趙運(yùn)勝 張麗娜 李洪臣 崔辰瑩 吳 俠

原發(fā)性肝癌（primary hepatic cancer，PHC）是目前世界上致死率最高的惡性腫瘤之一，在全世界范圍內(nèi)的發(fā)病率有逐年上升的趨勢(shì)［1］。早期診斷PHC是治療和延長(zhǎng)PHC患者生存期的最主要策略。血清AFP（alpha-fetoprotein）是目前檢測(cè)PHC最常用的腫瘤標(biāo)志物，但其靈敏度和特異性都不夠滿意［2］。

血清蛋白GP73（serum Glogi glycoprotein 73）有望成為早期診斷PHC及預(yù)后的新標(biāo)志物［3-4］。GP73是定位于高爾基體的一種Ⅱ型跨膜蛋白，分子量為73 kD，由胞內(nèi)、跨膜和胞外3個(gè)區(qū)域構(gòu)成，其N-末端為胞外段，是與其他蛋白相互作用的主要功能區(qū)。其編碼基因位于第9號(hào)染色體，全長(zhǎng)3 042 bp。GP73主要表達(dá)于人類多種組織的上皮細(xì)胞，正常肝臟組織表達(dá)甚微，但肝細(xì)胞受到病毒感染或肝癌時(shí)明顯高表達(dá)［5-6］。早在2005年，Block等就提出，在肝癌患者血清中，GP73水平顯著升高［7］。且有文獻(xiàn)報(bào)道GP73檢測(cè)肝癌的敏感度可達(dá)69%，特異性可達(dá)90%［8］，但也有個(gè)別報(bào)道GP73的靈敏度和特異性與AFP相當(dāng)甚至低于AFP［9-10］。

肝癌診斷的每一種血清標(biāo)志物在診斷價(jià)值上可能都有其自身的價(jià)值但也都有一定的局限性。已有研究提議將GP73與其他常用腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)，以提高原發(fā)性肝癌診斷的意義［11-12］，但這種聯(lián)合檢測(cè)的價(jià)值還需臨床數(shù)據(jù)的證實(shí)。因此，本文探討了GP73及其聯(lián)合AFP和CA199檢測(cè)在肝癌診斷中的意義。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

選取我院2011年4至9月的住院、門診和體檢人員共計(jì)130例，其中經(jīng)過(guò)病理檢驗(yàn)明確的PHC患者50例（男38歲，女12歲），年齡32～81歲，平均57歲；肝炎患者20例（男11歲，女9歲），年齡36～57歲，平均48歲；肝硬化患者20例（男15歲，女5歲），年齡41～81歲，平均55歲；其他消化系統(tǒng)惡性腫瘤患者20例（男14歲，女6歲），年齡47～78歲，平均69歲；健康對(duì)照者20例（男10歲，女10歲），年齡21～45歲，平均34歲。

1.2 主要儀器

CODA全自動(dòng)酶標(biāo)儀和羅氏2010電化學(xué)發(fā)光儀。

1.3 試劑

GP73測(cè)定試劑盒購(gòu)自上海瑞奇科技有限公司；AFP和CA199測(cè)定試劑盒購(gòu)自上海羅氏診斷產(chǎn)品有限公司。

1.4 標(biāo)本采集

受檢者均采集空腹靜脈血3 mL，用促凝管采血后將分離的血清儲(chǔ)存于-80℃冰箱待測(cè)。

1.5 檢測(cè)方法

GP73測(cè)定采用酶聯(lián)免疫定量方法檢測(cè)，按說(shuō)明書(shū)操作；AFP和CA199檢測(cè)采用羅氏電化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

利用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。檢測(cè)數(shù)據(jù)均為偏態(tài)分布，采用中位數(shù)（四分位數(shù)）表示，不同組別間計(jì)量資料比較采用Mann-Whitney U非參數(shù)檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，GP73、AFP和CA199間的相關(guān)性分析采用Spearman非參數(shù)檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組血清GP73、AFP和CA199含量檢測(cè)結(jié)果比較

肝癌組GP73含量明顯高于其它各組（P均＜0.05），而肝硬化組和其他消化系統(tǒng)惡性腫瘤組的GP73含量也分別明顯高于對(duì)照組和肝炎組（表1，P＜0.05）。肝癌組血清中AFP含量明顯高于其他各組（P均＜0.05），而肝炎組、肝硬化組和其他消化系統(tǒng)腫瘤組血清中AFP含量分別明顯高于對(duì)照組（表1，P均＜0.05）。肝癌組CA199含量分別明顯高于其他四組（P均＜0.05），且肝炎組和肝硬化組明顯高于對(duì)照組（表1，P＜0.05）。

表1 各組血清GP73、AFP和CA199含量檢測(cè)結(jié)果比較［中位數(shù)（四分位數(shù)）］Table1 Comparison of serum GP73，AFP，and CA199 levels in every group［median（quartile）］

2.2 ROC曲線分析GP73、AFP和CA199對(duì)PHC的鑒別診斷效果

采用ROC曲線分析GP73、AFP和CA199單獨(dú)用于鑒別診斷肝癌和非肝癌的效果，曲線下面積分別為 0.824、0.668、0.732；各自 95%置信區(qū)間分別為0.735～0.912、0.564～0.773、0.641～0.824（圖l）。

