袁美琴

江西省鷹潭市人民醫(yī)院，江西 鷹潭 335000

熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)是一種新定量試驗(yàn)技術(shù)，能夠通過(guò)熒光標(biāo)記或者熒光染料特異性的探針，標(biāo)記跟蹤PCR產(chǎn)物，能夠?qū)Ψ磻?yīng)過(guò)程進(jìn)行實(shí)時(shí)在線監(jiān)控，結(jié)合相應(yīng)軟件對(duì)產(chǎn)物給予分析，對(duì)待測(cè)樣品的濃度進(jìn)行計(jì)算。熒光定量PCR準(zhǔn)確、快速，能夠?yàn)樵\斷病原微生物提供良好的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，提高了尿中結(jié)核分枝桿菌的陽(yáng)性檢測(cè)率，被廣泛應(yīng)用于臨床診斷中［1］。選取66例疑為腎結(jié)核患者和10例正常人群使用熒光定量PCR診斷的效果進(jìn)行對(duì)比觀察，報(bào)道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料 選取我院2010年1月至2012年10月收治的66例疑為腎結(jié)核患者使用熒光定量PCR診斷作為觀察組，其中男性42例，女性24例，年齡17～70歲，病程20天－12年。從患者的臨床癥狀分析，膀胱刺激癥患者占40例，肉眼血尿患者占18例，腰痛癥狀患者占19例，鏡下血尿患者占21例，伴發(fā)熱等全身癥狀的患者占4例，伴尿痛、尿頻以及血尿癥狀的患者占20例;把同時(shí)期10例健康體檢者作為對(duì)照組，男性7例，女性3例，年齡18～72歲。兩組診斷者均給予熒光定量PCR診斷，在年齡、性別等基本資料上差異性無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 方法 先取1ml樣品，以每分鐘10000r的速度進(jìn)行離心10分鐘，棄上清之后沉淀，加用1ml無(wú)菌生理鹽水打勻，以每分鐘10000r的速度進(jìn)行離心10分鐘，棄上清之后沉淀，加用IDNA提取液50μl充分混勻，使用金屬浴10分鐘，取2μl上清液做PCR反應(yīng)。另外取陽(yáng)性和陰性質(zhì)控品40μl進(jìn)行測(cè)定，處理方法同上。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn) 對(duì)兩組診斷方法的結(jié)構(gòu)進(jìn)行判定，Ct值為30則表明實(shí)驗(yàn)的結(jié)果呈陰性;Ct值在30以下則表明檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用軟件SPSS18.0對(duì)觀察的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，使用χ2對(duì)計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)進(jìn)行檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

66例疑為腎結(jié)核患者中，尿培養(yǎng)為陽(yáng)性的患者占34例，陽(yáng)性率為51.5%;檢測(cè)出來(lái)結(jié)合分枝桿菌患者占42例，陽(yáng)性率為63.6%;肺結(jié)核性泌尿系統(tǒng)感染患者占14例，其樣品均是陰性。對(duì)照組10例健康者均為陰性，觀察組患者在尿中結(jié)核分枝桿菌的檢出率明顯比對(duì)照組高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

3 討論

腎結(jié)核在泌尿生殖系統(tǒng)中有非常重要的地位，泌尿生殖系的其他器官結(jié)核多繼發(fā)在腎結(jié)核，因此對(duì)腎結(jié)核患者給予早期診斷，能夠?yàn)榕R床治療提供較為準(zhǔn)確的信息，提高臨床療效。腎結(jié)核的臨床診斷方法較多，X線檢查以及根據(jù)患者的臨床表現(xiàn)對(duì)腎結(jié)核患者進(jìn)行診斷，極易造成漏診和誤診;尿沉渣的抗酸桿菌呈現(xiàn)的陽(yáng)性率較低，不能夠?qū)Y(jié)合桿菌以及其他抗酸桿菌進(jìn)行有效鑒別;結(jié)核菌素試驗(yàn)被廣泛應(yīng)用于臨床診斷中，但是非結(jié)核分枝桿菌也會(huì)由于致敏作用導(dǎo)致假陽(yáng)性。熒光定量PCR技術(shù)作為一種新型的檢測(cè)技術(shù)［2］，其優(yōu)點(diǎn)主要包括核酸高效擴(kuò)增、高特異性的探針技術(shù)、高敏感性的光譜技術(shù)以及高精確定量，能夠?qū)CR過(guò)程中的熒光信號(hào)變化進(jìn)行直接探測(cè)，從而獲得定量結(jié)果。

熒光定量PCR準(zhǔn)確、快速，能夠?yàn)樵\斷病原微生物提供良好的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，提高了尿中結(jié)核分枝桿菌的陽(yáng)性檢測(cè)率，被廣泛應(yīng)用于臨床診斷中。熒光定量PCR能夠?qū)菇Y(jié)核治療過(guò)程中結(jié)核菌量變化進(jìn)行有效反映，但是在采集標(biāo)本的過(guò)程中也要注意避免標(biāo)本間的相互污染，掌握好標(biāo)本處理前的實(shí)驗(yàn)條件［3］。上述結(jié)果顯示:66例疑為腎結(jié)核患者中，尿培養(yǎng)為陽(yáng)性的患者占34例，陽(yáng)性率為51.5%;檢測(cè)出來(lái)結(jié)核分枝桿菌患者占42例，陽(yáng)性率為63.6%;肺結(jié)核性泌尿系統(tǒng)感染患者占14例，其樣品均是陰性。對(duì)照組10例健康者均為陰性，觀察組患者在尿中結(jié)核分枝桿菌的檢出率明顯比對(duì)照組高(P＜0.05)。熒光定量PCR應(yīng)用于診斷腎結(jié)核效果顯著，能夠提高尿中結(jié)核分枝桿菌的陽(yáng)性檢測(cè)率，值得臨床推廣應(yīng)用。

［1］李靜，王曉平，肖慧霞，等.熒光定量PCR診斷腎結(jié)核的臨床應(yīng)用價(jià)值［J］.寧夏醫(yī)學(xué)雜志，2011，33(10):1019－1020.

［2］李文濤，王俊東，楊利峰等.實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)及其應(yīng)用［J］.生物技術(shù)通訊，2009，17(1):112－114.

［3］郭楊，陳世界，郭萬(wàn)柱等.熒光定量PCR技術(shù)及其應(yīng)用研究進(jìn)展［J］.動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2009，30(2):78－82.