魏娟，曾金祥，張壽文，朱繼孝，朱玉野，王曉云，吳波

(江西中醫(yī)學(xué)院江西省中藥種質(zhì)資源工程技術(shù)研究中心，江西 南昌 330004)

吳茱萸質(zhì)量控制與品質(zhì)評價(jià)方法研究進(jìn)展△

魏娟，曾金祥，張壽文*，朱繼孝，朱玉野，王曉云，吳波

(江西中醫(yī)學(xué)院江西省中藥種質(zhì)資源工程技術(shù)研究中心，江西 南昌 330004)

對近年來吳茱萸質(zhì)量控制與品質(zhì)評價(jià)方法研究現(xiàn)狀進(jìn)行綜述，為今后吳茱萸藥材的進(jìn)一步研究與應(yīng)用提供參考。

吳茱萸；質(zhì)量控制；品質(zhì)評價(jià)

吳茱萸(Euodiae Fructus)為常用中藥，為蕓香科(Rutaceae)植物吳茱萸 Euodia rutaecarpa.(Juss.)Benth.、石虎 Euodia rutaecarpa(Juss.)Benth.var.oficinalis(Dode)Huang或疏毛吳茱萸 Euodia rutaecarpa(Juss.)Benth.var.bodinieri(Dode)Huang的干燥近成熟果實(shí)，具有散寒止痛，降逆止嘔，助陽止瀉功能[1]。大量吳茱萸被用來制備腸康片、左金丸、戊己丸、吳茱萸湯和雞鳴散等藥物。目前國內(nèi)市場對吳茱萸的需求量大，而全國合格品少，大量品質(zhì)低劣產(chǎn)品在市場上流通。因此，近年來吳茱萸的質(zhì)量控制與品質(zhì)評價(jià)方法一直是研究熱點(diǎn)。

目前吳茱萸質(zhì)量控制與品質(zhì)評價(jià)的方法主要有3類：一類是反映吳茱萸精確活性成分信息的含量測定方法，另一類是反映吳茱萸化學(xué)成分整體模糊信息的指紋圖譜方法，第三類是含量測定與指紋圖譜結(jié)合方法。本文現(xiàn)對這些方法進(jìn)行綜述，以期為吳茱萸的進(jìn)一步研究與應(yīng)用提供參考。

1 質(zhì)量評價(jià)與含量測定方法研究進(jìn)展

已報(bào)道的測定吳茱萸中活性成分含量的方法有薄層掃描法[2]、高效毛細(xì)管電泳法[3]、高效液相色譜法[4]、電噴霧解吸電離質(zhì)譜[5]、在線超臨界流體萃取-氣相色譜聯(lián)用[6]、微乳液相色譜法[7]、離子對色譜法[8]等。

薄層掃描法分離度較好，結(jié)果準(zhǔn)確穩(wěn)定、簡便、快捷，是分析吳茱萸及其制劑質(zhì)量的簡便有效的手段之一，但存在分離效率低、精密度低，檢測峰容量有限的缺點(diǎn)。

朱坤福[2]采用薄層掃描法測定吳茱萸顆粒劑中吳茱萸次堿的含量。該方法簡便，分離度較好，結(jié)果準(zhǔn)確穩(wěn)定，可作為吳茱萸顆粒劑的質(zhì)量控制方法。劉蘊(yùn)秀等[9]用薄層熒光掃描法同時(shí)測定吳茱萸藥材及其制劑中羥基吳茱萸堿、N-甲酰二氫吳茱萸次堿、吳茱萸酰胺甲、吳茱萸堿及吳茱萸次堿的含量。該方法無須進(jìn)行復(fù)雜的預(yù)處理，方法簡便、靈敏度高、樣品用量少，可為尋找和利用植物資源，控制生藥及方劑質(zhì)量提供科學(xué)依據(jù)。

陳盛余等[10]采用毛細(xì)管電泳安培法檢測吳茱萸次堿的含量。吳茱萸次堿5min內(nèi)被分離出來，濃度在1.74×10-8～3.48×10-6mol·L-1與峰面積具有良好的線性關(guān)系，回收率為94％～106％。李琴韻等[11]采用HP3D全自動毛細(xì)管電泳儀在254nm波長測定吳茱萸中吳茱萸堿的含量。吳茱萸堿在1.94～7.78μg呈良好的線性關(guān)系，平均回收率為101.3％(n＝3)。該方法簡單、快捷、靈敏，成功應(yīng)用于吳茱萸中吳茱萸堿的含量測定，結(jié)果令人滿意。

