紫外-可見分光光度法測定川明參莖葉中總黃酮含量

明凱利，宋芳芳，陳朝霞，張梅

傘形科川明參屬植物川明參Chuanminshen viloaceum Sheh et Shan為我國特有單種屬植物，藥用其根，是四川道地藥材[1]。川明參根具有潤肺化痰、和胃、生津、解毒等功效，適用于病后補虛和強壯身體，在四川及周邊地區(qū)大量栽種，應用廣泛。川明參莖葉通常在其根收獲后作為廢棄物丟棄。目前已有文獻報道川明參莖葉中含有異虎耳草素、白當歸腦、蘆丁等香豆素類和黃酮類化學成分[2]，尚未見莖葉中總黃酮的含量測定報道。因此，為了填補這一研究空白，促進川明參這一寶貴的藥用資源的綜合開發(fā)利用，本文參考相關文獻[3～4]，采用紫外-可見分光光度法建立了川明參莖葉中總黃酮的含量測定方法，該法簡便、準確、可靠，為川明參莖葉的開發(fā)利用奠定了一定的實驗基礎。

1 實驗部分

1.1 儀器與試藥

UV1100型紫外分光光度計(上海天美科學儀器有限公司)；電子分析天平(Sartorius BP211D，十萬分之一；Sartorius BP121S，萬分之一)；蘆丁對照品(購于中國藥品生物制品檢定所，批號110826-200712)；川明參莖葉由成都中醫(yī)藥大學藥學院裴瑾教授鑒定為傘形科(Umbelliferae)川明參屬植物川明參Chuanminshen viloaceum Sheh et Shan的莖葉。所用試劑均為分析純，重蒸水(實驗室自制)。

1.2 方法與結果

1.2.1 供試品溶液的制備 取川明參莖葉約0.5g 置于100mL燒瓶中，加20mL 60%乙醇回流提取2次，每次1h。過濾，合并濾液，揮干溶劑并用60%乙醇定容至25mL，即得供試品溶液。

1.2.2 對照品溶液的制備 取蘆丁對照品適量，精密稱定，用60%乙醇溶解并定容，即得對照品溶液(0.265mg/mL)。

1.2.3 檢測波長的選擇 取對照品溶液和供試品溶液各2mL于25mL容量瓶中，加入60%乙醇至10mL，再加入5% NaNO2溶液1mL，搖勻，放置6min，加入10% Al(NO3)3溶液1mL，搖勻，放置6min，加入4% NaOH 溶液10mL，再加60% 乙醇至刻度，搖勻，放置15min，于400～800nm掃描，對照品溶液及供試品溶液均在506nm處有最大吸收（圖1A,B），且峰形變化平緩，便于定量測定，故選擇檢測波長為506nm。

圖1 對照品溶液及供試品溶液紫外掃描圖譜

1.2.4 線性范圍考察 分別精密吸取濃度為0.265mg/mL的蘆丁對照品溶液2mL、3mL、4mL、5mL、6mL于25mL量瓶中，加入60%乙醇至10mL，再加入5% NaNO2溶液1mL，搖勻，放置6min，加入10% Al(NO3)3溶液1mL，搖勻，放置6min，加入4%NaOH 溶液10mL，再加60% 乙醇至刻度，搖勻，放置15min，在506nm波長下測定不同濃度蘆丁的吸光度值A，以濃度(C)為橫坐標，吸光度(A)為縱坐標作圖，得到回歸方程：y=11.453x +0.0122，r=0.9992。結果表明：在0.0212～0.0636mg/mL范圍內，對照品蘆丁的吸光度和濃度線性關系良好。結果見圖2。

圖2 對照品蘆丁濃度與吸光度的關系

1.2.5 精密度試驗 取川明參莖葉粗粉約0.5g，置于100mL燒瓶中，按1.2.1項下制備供試品溶液后，精密移取2mL于25mL容量瓶中，按照“1.2.4線性關系考察”項下方法從“加入60%乙醇至10mL”起，顯色，測定吸光度，重復測定6次，其吸光度值的RSD=0.50%，結果表明精密度良好。

1.2.6 穩(wěn)定性試驗 取川明參莖葉粗粉約0.5g，置于100mL燒瓶中，按1.2.1項下制備供試品溶液后，精密移取2mL于25mL容量瓶中，按照“1.2.4線性范圍考察”項下方法從“加入60%乙醇至10mL”起，顯色，于0min、30min、60min、90min、120min分別測定其吸光度值，RSD=1.1%，結果表明供試品溶液在2小時內穩(wěn)定性良好。

1.2.7 重復性試驗 精密稱取同一批號莖葉粗粉約0.5g，共6份，按1.2.1項下制備供試品溶液后，精密移取2mL于25mL容量瓶中，按照“1.2.4線性范圍的考察”項下方法從“加入60%乙醇至10mL”起，顯色，測定其吸光度并計算含量，RSD=3.1%，結果表明重復性良好。

1.2.8 加樣回收試驗 精密稱取已知含量的川明參莖葉粗粉約0.25g，精密加入蘆丁對照品適量，按1.2.1項下制備供試品溶液，顯色，測定。計算得到蘆丁的平均回收率為97.03%，RSD=2.3%(n=6)。結果見表1。

表1 加樣回收率實驗結果

1.2.9 樣品測定 取不同產地川明參莖葉樣品，按照擬定的含量測定條件進行測定，計算各產地樣品中總黃酮含量，結果見表2。

表2 川明參莖葉中總黃酮含量測定結果（n=3）

2 討論

2.1 在供試品溶液制備上，本實驗主要對提取溶劑、提取方法和提取次數(shù)進行了考察。在提取溶劑的選擇中，分別采用50%、60%和75%乙醇溶液加熱進行回流提取，結果表明60%乙醇提取的總黃酮含量相對較高，且葉綠素含量相對較低，故采用60%乙醇作為提取溶劑。在提取方法的選擇上，分別采用回流提取法和超聲提取法進行提取，結果表明回流提取的總黃酮含量較高，故采用回流提取法進行提取。在提取次數(shù)的選擇上，分別提取了1次、2次和3次。結果表明，回流提取2次樣品吸光度值與提取3次樣品吸光度值接近且較大，總黃酮含量較高，但提取2次較提取3次簡便，故選擇回流提取2次。

2.2 在對照品的選擇上，考慮到中藥中總黃酮含量測定時大多以蘆丁為對照品，參考相關文獻可知，川明參莖葉中含有該種化學成分[2]，故本試驗也以蘆丁作為川明參莖葉總黃酮含量測定研究用對照品。

2.3 實驗結果表明，川明參莖葉中總黃酮含量較高，而黃酮類成分具有止咳、祛痰、平喘等藥理作用，故川明參莖葉具有一定的開發(fā)利用價值，本實驗結果將為川明參的綜合開發(fā)利用奠定基礎。

[1]佘盂蘭,單人驊.傘形科兩新屬—環(huán)根芹屬和川明參屬[J].植物分類學報,1980,18(1):45-49.

[2]王明安,彭樹林,王明奎,等.川明參莖葉中的化學成分[J].高等學?；瘜W學報,2002,(8):1539-1541.

[3]孟慶艷,劉圓,孔星蕓,等.不同采收期大花羅布麻葉中黃酮的含量測定[J].中國實驗方劑學雜志,2010,16(15):50-52.

[4]劉文煒,沈祥春,陶玲,等.紫外分光光度法測定大蝎子草藥材中總黃酮的含量[J].中國藥房,2010,21(43):4088-4089.