藍(lán)氏賈第鞭毛蟲的免疫逃避機(jī)制

王 洋，田喜鳳

藍(lán)氏賈第鞭毛蟲（Giardia lamblia，簡稱賈第蟲）是一種世界性分布的機(jī)會性致病原蟲，主要寄生于人和多種哺乳動(dòng)物的小腸，引起以腹瀉、腹痛、吸收不良為主要癥狀的藍(lán)氏賈第鞭毛蟲?。╣iardiasis，簡稱賈第蟲病）［1］。賈第蟲是最早分化出來的真核生物之一，生活史簡單，包括具有感染能力的包囊和致病能力的滋養(yǎng)體。包囊隨污染食物和飲水進(jìn)入人體，在十二指腸內(nèi)脫囊形成滋養(yǎng)體，滋養(yǎng)體依賴其鞭毛和腹吸盤游弋并吸附在腸粘膜上，結(jié)果減少了腸粘膜的吸收面積，同時(shí)造成微絨毛的損傷和萎縮，最終導(dǎo)致營養(yǎng)物質(zhì)和水分吸收障礙而發(fā)生腹瀉。大部分的賈第蟲感染患者能夠自愈，但部分患者會發(fā)生長期或者反復(fù)感染，主要見于兒童和免疫功能受損人群［2－3］。兒童患者可引起貧血和營養(yǎng)不良，導(dǎo)致生長滯緩。若不及時(shí)治療，多發(fā)展為慢性，表現(xiàn)為周期性稀便，反復(fù)發(fā)作，病程可長達(dá)數(shù)年。在賈第蟲感染過程中，人體的非特異性和特異性免疫系統(tǒng)均能產(chǎn)生強(qiáng)烈的抗賈第蟲效應(yīng)，賈第蟲如何對抗人體免疫系統(tǒng)的攻擊，在人體內(nèi)長期生存一直以來都是一個(gè)值得關(guān)注的問題。本文將對賈第蟲如何逃避宿主的免疫防御系統(tǒng)做一綜述。

1 宿主的抗賈第蟲免疫

1．1 非特異性免疫 賈第蟲感染者會表現(xiàn)出不同的癥狀，有些患者會在幾天內(nèi)恢復(fù)，而另一些患者即使在血液和腸腔中存在特異性抗體并且有良好細(xì)胞免疫的情況下，仍會出現(xiàn)持續(xù)數(shù)年的癥狀。一些非特異性免疫因素可能在賈第蟲的排除方面具有重要的意義。例如，來自未曾感染賈第蟲的正常人的乳汁能夠殺死賈第蟲滋養(yǎng)體，乳汁中的結(jié)合膽鹽、不飽和脂肪酸以及游離脂肪酸均有殺滅賈第蟲的效果［4］。而十二指腸和空腸液中的脂解反應(yīng)也能殺滅賈第蟲［5］。中性粒細(xì)胞釋放的防御素以及indolicidin在體外具有抗賈第蟲效果［6］。Li E等發(fā)現(xiàn)肥大細(xì)胞通過其分泌的各種細(xì)胞因子在早期快速控制賈第蟲感染方面具有重要的作用［7］。包括 TNF－α、IFN－γ、IL－6、IL－12在內(nèi)的多種細(xì)胞因子具有體外抑制殺傷賈第蟲的作用［7］。另一些細(xì)胞因子則可以通過激活巨噬細(xì)胞間接發(fā)揮殺傷賈第蟲的作用［12］。此外，補(bǔ)體系統(tǒng)能夠通過甘露糖途徑被激活直接發(fā)揮殺傷賈第蟲的作用［13］。另一方面，某些非免疫因素能夠保護(hù)寄生蟲免受非特異性免疫損傷，例如腸液中的粘液成分能夠保護(hù)賈第蟲滋養(yǎng)體免受脂肪代謝產(chǎn)物的損傷，如果向乳汁中加入腸粘液也能消除乳汁對賈第蟲的殺傷作用［14］。