蔣俊等[4]建立了HPLC-DAD(高效液相色譜-光電二極管陣列檢測器)法同時(shí)測定萸黃連的炮制輔料吳茱萸汁中生物堿、苦味素、有機(jī)酸類等3類組分的4個(gè)代表性成分：吳茱萸堿、吳茱萸次堿、吳茱萸內(nèi)酯、綠原酸，以期此方法能為萸黃連炮制輔料吳茱萸汁的質(zhì)量控制和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供重要依據(jù)。

曾金祥等[12]采用高效液相色譜及紫外檢測法建立同時(shí)測定吳茱萸藥材中辛弗林、綠原酸、蘆丁、金絲桃苷、槲皮素、吳茱萸堿和吳茱萸次堿7種活性成分含量的方法。該方法簡單、快速、準(zhǔn)確、可靠，適用于同時(shí)測定吳茱萸藥材中辛弗林、綠原酸、蘆丁、金絲桃苷、槲皮素、吳茱萸堿和吳茱萸次堿的含量，為吳茱萸藥材的質(zhì)量評價(jià)提供了更好的途徑和技術(shù)手段。

羅習(xí)珍等[8]建立一種能同時(shí)測定吳茱萸中辛弗林、吳茱萸堿和吳茱萸次堿含量的離子對色譜方法，辛弗林、吳茱萸堿和吳茱萸次堿都獲得了良好的分離效果，該法適用于吳茱萸藥材中辛弗林、吳茱萸堿和吳茱萸次堿的同時(shí)分析。該方法穩(wěn)定性高，重現(xiàn)性好，操作簡單，分析速度快，是吳茱萸質(zhì)量監(jiān)控較理想的方法。

吳茱萸揮發(fā)油具有豐富的化學(xué)成分，婁方明等[11]用固相微萃取-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用對吳茱萸揮發(fā)油成分進(jìn)行分析，能全面快速地獲得其組成信息，可應(yīng)用于吳茱萸揮發(fā)油成分的快速分析，為進(jìn)一步合理開發(fā)中藥吳茱萸提供了科學(xué)依據(jù)。

楊敏等[6]等首次采用超臨界流體色譜法測定吳茱萸中吳茱萸次堿和吳茱萸堿的含量，可在簡單的流動相條件下對吳茱萸中的吳茱萸次堿和吳茱萸堿進(jìn)行良好分離。該方法簡便快速、經(jīng)濟(jì)環(huán)保，且具有較好的重復(fù)性和線性關(guān)系。

任晶波等[7]首次將微乳液相色譜法應(yīng)用于吳茱萸中吳茱萸堿、吳茱萸次堿、辛弗林3種有效成分的分離測定，通過對表面活性劑種類及濃度、流動相酸度、添加劑等因素的考察，獲得了最佳微乳體系和色譜，在等度洗脫條件下，使該3種主要成分得到有效的分離，從而建立了一種全新、準(zhǔn)確、可靠、穩(wěn)定的快速檢測吳茱萸中3種有效成分的方法。

陳煥文等[5]等利用電噴霧解吸電離質(zhì)譜(DESIMS)，在優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件下快速獲得了吳茱萸的DESI-MS指紋譜圖，然后利用串聯(lián)質(zhì)譜對其中有重要活性的5種生物堿即吳茱萸堿、吳茱萸次堿、吳茱萸酰胺、羥基吳茱萸堿、吳茱萸酰胺甲進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定。實(shí)驗(yàn)表明，基于固體表面解吸電離質(zhì)譜分析的方法不需要萃取-分離手續(xù)，單個(gè)樣品測定時(shí)間不超過1.5min，大幅度提高了分析速度，有望在藥品品質(zhì)的在線監(jiān)測和工藝過程控制中發(fā)揮重要作用。

