HPLC測(cè)定舒筋通絡(luò)顆粒中葛根素含量

趙志強(qiáng)，陳光輝，張久勝

(神威藥業(yè)有限公司，河北 石家莊 051430)

HPLC測(cè)定舒筋通絡(luò)顆粒中葛根素含量

趙志強(qiáng)*，陳光輝，張久勝

(神威藥業(yè)有限公司，河北 石家莊 051430)

目的：建立舒筋通絡(luò)顆粒中葛根素的含量測(cè)定方法。方法：采用高效液相色譜法，色譜柱為DIONEX C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流動(dòng)相為乙腈 -水(11∶89)，流速為1.0mL·min-1，測(cè)定波長(zhǎng)為250nm。結(jié)果：葛根素濃度在0.072～2.166μg的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r＝0.999 9)；平均回收率為99.1％，RSD＝1.0％。結(jié)論：建立的HPLC法簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確，可用于舒筋通絡(luò)顆粒的質(zhì)量控制。

HPLC；舒筋通絡(luò)顆粒；葛根素

舒筋通絡(luò)顆粒是由中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院和神威藥業(yè)有限公司共同研制開發(fā)的中藥新藥，由牛膝、骨碎補(bǔ)、川芎、天麻、葛根等9味中藥組成，具有補(bǔ)肝益腎、活血舒筋功效，主要用于治療頸椎病之肝腎陰虛、氣滯血瘀證，癥見頭暈、頭痛、脹痛或刺痛，耳聾、耳鳴，頸項(xiàng)僵直，頸、肩、背疼痛，肢體麻木，倦怠乏力，腰膝酸軟，口唇色暗，舌質(zhì)暗紅或有瘀斑[1-2]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，方中葛根的主要成分具有擴(kuò)張血管，改善心腦血管循環(huán)，降低心肌耗氧量，保護(hù)腦神經(jīng)等多種藥理作用[3-4]。在原舒筋通絡(luò)顆粒藥品標(biāo)準(zhǔn)中，暫無葛根素含量測(cè)定項(xiàng)，為有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)研究建立了HPLC檢測(cè)葛根素的含量測(cè)定方法，以期此法為舒筋通絡(luò)顆粒的質(zhì)量控制和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

DIONEX Ultimate3000高效液相色譜系統(tǒng)(Ultimate 3000四元泵，Ultimate 3000自動(dòng)進(jìn)樣器，Ultimate 3000二極管陣列檢測(cè)器，變色龍色譜工作站)，Sartorius CPA225D電子分析天平，KQ-300DA型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲波儀器有限公司)。

葛根素對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110752-200912，純度：96.0％)；舒筋通絡(luò)顆粒(神威藥業(yè)有限公司，規(guī)格為12g/袋，批號(hào)：11041501， 11042501， 11061501， 11092101，11092201， 11092301， 11092401， 11092501，11092801，11100701，11100601)；乙腈為色譜純；乙醇為分析純，純化水自制。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：DIONEX C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相：乙腈 -水(11∶89)；流速：1.0mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：250nm；進(jìn)樣量：10μL。

2.2 溶液制備

取本品細(xì)粉約0.3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入30％乙醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率33 kHz)20min，放冷，再稱定重量，用30％乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。精密稱取葛根素對(duì)照品適量，用30％的乙醇制成每1mL約含40μg的溶液作為對(duì)照品溶液。取處方中缺葛根的其他藥味，按制法制成陰性樣品，再按供試品溶液制備方法制得陰性對(duì)照品溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液及空白溶劑30％乙醇10μL進(jìn)樣，記錄色譜圖，見圖1。結(jié)果表明，供試品色譜中，在與對(duì)照品相應(yīng)位置上有色譜峰，主峰與其他成分分離良好，理論塔板數(shù)按葛根素計(jì)算為10 229，陰性對(duì)照品及空白對(duì)照品對(duì)葛根素峰無干擾。

2.4 線性關(guān)系考察

精密稱取葛根素對(duì)照品0.018 80g(純度96.0％)，置50mL容量瓶中，加入30％乙醇溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密吸取該儲(chǔ)備液0.2，0.5，1.0，2，4，6mL，分別置10mL容量瓶中，用30％乙醇溶液稀釋至刻度，搖勻，分別進(jìn)樣10μL，記錄峰面積。以葛根素的進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y＝53.481 1X＋0.034 50，r＝0.999 9。說明葛根素在0.072～2.16 6μg線性關(guān)系良好。

圖1 舒筋通絡(luò)顆粒、對(duì)照品及空白溶液HPLC圖

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取36.096μg·mL-1的葛根素對(duì)照溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，測(cè)得RSD＝0.17％，說明儀器精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品(批號(hào)為1104151)，依法制備供試品溶液并測(cè)定含量。結(jié)果RSD＝0.69％，表明方法重復(fù)性良好。

2.7 回收率試驗(yàn)

稱取舒筋通絡(luò)顆粒細(xì)粉約0.15g(含量8.575 9mg·g-1)，精密稱定，平行做9份，分別精密加入葛根素對(duì)照品溶液(0.360 96mg·mL-1)2.8，2.8，2.8，3.5，3.5，3.5，4.2，4.2，4.2mL，然后按上述方法制備供試品溶液，并測(cè)定其含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 舒筋通絡(luò)顆粒中葛根素加樣回收試驗(yàn)(n＝9)

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，室溫放置，分別于0，2，4，6，8，10，24h進(jìn)樣10μL，記錄峰面積。計(jì)算RSD＝0.21％，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 樣品含量測(cè)定