1．2 特異性免疫 大量的研究表明，宿主的細(xì)胞免疫和體液免疫在控制賈第蟲感染中都起了重要的作用。

1．2．1 體液免疫 低免疫球蛋白血癥患者感染賈第蟲后往往遷延不愈，說明抗體在宿主對抗賈第蟲的過程中起著一定的作用。鑒于賈第蟲寄生于腸腔中，不會直接進(jìn)入體內(nèi)，有理由相信，能夠分泌到腸腔中的分泌型IgA（sIgA）是發(fā)揮抗賈第蟲體液免疫的主力。sIgA不能激活補(bǔ)體，也不能介導(dǎo)調(diào)理吞噬作用，主要通過和賈第蟲結(jié)合抑制其粘附發(fā)揮作用。之后的研究顯示，IgA缺陷的小鼠雖然不能完全清除體內(nèi)的賈第蟲，但能在一定程度上控制賈第蟲的感染，且控制效果較B細(xì)胞缺陷的小鼠更好，這說明IgA是控制和清除賈第蟲感染的重要因子，而其它類型抗體在控制賈第蟲感染方面也有一定的作用［15］。血清中的抗賈第蟲抗體對賈第蟲的殺傷作用依賴于補(bǔ)體的存在，含有賈第蟲抗體的人類血清在體外能夠殺滅超過98%的賈第蟲。但加入鈣離子螯合劑EDTA以及56℃0．5h滅活補(bǔ)體后抗血清對賈第蟲失去殺傷力［16］。但是由于賈第蟲寄生在腸道，腸道中無補(bǔ)體存在，且sIgA不能激活補(bǔ)體，因而無法通過上述途徑達(dá)到殺滅賈第蟲的效果。藉此考慮補(bǔ)體參與的裂解賈第蟲效應(yīng)可能在限制賈第蟲入侵組織中起著重要作用［17］。

1．2．2 細(xì)胞免疫 T細(xì)胞缺陷小鼠不能控制賈第蟲感染并且特異性缺失CD＋4T細(xì)胞可以導(dǎo)致慢性賈第蟲感染，說明細(xì)胞免疫在抗賈第蟲感染中也起著重要的作用［18］。哺乳動(dòng)物的腸道中有著豐富的淋巴細(xì)胞，主要分布在腸道固有層、集合淋巴小結(jié)以及上皮細(xì)胞層。這些粘膜淋巴組織的主要成分是各種類型的T細(xì)胞。由于從粘膜分離淋巴細(xì)胞的技術(shù)不夠成熟，早期有關(guān)抗賈第蟲細(xì)胞免疫的研究采用的都是外周血中分離的淋巴細(xì)胞。研究顯示，當(dāng)采用賈第蟲抗原刺激外周血白細(xì)胞時(shí)淋巴細(xì)胞會發(fā)生明顯的增殖［19］。Singer SM等發(fā)現(xiàn)在抗賈第蟲細(xì)胞免疫中發(fā)揮作用的是αβT細(xì)胞，其作用方式不依賴B細(xì)胞的存在，而γδT細(xì)胞在其中根本不起作用［18］。

同時(shí)，研究人員也發(fā)現(xiàn)，T細(xì)胞對于賈第蟲感染作用的是一把雙刃劍，一方面對賈第蟲的感染具有一定的抑制作用，發(fā)揮作用的細(xì)胞主要為CD＋4T細(xì)胞；另一方面，增殖的CD＋8T細(xì)胞可以造成小腸粘膜細(xì)胞刷狀緣微絨毛的破壞以及雙糖酶活性的減弱，導(dǎo)致腸功能紊亂，可能參與賈第蟲病的發(fā)病［11，20，22］。

2 賈第蟲的免疫逃避機(jī)制

2．1 賈第蟲的抗原漂變 表面抗原變異是病原微生物在宿主持續(xù)免疫壓力下維持感染狀態(tài)最重要的免疫逃避機(jī)制，參與慢性和反復(fù)感染的發(fā)生。賈第蟲的抗原漂變最早是在體外環(huán)境中被發(fā)現(xiàn)的。體外培養(yǎng)的不同種群賈第蟲會分泌不同抗原性的蛋白產(chǎn)物到培養(yǎng)基中，并且識別某種表面分子的特異性單克隆抗體只能和同一種群中個(gè)別賈第蟲細(xì)胞結(jié)合。這些證據(jù)都表明賈第蟲在生存過程中其表面抗原分子會發(fā)生改變，也說明賈第蟲在沒有任何免疫壓力的條件下即能發(fā)生抗原漂變［22］。

