黃一忠 曹永萍 趙東升

（1.江蘇省南京市畜牧家禽科研所，南京 211800；

2.江蘇省南京市動物疫病預(yù)防控中心，南京 210012；

3.中國牧工商（集團(tuán)）總公司，北京 100029）

雞馬立克氏病免疫失敗的原因及對策

黃一忠1曹永萍2趙東升3

（1.江蘇省南京市畜牧家禽科研所，南京 211800；

2.江蘇省南京市動物疫病預(yù)防控中心，南京 210012；

3.中國牧工商（集團(tuán)）總公司，北京 100029）

雞馬立克氏?。∕D）廣泛使用疫苗進(jìn)行免疫防制，但仍未取得有效控制，為有效控制MD，本文剖析了影響馬立克氏病免疫效果的因素，提出了加強(qiáng)生物安全體系管理和科學(xué)免疫的對策，以達(dá)到保障養(yǎng)禽業(yè)健康發(fā)展的作用。

馬立克氏病 免疫失敗 對策

雞馬立克氏?。∕D）是由皰疹病毒引起的，以外周神經(jīng)、性腺、虹膜、各種臟器、肌肉和皮膚出現(xiàn)單獨(dú)性或多發(fā)性單核細(xì)胞浸潤及形成腫瘤為主要特征的一種淋巴細(xì)胞組織增生性傳染病[1]。目前世界各養(yǎng)禽國均有MD的發(fā)生流行，雖自20世紀(jì)70年代以來廣泛使用疫苗進(jìn)行免疫防制，但仍未取得有效控制，免疫失敗現(xiàn)象時有發(fā)生。特別是近年超強(qiáng)（vv MDV）和超特（超）強(qiáng)馬立克氏病病毒（vv+MDV）的出現(xiàn)，給養(yǎng)禽業(yè)帶來了較大的經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重威脅著全球養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展[2]。筆者就當(dāng)前雞馬立克氏病免疫失敗的原因進(jìn)行分析，供養(yǎng)禽者參考。

1 影響馬立克氏病免疫因素

1.1 環(huán)境中病毒載量高，早期感染嚴(yán)重

目前養(yǎng)禽業(yè)仍為大群體、小個體的生產(chǎn)模式，多數(shù)養(yǎng)殖戶養(yǎng)殖理念落后、生物安全意識淡薄、環(huán)境衛(wèi)生控制較差，早期感染發(fā)生普遍。馬立克氏病病毒（MDV）抵抗力強(qiáng)、流行廣泛，幾乎所有商業(yè)雞群都存在MDV，仔雞一出殼就可能發(fā)生感染。隨著環(huán)境中病毒載量的逐年升高，發(fā)生早期感染的機(jī)率也越來越大。雞對MDV的易感性隨日齡的增加而降低，初生仔雞對MDV的易感性比成年雞高1 000～10 000倍。由于仔雞接種MD疫苗后需5～18 d（低代次的CVI-988疫苗為5 d）才能產(chǎn)生堅(jiān)強(qiáng)的免疫力，若仔雞在接種前或免疫保護(hù)未充分建立之前發(fā)生早期感染，將造成免疫保護(hù)率下降，發(fā)病、死亡率上升[3]。

1.2 超強(qiáng)（vv MDV）馬立克氏病病毒（vv+ MDV）變異突發(fā)

自1907年最初發(fā)現(xiàn)MD至今，在對雞群免疫的選擇性壓力下，MDV的毒力逐漸變異增強(qiáng)，從溫和型向超（特）超強(qiáng)毒演變，并有進(jìn)一步發(fā)展的趨勢[4，5]。近年病毒分離株的致病性趨向于在更短的時間內(nèi)導(dǎo)致淋巴細(xì)胞的增生以及延長感染到排毒的時間，且部分免疫雞群仍可爆發(fā)。我國也有MD發(fā)病的報(bào)道，并分離出vv MDV。隨著生產(chǎn)中MDV毒力的不斷增強(qiáng)，出現(xiàn)由于vv+MDV所致的免疫失敗已變?yōu)榭赡堋?/p>

1.3 母源抗體干擾免疫

由于MD疫苗的廣泛使用，仔雞常帶有一定水平的母源抗體。疫苗毒進(jìn)入機(jī)體后會被母源抗體中和，進(jìn)而影響疫苗免疫力的產(chǎn)生。據(jù)報(bào)道，同源母源抗體對細(xì)胞結(jié)合性和非細(xì)胞結(jié)合性疫苗均有干擾作用，火雞皰疹病毒疫苗（HVT）尤為明顯。在同源母源抗體作用下，HVT疫苗的保護(hù)率下降38.8%，SB-1疫苗下降26.7%。研究表明，在同源母源抗體作用下，接種HVT疫苗后感染vv MDV，HVT疫苗的保護(hù)率由69%下降到10%-18%，幾乎完全免疫失敗。我國近年也有不少HVT疫苗免疫雞群發(fā)生MD的報(bào)道。