取本品10批，依法測(cè)定，計(jì)算樣品中葛根素含量，測(cè)定結(jié)果見表2。依據(jù)10批樣品的測(cè)定結(jié)果，可擬定葛根素的含量限度為6.0mg·g-1。

表2 舒筋通絡(luò)顆粒中葛根素含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

參照《中國(guó)藥典》2010版一部中葛根項(xiàng)下葛根素含量測(cè)定方法，并結(jié)合DAD紫外掃描結(jié)果，確定檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm；經(jīng)試驗(yàn)考察確定了流動(dòng)相比例和超聲提取方法[5]。

上述方法學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，采用HPLC法測(cè)定舒筋通絡(luò)顆粒中葛根素的含量，處理方法簡(jiǎn)單，測(cè)定結(jié)果重現(xiàn)性好、精密度高，該法可用于舒筋通絡(luò)顆粒中葛根素的定量分析。

[1]盧樹杰，張綱，甄蘭敏.舒筋通絡(luò)顆粒中牛膝的薄層鑒別[J].中國(guó)藥業(yè)，2010，19(6)：26.

[2]雒曉東，梁德，劉金文，等.舒筋通絡(luò)顆粒治療神經(jīng)根型和椎動(dòng)脈型頸椎病2期臨床研究[J].中國(guó)中醫(yī)骨傷科雜志，2006，14(4)：48-50.

[3]鐘寶恒.葛根素藥理研究現(xiàn)狀[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥，2009，(5)：16-18.

[4]趙瑩蓮.葛根素的藥理作用及臨床應(yīng)用進(jìn)展[J].安徽醫(yī)藥，2010，14(12)：1377-1379.

[5]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：313.

“十二五”期間完成300項(xiàng)中醫(yī)藥標(biāo)準(zhǔn)制修訂

國(guó)家中醫(yī)藥管理局日前發(fā)布《中醫(yī)藥標(biāo)準(zhǔn)化中長(zhǎng)期發(fā)展規(guī)劃綱要(2011年～2020年)》。按照《規(guī)劃綱要》確立的“十二五”時(shí)期的具體目標(biāo)，中醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)水平將有巨大提升，行業(yè)規(guī)范建設(shè)將駛上快車道。

據(jù)介紹，目前，中醫(yī)藥標(biāo)準(zhǔn)化工作還面臨不少挑戰(zhàn)，包括行業(yè)內(nèi)對(duì)中醫(yī)藥標(biāo)準(zhǔn)化重視不夠，中醫(yī)藥標(biāo)準(zhǔn)化工作基礎(chǔ)還很薄弱，中醫(yī)藥標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施推廣不夠，中醫(yī)藥標(biāo)準(zhǔn)化專業(yè)人才缺乏等。

《規(guī)劃綱要》提出，到2020年，要基本建立適應(yīng)事業(yè)發(fā)展需要、結(jié)構(gòu)比較合理的中醫(yī)藥標(biāo)準(zhǔn)體系，中醫(yī)藥標(biāo)準(zhǔn)化支撐體系進(jìn)一步完善，基本滿足中醫(yī)藥標(biāo)準(zhǔn)化工作的需求；中醫(yī)藥標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用推廣和監(jiān)測(cè)評(píng)價(jià)體系初步建立；中醫(yī)藥標(biāo)準(zhǔn)化人才隊(duì)伍建設(shè)明顯加強(qiáng)；中醫(yī)藥標(biāo)準(zhǔn)化管理體制和運(yùn)行機(jī)制更加完善，我國(guó)實(shí)質(zhì)性參與中醫(yī)藥國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化活動(dòng)的能力顯著提升?！笆濉逼陂g的目標(biāo)包括：完成300項(xiàng)中醫(yī)藥標(biāo)準(zhǔn)制修訂，基本覆蓋醫(yī)、教、研、藥等領(lǐng)域。中醫(yī)藥標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量水平明顯提高，90％以上的中醫(yī)藥標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)齡低于5年，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)組織標(biāo)準(zhǔn)之間的協(xié)調(diào)性明顯提高。在基層建設(shè)一批中醫(yī)藥標(biāo)準(zhǔn)研究推廣基地，中醫(yī)藥標(biāo)準(zhǔn)研究制定、應(yīng)用推廣與評(píng)價(jià)反饋機(jī)制基本形成。實(shí)質(zhì)性參與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化活動(dòng)的能力明顯提升。

(信息來源：中國(guó)醫(yī)藥報(bào))

Determ ination of Puerarin in Shujintongluo Granules by HPLC

ZHAO Zhi-qiang，CHEN Guang-hui，ZHANG Jiu-sheng
(Shineway Pharmaceutical Co.，Ltd.，Shijiazhuang 051430，China)

Objective：To establish amethod for detection of puerarin in Shujintongluo granules.M ethods：HPLC is the determination of puerarin in Shujintongluo granules.Chromatographic column is DIONEX C18column(250mm×4.6mm，5μm).The mobile phase is Acetonitrile-waters(11∶89).The flow rate is 1.0mL·min-1.The wavelength is 250nm.Results：The linear range of Puerarin is 0.072～2.166μg(r＝0.999 9).The Average Recovery Rate is 99.1％(RSD＝1.0％).Conclusion：The method is simple，sensitive，and accurate.It can be used to the quality control of Shujintongluo Granules.

HPLC；Shujintongluo granules；Puerarin

2012-05-15)

*[通訊作者]趙志強(qiáng)，E-mail：zzq2000518＠163.com