趙金明等[14]以吳茱萸內(nèi)酯、吳茱萸堿及吳茱萸次堿3種成分為指標(biāo)，采用HPLC法分別測定采用不同方法炮制的吳茱萸中3種成分的含量，結(jié)果表明吳茱萸堿含量最高的是酒制品，最低為醋制品；吳茱萸次堿含量最高的是鹽制品，最低為甘草制品；吳茱萸內(nèi)酯的含量依次按生品、姜制、醋制、甘草制、酒制、鹽制下降；溫慧玲等[15]對吳茱萸不同炮制品中綠原酸的含量進(jìn)行比較，結(jié)果表明：生品中綠原酸含量最高，其次是酒制、醋制、樟幫泡吳茱萸(開水泡制)、鹽制、制吳茱萸、樟幫泡吳茱萸(甘草水泡制)?？梢钥闯鰠擒镙墙?jīng)過炮制后，綠原酸含量顯著降低，而采用不同的炮制方法，吳茱萸中綠原酸含量的降低的程度也不一樣。大致呈現(xiàn)出浸泡工藝所得的炮制品比浸潤工藝所得的炮制品中綠原酸含量降低更多。而炮制中所加的輔料對于吳茱萸藥材中綠原酸的含量也似有影響。樟幫泡吳茱萸(甘草水泡制)在浸泡工藝所得的炮制品中綠原酸含量最低，制吳茱萸在浸潤工藝下所得的炮制品中含量最低。這種方法全面地評價(jià)吳茱萸生品及不同炮制品中生物堿類成分及檸檬苦素類成分的變化，為臨床用藥提供更科學(xué)全面的依據(jù)。

曹亮[16]對吳茱萸品質(zhì)進(jìn)行分析，以吳茱萸堿、吳茱萸次堿和吳茱萸內(nèi)酯3個(gè)比較確定的有效成分為指標(biāo)，從吳茱萸藥材品種來源、采摘時(shí)間、年份、產(chǎn)地來源多角度分析吳茱萸藥材品質(zhì)，發(fā)現(xiàn)吳茱萸主要成分含量受以上4個(gè)因素影響明顯。這為吳茱萸藥材的藥效形成提供參考，為吳茱萸的生產(chǎn)提供指導(dǎo)，也為其他果實(shí)類中藥材的研究提供思路。

2 吳茱萸指紋圖譜方法建立研究

中藥為多成分的復(fù)雜體系，其化學(xué)成分眾多，測定少數(shù)幾種有效成分或指標(biāo)成分，不足以保證藥材或制劑的質(zhì)量。中藥指紋圖譜具有整體性、特征性及可量化等特點(diǎn)，可用于鑒別中藥真?zhèn)巍⒃u價(jià)藥材的道地性以及產(chǎn)品的一致性與穩(wěn)定性，是一種有效的質(zhì)量控制方法。

李戰(zhàn)等[17]對吳茱萸高效液相色譜的指紋圖譜進(jìn)行研究；周欣等[28]建立吳茱萸藥材的反高效液相色譜(RP-HPLC)指紋圖譜分析方法。實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，在藥材產(chǎn)地、采收、干燥方法等相對固定的前提條件下，利用HPLC色譜指紋圖譜來控制吳茱萸的質(zhì)量優(yōu)劣是切實(shí)可行的，它比現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要更全面、客觀，該法為吳茱萸的質(zhì)量控制提供了更全面的信息，并為吳茱萸的指紋圖譜研究奠定了基礎(chǔ)。洪玉梅等[19]建立吳茱萸飲片的RP-HPLC指紋圖譜研究方法，該方法可較全面地反映吳茱萸飲片的內(nèi)在質(zhì)量，可用于吳茱萸飲片的質(zhì)量控制。

甄攀等[20]首次建立了中藥吳茱萸中水溶性成分的HPLC指紋圖譜，為吳茱萸藥材的真?zhèn)舞b別和質(zhì)量監(jiān)控提供依據(jù)。張敏等[21]對吳茱萸生物堿類成分的指紋圖譜進(jìn)行研究，該實(shí)驗(yàn)首次建立了中藥吳萊萸中生物堿成分的HPLC指紋圖譜，為不同產(chǎn)地和采收期的吳茱萸藥材鑒別提供了科學(xué)依據(jù)。