賈第蟲的抗原漂變在人類以及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的感染過程中也會發(fā)生。在感染過程中，滋養(yǎng)體的增殖產(chǎn)生不同表面抗原分子的賈第蟲亞群，雖然這些亞群的賈第蟲之后可以被免疫系統(tǒng)識別并消滅，但不斷產(chǎn)生的新表面分子可以防止感染被完全清除，并且在一定時(shí)間內(nèi)某一賈第蟲表面僅表達(dá)一種抗原分子。依分離株的不同大約6．5～13．5代賈第蟲表面抗原分子會發(fā)生漂變，產(chǎn)生另一種抗原分子［23］。在抗原轉(zhuǎn)換過程中可以觀察到單個(gè)賈第蟲滋養(yǎng)體細(xì)胞上同時(shí)表達(dá)兩種抗原分子［24］。此時(shí)賈第蟲滋養(yǎng)體表面可以同時(shí)結(jié)合兩種標(biāo)記單克隆抗體，持續(xù)大約15h，這一過程常常與滋養(yǎng)體向包囊或者包囊向滋養(yǎng)體轉(zhuǎn)化的過程同時(shí)發(fā)生［25］。

賈第蟲的抗原漂變主要依賴其表面的多樣表面蛋白（variant surface protein，VSP）實(shí)現(xiàn)的。VSP屬于I型整合膜蛋白，分子量20kD到200kD大小不等，位于賈第蟲表面，厚約18nm，覆蓋了包括鞭毛、腹吸盤、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)以及外周囊泡在內(nèi)的整個(gè)蟲體。在體外培養(yǎng)中，VSP可以脫落到培養(yǎng)基中。VSP蛋白含高達(dá)11%～12%的半胱氨酸，主要分布于VSP的N末端，這些半胱氨酸以CXXC模體（C：半胱氨酸；X：任意氨基酸）形式存在，VSP中沒有游離的巰基存在。VSP的N末端部分可變度最高，是寄生蟲與環(huán)境作用的部分。不同VSP的區(qū)別主要在于N末端CXXC基序的差異。VSP的C末端相當(dāng)保守，由38個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成，約90%的氨基酸殘基在各種VSP是完全相同的，包含一段長約23－25個(gè)氨基酸殘基的跨膜區(qū)。C末端的5個(gè)氨基酸殘基（CRGKA）位于胞漿中。VSP還包含有一段保守的GGCY基序以及一段或者幾段鋅指結(jié)構(gòu)域。其中GGCY基序通常位于靠近C末端的胞外區(qū)，在某些VSP此段基序則位于N末端。此外，有研究報(bào)道VSP存在RING和LIM鋅指結(jié)構(gòu)，存在鋅指結(jié)構(gòu)的蛋白可能具有多種功能，其中之一就是作為轉(zhuǎn)錄因子，但VSP中鋅指結(jié)構(gòu)的功能、VSP是否與Zn2＋結(jié)合并參與VSP空間結(jié)構(gòu)以及生物學(xué)活性的維持仍然未知［24］。

大約25%的賈第蟲基因組編碼VSP蛋白，第一個(gè)vsp基因——TSA417于1990年被克隆并表達(dá)。隨著賈第蟲A組 WB克隆、B組GS／M－H7克隆以及E組P15克隆全基因組測序的完成，幾乎所有的VSP蛋白全序列均已獲得。從WB分離株中已鑒定出了303個(gè)vsp基因。在這303個(gè)vsp基因中，228個(gè)序列完整。這些基因成簇分布，分散在賈第蟲的五條染色體上。同大多數(shù)其他賈第蟲基因一樣，vsp基因沒有內(nèi)含子，它們的啟動(dòng)子相對較短且序列保守性較差，3′非翻譯區(qū)通常比較短，很少超過30個(gè)核苷酸。此外，vsp基因通常離端粒較遠(yuǎn)，提示vsp基因的重組并不涉及同賈第蟲染色體基因組其它部位的轉(zhuǎn)位，而這種轉(zhuǎn)位現(xiàn)象在其它能夠產(chǎn)生抗原漂變的寄生蟲中經(jīng)常出現(xiàn)。vsp基因的上游序列具有極高的相似性，據(jù)此推斷位于賈第蟲基因組中的vsp基因庫通過分離和重組完成vsp基因的重排，這個(gè)假設(shè)很快得到了證實(shí)。采用多克隆抗體鑒定VSP蛋白會產(chǎn)生強(qiáng)烈的交叉反應(yīng)，一些同源性很高的VSP蛋白甚至可以被同一株單克隆抗體識別［26］。

