周海純，鄭迎虹，蔡國鋒，馬育軒

(1．黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040;2．黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150001)

腦梗死(Cerebral infraction，CI)又稱缺血性腦卒中，是神經(jīng)系統(tǒng)臨床常見病、多發(fā)病，急性腦梗死患者由于腦部血液循環(huán)障礙，缺血、缺氧引起局灶性腦組織缺血性壞死，出現(xiàn)相應(yīng)的神經(jīng)系統(tǒng)癥狀和體征。具有發(fā)病率高、致殘率高、死亡率高的“三高”特點［1－3］。如何使腦卒中所致神經(jīng)功能缺損癥狀降低到一個最小的限度這一系列問題成為國內(nèi)外研究的熱點［4－7］。本研究旨在從分子水平上對比研究頭穴叢刺結(jié)合康復(fù)技術(shù)法對大鼠腦梗死后行為功能的影響，為臨床上進一步采用頭穴叢刺結(jié)合康復(fù)技術(shù)治療腦梗死提供客觀依據(jù)，對改善神經(jīng)功能缺損狀況、降低腦梗死的致殘率和提高生活質(zhì)量具有重要意義。

1 資料與方法

1．1 實驗動物 Wistar大鼠，體質(zhì)量250～300g，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心提供。采用大腦中動脈阻塞(MCAO)模型制備方法。

1．2 動物分組方法

造模后24h按Bederson 4級評分標(biāo)準(zhǔn)評分。0級:未見行為缺陷;1級:前肢屈曲;2級:側(cè)推抵抗力下降(即側(cè)向推力實驗陽性)伴前肢屈曲，無轉(zhuǎn)圈行為;3級:同二級行為伴自發(fā)性旋轉(zhuǎn)，評分低于兩分者剔除。將符合標(biāo)準(zhǔn)的大鼠隨機分為4組。

1)模型組12例，48h后，行大腦中動脈梗塞術(shù)，不予任何治療，常規(guī)飼養(yǎng);2)康復(fù)組12例同上，造模后康復(fù)治療;3)針康組12例同上，造模后頭穴叢刺結(jié)合康復(fù)技術(shù)治療;4)假手術(shù)組4例僅分離動脈，不結(jié)扎插線。各時間點分組方法相同。

1．3 治療方法

1)假手術(shù)組大鼠僅分離動脈不插入線拴，術(shù)后置于普通籠中飼養(yǎng)。2)模型組術(shù)后另置普通籠中術(shù)后清潔飼養(yǎng)，不予任何治療。3)康復(fù)組大鼠進行大腦中動脈阻塞術(shù)，清醒后予以轉(zhuǎn)籠，網(wǎng)屏，雜技任務(wù)訓(xùn)練，轉(zhuǎn)棒等綜合康復(fù)療法。轉(zhuǎn)籠長100cm，直徑60cm的圓柱形金屬網(wǎng)籠;中間分為4格，同時訓(xùn)練4只大鼠;水平放置于金屬架上，一端有轉(zhuǎn)動柄，可按需要縱軸轉(zhuǎn)動。術(shù)后24h開始到21天。10min/d，5次/周。轉(zhuǎn)棒:長750cm，直徑4.5cm木棒一根，兩端懸掛，手動以5r/min順、逆時針交替轉(zhuǎn)動。術(shù)后24h開始，10min，5天/周;雜技任務(wù)訓(xùn)練:要求大鼠按順序走過獨木直徑2.7cm、繩直徑2cm、梯(間距)5cm、重金屬鉸鏈(扣環(huán)2.7cm ×4.3cm)、系列障礙(高 l．3cm ～21cm)、網(wǎng)格平臺(85cm×11cm，平臺上依次有面積 6.25cm2、8.4cm2、12.25cm2的小洞)、一條縫隙，最后回到小籠。術(shù)后24h到4天在實驗者的幫助下讓大鼠適應(yīng)此訓(xùn)練過程，然后改為4次/天(5～14天)，到2次/天(15～21天)。4)針康組大鼠造模24h后進行頭穴叢刺結(jié)合康復(fù)技術(shù)治療，頭穴叢刺:采用頭穴叢刺法，在相應(yīng)的刺激區(qū)，按照“大鼠穴位圖譜”所示，取百會穴及百會左、右側(cè)各旁開4mm處沿皮分別刺入10mm，快速捻轉(zhuǎn)1min后留針2h，期間每20min快速捻轉(zhuǎn)1次，每日1次，共治療3周;康復(fù)技術(shù):同康復(fù)組。

