[摘 要] 海原縣作為寧夏區(qū)內(nèi)馬鈴薯生產(chǎn)大縣,每年繁育馬鈴薯原原種2000萬粒以上,這主要是經(jīng)過多年的馬鈴薯試管苗切段快繁技術(shù)試驗,成功培養(yǎng)了更多的脫毒馬鈴薯種苗,從而使脫毒馬鈴薯種薯源源不斷地應(yīng)用于生產(chǎn)當中。
[關(guān)鍵詞] 馬鈴薯;種苗;擴繁技術(shù)
馬鈴薯脫毒試管苗的工廠化生產(chǎn)快繁,由于其技術(shù)和設(shè)備條件均要求很高,脫毒試管苗的切段快繁技術(shù)的好壞,直接關(guān)系到馬鈴薯種苗脫毒的成功與否,所以把握好每一個環(huán)節(jié)的技術(shù)要點非常關(guān)鍵。
一、洗瓶
擴繁的苗瓶可用三角瓶或小灌頭瓶,按需要量準備充足。用清潔熱水加入適量的洗衣粉,用試管刷涮洗苗瓶,達到瓶壁水珠分布非常均勻,透明感強,然后倒置在網(wǎng)架上涼干水珠待用。
二、配制培養(yǎng)基
1.稱藥品
根據(jù)培養(yǎng)基配方的用量,用托盤天平稱瓊脂(按每升蒸餾水加7g瓊脂)、蔗糖(按每升蒸餾水加20-30g蔗糖);用電光分析天平按下列配方(MS配方)稱出藥品,并編號。
2.配母液
將稱量的藥品分類按排號溶在器皿的蒸餾水中,蒸餾水能充分溶解藥品為宜,藥品加入的順序為:大量元素以先單價后雙價加入,最后加入鈣鹽,即配成母液。
3.制作培養(yǎng)基
?。?)首先用量筒量出所需的蒸餾水,用大鋁鍋盛裝,將稱得的瓊脂侵在大鋁鍋的蒸餾水中,然后將大鋁鍋邊加熱邊攪動使瓊脂充分溶解后再加入蔗糖使其溶解。
?。?)在充分溶解的瓊脂和蔗糖溶液中分別加入母液1、母液2、母液3、母液4,母液5用小火繼續(xù)加熱使其充分溶解,再用沸蒸餾水定容。
?。?)調(diào)節(jié)配養(yǎng)基pH值。用pH試紙檢驗,顯酸性時,用滴管滴加NaOH;或KOH顯堿性時滴加磷酸或鹽酸溶液,直至pH試紙測得pH值為5.7為宜,即培養(yǎng)基已配制完備。
三、裝瓶
將配制好的培養(yǎng)基分別裝在洗凈的苗瓶中,每瓶定容15-20mL,然后用封口膜封口,將其送到消毒室待消毒。
四、高壓消毒
用高壓滅菌鍋進行滅菌消毒。在120-124℃下,消毒25min,即消毒結(jié)束,停止加熱后約過20-30min取出苗瓶。
五、無菌操作室內(nèi)消毒滅菌
1.熏蒸
無菌室剛開始工作或間隔2-3個月未進行消毒時,先熏蒸消毒。熏蒸按每立方米空間計算,即1m3空間按10:7的高錳酸鉀溶液放盆中,馬上關(guān)閉門窗,間隔1-2d后即可在室內(nèi)工作。
2.紫外線消毒
將工作服、口罩、拖鞋、盛裝75%的酒精瓶、剪刀、鑷子、酒精燈、苗源瓶、擴繁瓶、封口膜、線繩或皮筋、干凈紗布等無菌室所需物品放在無菌室固定位置,啟動超凈工作臺,通風殺菌,室內(nèi)紫外燈打開消毒,工作人員快速離開無菌室,滅菌25-30min即可。
六、試管苗切段擴繁
工作人員按無菌操作程序進入無菌室,穿戴好消毒服裝,用75%的酒精將雙手消毒,再用酒精侵濕干凈的紗布擦拭超凈工作臺面、苗源瓶、擴繁瓶、將剪刀、鑷子插入酒精瓶,就可進行切斷接苗。方法是:關(guān)閉超凈工作臺殺菌開關(guān),點亮酒精燈,取掉擴繁瓶的封口膜,瓶口稍斜,離酒精燈芯0.5cm用手輕輕轉(zhuǎn)動,直至瓶底以上部全部消毒一遍,然后放在超凈工作臺的右邊,再取掉苗源瓶的封口膜用同樣的方法在酒精燈上消毒一遍,防止小苗被燒傷,然后放在超凈工作臺左邊;最后把剪刀和鑷子從盛75%的酒精瓶內(nèi)取出,放在酒精燈離燈芯0.5cm處上下轉(zhuǎn)動消毒一遍,稍涼片刻,用鑷子將苗源瓶中的小苗夾出瓶口,只留根部在瓶內(nèi),用剪刀剪掉根部,然后再用鑷子夾小苗離擴繁瓶口1-2cm處(注意不要讓小苗挨上擴繁瓶口,以防感染),剪帶一片小葉的莖段放在擴繁瓶中,一般擴繁瓶可接15-20個莖段。封口膜在酒精燈上稍消毒后封口,然后在瓶外壁注明接苗品種、年月日、切苗人員姓名。
七、培養(yǎng)
把切斷接好苗的擴繁瓶送到培養(yǎng)室進行培養(yǎng),培養(yǎng)室溫度控制在25℃,光照2000—3000勒克斯,如用日光燈為光源,每天光照16h為宜;相對濕度保持在75-80%之間,切段擴繁后3-4d如果發(fā)現(xiàn)有污染瓶,須馬上將污染瓶移離培養(yǎng)室。健康苗50-60d就可以再擴繁或作扦插的基礎(chǔ)苗。