通過(guò)ROC曲線分析將GP73、AFP和CA199鑒別診斷肝癌的臨界值分別設(shè)定為72.7 μg/L、108.0 μg/L、67.7 U/mL（根據(jù)靈敏度+特異性最大的原則設(shè)定）。

2.3 血清GP73、AFP和CA199單項(xiàng)及其聯(lián)合檢測(cè)對(duì)PHC的診斷價(jià)值

肝癌組血清GP73和AFP陽(yáng)性檢出結(jié)果分別明顯高于其他各組（P＜0.05），肝癌組CA199陽(yáng)性檢出結(jié)果也明顯高于肝炎組、肝硬化組和正常對(duì)照組（P＜0.05），但和其他消化系統(tǒng)腫瘤組無(wú)明顯差異（P＞0.05，表2）。

圖l GP73、AFP和CA199鑒別診斷PHC的ROC曲線分析Figure1 ROC curve analysis of GP73，AFP，and CA199 for the diagnosis of PHC

單項(xiàng)檢測(cè)中，GP73的靈敏度、特異性和準(zhǔn)確率都最高。聯(lián)合檢測(cè)中，GP73/AFP/CA199平行實(shí)驗(yàn)靈敏度最高，GP73+AFP+CA199系列實(shí)驗(yàn)特異性最高，GP73/AFP平行實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確率最高（表3）。

2.4 血清GP73與AFP和CA199之間的相關(guān)性分析

GP73與AFP，GP73與CA199，AFP和CA199的相關(guān)系數(shù)分別為-0.035，0.007，0.136，P均＞0.05，三個(gè)指標(biāo)之間并無(wú)相關(guān)性。

表2 各組血清GP73、AFP和CA199陽(yáng)性檢出率比較Table2 Comparison of the positive rate in every group about GP73，AFP，and CA199

表3 血清GP73、AFP和CA199單項(xiàng)及聯(lián)檢對(duì)PHC的診斷價(jià)值比較Table3 Comparison of the diagnosis value about single and combined examination of GP73，AFP，and CA199 for PHC

3 討論

PHC治療效果取決于早期診斷。GP73是新近發(fā)現(xiàn)的PHC血清標(biāo)志物之一［3-4，13］。本文結(jié)果顯示肝癌患者GP73含量明顯高于非肝癌患者，肝硬化和其他消化系統(tǒng)腫瘤患者血清中GP73含量與對(duì)照組和肝炎組相比也有所升高。之前也曾有過(guò)文獻(xiàn)報(bào)道隨著肝臟疾病的進(jìn)展，GP73會(huì)升高［14］，肝硬化和肝癌患者中GP73水平明顯高于肝炎患者和正常人［15］。另外，將其各組的陽(yáng)性檢查率做比較，發(fā)現(xiàn)肝癌組的陽(yáng)性檢出率明顯高于其它各組。ROC曲線下面積分析GP73最大，單項(xiàng)檢測(cè)中其靈敏度和特異性也最高。因此，本文結(jié)果支持血清GP73含量對(duì)檢測(cè)肝癌的臨床意義。

本文數(shù)據(jù)表明血清中AFP含量在PHC、肝炎組，肝硬化組和其他消化系統(tǒng)腫瘤組均明顯高于對(duì)照組，文獻(xiàn)報(bào)道AFP在肝癌、胃癌、肺癌、胰腺癌、膽道腫瘤和睪丸腫瘤等多種臨床疾病的患者血清中升高［16］，這些都說(shuō)明AFP診斷PHC的特異性不夠。但本文數(shù)據(jù)也說(shuō)明肝癌組AFP升高的陽(yáng)性檢出率仍然明顯高于其他各組，說(shuō)明AFP對(duì)于肝癌的鑒別診斷仍有臨床價(jià)值。另外，肝癌組血清中CA199含量分別明顯高于其它各組，肝癌組CA199的陽(yáng)性檢出率明顯高于肝炎組、肝硬化組和對(duì)照組，而和其他消化系統(tǒng)惡性腫瘤組差異不明顯，這些說(shuō)明CA199是診斷消化系統(tǒng)惡性腫瘤通用標(biāo)志物之一。相應(yīng)地，GP73和其他指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)可能提高肝癌檢出靈敏度。

本文結(jié)果表明，GP73和其它標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)可提高診斷PHC的靈敏度和特異性，GP73+AFP+CA199同時(shí)陽(yáng)性診斷PHC的特異性達(dá)100%，可作為確診PHC的較好組合標(biāo)志物。選用上述三種標(biāo)志物任一陽(yáng)性診斷PHC敏感度升高，GP73/AFP/CA199靈敏度達(dá)92%，可作為排除肝癌的較好的判斷方法。GP73/AFP在所有兩指標(biāo)組合中靈敏度最高，診斷效果也最好。因此，在平時(shí)的臨床工作中，可以根據(jù)不同的診斷目的選擇不同的項(xiàng)目組合。

總體而言，本文結(jié)果表明血清GP73單獨(dú)診斷PHC的靈敏度和特異性都優(yōu)于單用AFP和CA199；其聯(lián)合AFP和CA199同步陽(yáng)性檢測(cè)可提高對(duì)PHC診斷的可靠性。

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