1.4 免疫抑制及其他病原相互作用

存在免疫抑制的情況下，使用任何優(yōu)質(zhì)疫苗都難以發(fā)揮其良好的免疫保護(hù)作用，免疫效果大大降低甚至喪失。過度擁擠、寒冷、饑餓、用藥和免疫抑制病等因素都會引起機(jī)體免疫抑制，干擾MD疫苗的免疫，最終引發(fā)MD現(xiàn)場問題。近年來，MD通常與網(wǎng)狀內(nèi)皮增生癥（REV）、雞傳染性貧血?。–AV）和禽淋巴白血?。ˋLV）等免疫抑制病的混合感染，單純感染時腫瘤發(fā)生率小于5%，混合REV感染則腫瘤發(fā)生率可大大提升，通常在8%以上。嚴(yán)重發(fā)生MD和ALV-J亞型腫瘤的雞群都并發(fā)REV感染，REV在腫瘤中檢出率在30%以上，近年來已接近50%[6]。

1.5 疫苗原因

1.5.1 疫苗毒株不符合現(xiàn)場要求 到目前為止，已從MDV的3個血清型中開發(fā)出了人工致弱的血清Ⅰ型疫苗（如CVI-988等）、無致病力血清Ⅱ型疫苗（如SB-1等）、血清Ⅲ型的HVT疫苗（如FC-126等）3種血清型商品化疫苗，這3種血清型的疫苗株既有特異性抗原，又有共同抗原。隨著MDV毒力的不斷增強(qiáng)，HVT疫苗已不能有效預(yù)防MD的發(fā)生，對感染雞的有效保護(hù)率在77%以下，更難抵御vv+MDV的攻擊。Witter經(jīng)試驗(yàn)證實(shí)，HVT/Fc126疫苗對vv+MDV毒株Md5攻擊的保護(hù)率很低，這很大程度上解釋了世界各國HVT疫苗免疫失敗的主要原因。目前世界各國都在廣泛應(yīng)用荷蘭中央獸醫(yī)研究所的B.H.Rispens博士于1972年研究成功的血清1型CVI-988疫苗。實(shí)踐證明，迄今尚未有一種疫苗比低代次CVI-988疫苗免疫效果更好，特別是用于預(yù)防vv MDV和vv+MDV，已成為當(dāng)前MD疫苗研發(fā)的參照標(biāo)準(zhǔn)[7，8]。

1.5.2 疫苗毒株代次和效價(jià)問題 目前而言，vv+MDV以快速復(fù)制、導(dǎo)致發(fā)病早為主要特征，因此疫苗的快速復(fù)制將是與vv+MDV感染競爭所必需的。值得注意的是，選擇疫苗時要認(rèn)識到眾多CVI-988疫苗株間存在本質(zhì)的區(qū)別。高代次、克隆弱化的CVI-988疫苗在弱化過程中喪失了一些原本優(yōu)良的特性，雖然疫苗效價(jià)高，但由于病毒在細(xì)胞上連續(xù)傳代使其在雞體內(nèi)復(fù)制力比原始病毒顯著地減弱，傳播力差，保護(hù)水平低，在預(yù)防早期感染上甚至比HVT疫苗提供的保護(hù)力還差。相比較而言，低代次CVI-988疫苗效價(jià)相對較低，但對雞適應(yīng)性強(qiáng)，在體內(nèi)復(fù)制速度快，產(chǎn)生免疫力早，雞間傳播能力強(qiáng)，較其他疫苗能提供更早的免疫保護(hù)[9]。研究證明，疫苗毒通過與野毒競爭同一靶位，可在免疫當(dāng)天就提供顯著的保護(hù)，預(yù)防早期感染。用PCR方法對采集的羽毛囊進(jìn)行MD疫苗免疫動力學(xué)分析，證明低代次CVI-988疫苗在雞體內(nèi)復(fù)制速度快，疫苗毒核酸復(fù)制量高。

目前，MD疫苗的效價(jià)常用PFU和TCID50來評價(jià)，其中PFU僅表示疫苗中病毒粒子或含病毒的細(xì)胞含量，TCID50指能使50%培養(yǎng)細(xì)胞感染的樣本稀釋度（倍數(shù)），致細(xì)胞病變病原的數(shù)量。據(jù)荷蘭及國內(nèi)研究報(bào)道，CVI-988疫苗的效價(jià)與疫苗的保護(hù)率并不成正比關(guān)系，并非效價(jià)越高越好。病毒含量達(dá)到一定程度，保護(hù)率不再增加，并且接種劑量過大，會造成免疫麻痹或影響雞只的生長發(fā)育，如軟腿現(xiàn)象。歐洲藥典規(guī)定CVI-988疫苗效價(jià)應(yīng)大于等于103TCID50/羽份（1 000TCID50/羽份），小于等于103.5TCID50/羽份（3 160TCID50/羽份）?？紤]到現(xiàn)場早期污染及使用時的損耗，疫苗應(yīng)保證最終效價(jià)在標(biāo)準(zhǔn)以上。考慮到種毒、生產(chǎn)成本及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不同，部分疫苗出廠效價(jià)過低也是造成目前國內(nèi)MD免疫失敗的原因之一。

