM，Chen X，Pesant S，et al．Inhibition of angiotensin IIGq signaling augmentsβ-adrenergic receptor mediated effects in a renal artery stenosis model of high blood pressure［J］．J Mol Cell Cardiol，2009，46:100 －107．

［2］陳紅娟，陳君柱，王興祥，等．阿托伐他汀對自發(fā)性高血壓大鼠心肌組織PPARs表達的影響［J］．中國病理生理雜志，2008，24:1069－1073．

［3］李征，李茹香，武新民，等．MMP-9與 TGF-β1在腎性高血壓大鼠心肌纖維化中的作用及阿托伐他汀的干預研究［J］．中西醫(yī)結合心腦血管病雜志，2008，6:173－175．