張麗艷等[22]建立了吳茱萸藥材薄層色譜指紋圖譜，該方法簡單易于操作，便于推廣應(yīng)用，可用于采購及生產(chǎn)中的快速檢驗(yàn)，為評價(jià)吳茱萸藥材品質(zhì)優(yōu)劣和GAP規(guī)范化種植、種植標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程的制定以及質(zhì)量監(jiān)控提供科學(xué)依據(jù)。

盧永飛等[23]建立不同產(chǎn)地吳茱萸有效成分指紋圖譜研究，將吳茱萸的供試品和對照品用高效液相色譜法進(jìn)行分析，將色譜數(shù)據(jù)輸入分析軟件進(jìn)行相似性檢測，為吳茱萸內(nèi)在質(zhì)量的評價(jià)提供參考并且為吳茱萸產(chǎn)品產(chǎn)地鑒定提供一些幫助。

莫善列等[24]利用核磁共振氫譜(1H-NMR)指紋圖譜對吳茱萸的特征性化學(xué)成分進(jìn)行分析，該方法可對吳茱萸進(jìn)行快速、準(zhǔn)確的鑒別，為中藥吳茱萸的質(zhì)量控制和品質(zhì)評價(jià)提供依據(jù)。

3 指紋圖譜與含量測定研究

上述的這些研究并沒有將能反映吳茱萸藥材化學(xué)成分整體模糊信息的指紋圖譜技術(shù)與精確活性成分信息的含量測定技術(shù)結(jié)合起來，因而不能全面科學(xué)合理地控制與評價(jià)吳茱萸藥材的品質(zhì)。

吳燕等[27]建立不同產(chǎn)地和品種吳茱萸藥材的高效液相色譜指紋圖譜，并同時(shí)測定吳茱萸堿、吳茱萸次堿和檸檬苦素3種主要成分的含量。該方法準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好，指紋圖譜結(jié)合含量測定可以更好地用于吳茱萸藥材的真?zhèn)舞b別及品質(zhì)評價(jià)，為吳茱萸藥材的質(zhì)量控制提供更有效的方法。

曾金祥等[20]研究了吳茱萸中藥材的指紋圖譜，該研究首次建立了吳茱萸藥材的指紋圖譜并同時(shí)用HPLC法測定了吳茱萸藥材中的綠原酸、金絲桃苷和吳茱萸堿含量，為不同產(chǎn)地、不同采收期吳茱萸藥材的質(zhì)量評價(jià)提供了更好的技術(shù)手段。這種將指紋圖譜技術(shù)與含量測定技術(shù)相結(jié)合的方法，為吳茱萸藥材的質(zhì)量控制與品質(zhì)評價(jià)提供一種新的方法，為吳茱萸GAP建設(shè)提供科技支撐。

4 討論

近年來，吳茱萸質(zhì)量控制與品質(zhì)評價(jià)方法研究獲得了很大的發(fā)展。這些方法以吳茱萸活性成分的含量測定居多，從中藥整體模糊信息上進(jìn)行吳茱萸質(zhì)量控制與品質(zhì)評價(jià)的指紋圖譜技術(shù)也開始廣泛應(yīng)用。但是目前將指紋圖譜與含量測定結(jié)合起來全面控制與評價(jià)吳茱萸藥材的品質(zhì)的研究依然很少，隨著現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)與方法的發(fā)展，吳茱萸的質(zhì)量控制與品質(zhì)評價(jià)方法必然會得到進(jìn)一步的提高與完善。

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The Progress of Quality Control and Evaluation M ethods of Euodiae Fructus

WEIJuan，ZENG Jin-xiang，ZHANG Shou-wen，ZHU Ji-xiao，ZHU Yu-ye，WANG Xiao-yun，WU Bo
(Jiangxi College of Traditional Chinese Medicine，Chinese Medicine Germplasm Resource Engineering Technology Research Center of Jiangxi Province，Nanchang 330004，China)

This paper reviewed the quality control and evaluationmethods of quality for Euodiae Fructus.This paper can provide reference for further research and application.

Euodiae Fructus；Quality control；Evaluation methods of quality

2012-06-17)

國家“十二五”科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2011BAI04B04)

*[通訊作者]張壽文，E-mail：wtzsw＠163.com