1.5.3 疫苗外源性污染問題嚴(yán)重 商品胚（非SPF雞胚）制備的MD疫苗會污染外源病原，特別是一些免疫抑制性疫病病原，如REV、ALV、CAV等，除本身導(dǎo)致發(fā)病引起腫瘤外，還可以造成免疫抑制，影響疫苗的免疫應(yīng)答而出現(xiàn)免疫失敗。

1.5.4 疫苗的冷鏈保存 常用MD疫苗有凍干苗和液氮苗兩種。HVT凍干苗需冷藏保存，如疫苗冷鏈運(yùn)輸不到位，購后冷藏不及時，保存條件不當(dāng)，保存時間過期或反復(fù)凍融等原因都會導(dǎo)致疫苗失效而引起的免疫失敗。目前廣泛應(yīng)用的CVI-988疫苗是一種細(xì)胞結(jié)合性疫苗，必須在液氮條件下（-196℃）保存、運(yùn)輸。液氮苗疫苗毒存在于細(xì)胞中，細(xì)胞死亡，疫苗毒會因缺少細(xì)胞載體而無法大量復(fù)制，進(jìn)而無法發(fā)揮保護(hù)效果。因此，在疫苗保存及使用過程中，要最好地保持細(xì)胞的活性，最大限度地保持合格疫苗的出廠效價(jià)。實(shí)際中一些廠家或養(yǎng)殖場常購買一些劣質(zhì)液氮罐用于運(yùn)輸和保存疫苗。這些罐不但容易損壞，而且液氮揮發(fā)快，由于沒有及時發(fā)現(xiàn)，部分疫苗暴露在損壞的空罐中時間過長而導(dǎo)致效價(jià)降低或完全失效。如果使用這些疫苗，就有可能出現(xiàn)零星散發(fā)或普遍發(fā)生MD免疫失敗的現(xiàn)象，這種情況的雞群MD現(xiàn)場發(fā)病率一般可在30%～50%。另外，一些由凍干疫苗轉(zhuǎn)為液氮疫苗的用戶，出于缺乏液氮保存及檢測經(jīng)驗(yàn)或技術(shù)員工作責(zé)任心不強(qiáng)，也出現(xiàn)了一些免疫失敗發(fā)生的情況。

1.5.5 疫苗的使用 目前養(yǎng)雞場在使用MD疫苗時，特別是CVI-988疫苗，由于稀釋液選擇、融化疫苗的水溫、稀釋液溫度、疫苗稀釋后放置時間、注射和稀釋疫苗時濫用抗菌素藥物等不按各廠家要求規(guī)范進(jìn)行，也會造成部分疫苗效價(jià)降低或失效。

2 對策

2.1 加強(qiáng)生物安全體系管理

2.1.1 強(qiáng)化消毒工作 要注意種蛋、孵化室、孵化器、育雛舍等必須徹底消毒，以防早期感染。

2.1.2 強(qiáng)化飼養(yǎng)管理 育雛與育成舍要分開，做到全進(jìn)全出。減少各種應(yīng)激，如溫度突變、高密度飼養(yǎng)、其他疾病、藥物反應(yīng)、疫苗接種、轉(zhuǎn)群移槽、性成熟期應(yīng)激等，提高雞體抵抗力，降低野毒感染壓力。

2.2 科學(xué)免疫

2.2.1 正確選擇疫苗 近年廣泛應(yīng)用的CVI-988疫苗為細(xì)胞結(jié)合性疫苗。由于受細(xì)胞保護(hù)，病毒可在細(xì)胞內(nèi)增殖，可有效避免母源抗體的干擾。據(jù)報(bào)道，CVI-988疫苗在接種后5 d內(nèi)即可產(chǎn)生堅(jiān)強(qiáng)的保護(hù)力，對雞群早期保護(hù)指數(shù)比HVT疫苗平均高30%，不但不受母源抗體干擾，并可抵御vv+MDV的攻擊，有效預(yù)防MD的發(fā)生。

2.2.2 選擇好疫苗廠家 為保證疫苗質(zhì)量，一定要選擇正規(guī)生產(chǎn)廠家用SPF雞胚制備的疫苗，這樣才能盡最大可能降低MD和其他疾病的發(fā)生。

2.2.3 正確使用疫苗 嚴(yán)格按照疫苗使用說明書要求，保管、運(yùn)輸、稀釋、注射等，確保疫苗質(zhì)量，并盡早免疫。

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