1．4 指標(biāo)測定方法

1．4．1 神經(jīng)功能評定

按Bederson等制定的標(biāo)準(zhǔn)評分，評分分為4級。0級:未見行為缺陷;1級前肢屈曲;2級:側(cè)推抵抗力下降(即側(cè)向推力實驗陽性)伴前肢屈曲，無轉(zhuǎn)圈行為;3級:同二級行為伴自發(fā)性旋轉(zhuǎn)。各組大鼠在治療前、7天、14天、21天分別進行行為學(xué)評估，觀察其評分情況。

1．4．2 行為功能評估

在大鼠腦梗死模型制作后24h，7，14，21天，進行功能評估，觀察大鼠在行為學(xué)方面的差異。每項試驗進行2次，取較高的分數(shù)值作為大鼠的該項得分。行為學(xué)測定在安靜的環(huán)境中進行，評分標(biāo)準(zhǔn)見表1。

網(wǎng)屏測驗(screentest):將大鼠置于水平放置的網(wǎng)屏上，而后迅速將網(wǎng)屏一端抬高并轉(zhuǎn)至垂直位，記錄大鼠在網(wǎng)屏上的維持時間。此項主要檢測總的肌力。平衡木測驗(balancebeamtest):將大鼠置于木棒中間位置，記錄大鼠在木棒上維持的時間，最長30s。此項主要檢測平衡能力［8］。抓握一牽引測驗(prehensiletractiontest):將大鼠前爪放于水平放置繩上，松開［9］。記錄大鼠在繩上懸掉的時間以及是否有第三肢(后爪)參與，最長5s。抓握是指大鼠前爪懸掉在水平繩上的能力，主要檢測肌力;牽引是指大鼠將后肢放在繩上的能力，主要檢測平衡和肌力［10］。

表1 評分標(biāo)準(zhǔn)

1．5 統(tǒng)計學(xué)處理

各組最終取2套切片納入統(tǒng)計分析，實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，采用SPSS 13．0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，根據(jù)方差齊性與否分別采用參數(shù)檢驗和非參數(shù)檢驗，即齊性資料用單因素方差分析(one－factor ANOVA)的單向分類的方差分析(one－way ANVOA)，兩兩比較應(yīng)用LDS－t檢驗;非齊性資料采用秩和檢驗。選擇P＜0.05為差異有顯著性，P＜0.01為差異有極顯著性。

2 結(jié)果

2．1 神經(jīng)功能評定 見表2。

表2 神經(jīng)功能評定(±s)

表2 神經(jīng)功能評定(±s)

n療前 7天 14天模型組12 3．42 ±0．67 2．83 ±0．58 1．83 ±0．55康復(fù)組 12 3．33 ±0．78 1．83 ±1．11 1．08 ±0．76針康組12 3．25 ±0．75 1．00 ±0．85 0．33 ±0．47

2．2 行為學(xué)功能評定 見表3。

表3 腦梗死大鼠行為學(xué)評估得分(±s)

表3 腦梗死大鼠行為學(xué)評估得分(±s)

n療前 24小時 7天 14天12 1．08 ±0．79 4．50 ±1．17 5．25 ±1．22 6．58 ±0．95康復(fù)組 12 1．33 ±0．98 4．67 ±1．23 6．16 ±1．11 7．41 ±0．86針康組模型組12 1．25 ±0．97 4．75 ±1．06 7．16 ±0．94 8．25 ±0．92

3 討論

本實驗采用的頭穴叢刺結(jié)合康復(fù)技術(shù)方法對治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病特別是腦血管疾病有很好的效果。大量有關(guān)頭穴叢刺和康復(fù)技術(shù)的研究顯示，其能促進腦損傷后原位誘導(dǎo)內(nèi)源性神經(jīng)干細胞增殖、分化;這些方法還有改善腦血管循環(huán)、減輕腦細胞缺氧、抑制傷灶局部炎癥反應(yīng)、改善大腦電生理活動等功效，這些條件的變化也會進一步影響神經(jīng)干細胞的增殖分化［11］。而且這些方法本身不同于外源性藥物，它作用范圍廣泛，具有多靶點效應(yīng)，作用機制多樣，無不良反應(yīng)，因而對于誘導(dǎo)內(nèi)源性干細胞增殖分化具有其他藥物療法不可比擬的優(yōu)越性、可行性［12］。鑒于成年腦內(nèi)原位神經(jīng)干細胞本身數(shù)量較少，其增殖不一定能滿足補充需要，我們要做的是通過干預(yù)使干細胞數(shù)量增多以利于補充需要;用一定的方法促使其遷移和分化并最終融入功能缺失區(qū)的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)。雖然成體神經(jīng)干細胞的可塑性仍是一個爭論的問題，但有較好前景。

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