雖然多個(gè)研究小組致力于發(fā)現(xiàn)賈第蟲抗原漂變的分子機(jī)制，目前為止，仍然未能解釋清楚這個(gè)調(diào)節(jié)機(jī)制究竟發(fā)生在基因組、轉(zhuǎn)錄還是轉(zhuǎn)錄后水平。在僅表達(dá)一種VSP的賈第蟲克隆中，只能檢測出一種VSP mRNA，說明盡管存在幾百種vsp基因，但同時(shí)僅有一個(gè)vsp基因被轉(zhuǎn)錄，而其他vsp基因處于沉默狀態(tài)。之后的研究顯示所有的vsp基因均被轉(zhuǎn)錄，但除了表達(dá)的那個(gè)vsp基因外，其它的mRNA被一種類似RNA干擾的機(jī)制降解掉。目前已經(jīng)在賈第蟲鑒定出幾株microRNA能夠調(diào)控VSP的表達(dá)，并且推測在賈第蟲的基因組中，可能含有大量的microRNA編碼序列。在抗原漂變發(fā)生過程中，原本的vsp基因轉(zhuǎn)錄本消失，而另一株vsp基因的mRNA被保留而翻譯形成新的VSP。如果內(nèi)源性RNA干擾系統(tǒng)參與賈第蟲的抗原多樣性表達(dá)，一個(gè)單一的vsp轉(zhuǎn)錄本如何跳過基因沉默機(jī)制，在抗原漂變的過程中，不同VSP的mRNA又是以何種機(jī)制完成過渡的，這些問題仍然函待解決［27－29］。

2．2 賈第蟲誘導(dǎo)的L－精氨酸（L－Arg）饑餓 在成年哺乳動(dòng)物中，L－Arg被看做一種半必需氨基酸，大部分的L－Arg可以由L脯氨酸、谷氨酸或谷氨酰胺合成。在一定生理和病理狀態(tài)下，自身生成的LArg不能滿足機(jī)體的需要，還需要食物提供。

L－Arg不僅是合成蛋白質(zhì)的原料，還可以被不同的酶催化形成多種不同功能的生物活性物質(zhì)。誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶（NOS）是哺乳動(dòng)物小腸上皮細(xì)胞代謝L－Arg最重要的酶，該酶可以催化L－Arg生成L瓜氨酸和NO，其中NO是一種高活性的自由基，參與維持上皮細(xì)胞的功能，在抗腫瘤以及先天免疫中起著重要作用。NO還是一種廣譜抗菌劑，可以對抗細(xì)菌和致病寄生蟲。除此之外還有許多其他功能，包括神經(jīng)傳導(dǎo)、調(diào)節(jié)粘膜屏障的完整性以及腸道血管張力等［30］。此外，L－Arg在調(diào)節(jié)T細(xì)胞功能方面還有重要的作用。CD3ζ鏈?zhǔn)荰細(xì)胞受體（TCR）中負(fù)責(zé)傳遞信號的部分，其正確組裝和表達(dá)對TCR發(fā)揮正常功能起著重要作用。L－Arg缺失能夠削弱抗原刺激后CD3ζ鏈的內(nèi)化和再表達(dá)，并且抑制細(xì)胞因子的產(chǎn)生和細(xì)胞增殖。CD3ζ鏈信號傳導(dǎo)以及T細(xì)胞功能的異?？梢酝ㄟ^補(bǔ)充L－Arg得到恢復(fù)［16］。CD3ζ鏈的下調(diào)表達(dá)和對抗原或者絲裂原反應(yīng)下調(diào)的關(guān)系已經(jīng)在癌癥、慢性感染性疾病以及自身免疫病人中得到證實(shí)［32－33］。具體 L－Arg通過何種方式影響CD3ζ鏈的功能仍需進(jìn)一步研究才能明確。

在單細(xì)胞生物中，營養(yǎng)耗竭戰(zhàn)術(shù)常被用來遏制消耗營養(yǎng)物質(zhì)細(xì)胞的增殖。L－Arg在賈第蟲生長的早期和大多數(shù)增殖階段作為偏愛營養(yǎng)物質(zhì)。賈第蟲利用精氨酸雙水解酶（ADH）途徑水解L－Arg作為能量的來源。這個(gè)途徑包括3個(gè)酶促反應(yīng)步驟，涉及精氨酸脫亞氨酶（ADI），鳥氨酸氨甲酰轉(zhuǎn)移酶（OTC），以及氨基甲酸鹽激酶（CK），同時(shí)伴有ATP的生成。ADI和CK兩種酶在真核生物非常稀有，在高等動(dòng)物中不存在。盡管1分子L－Arg僅能生成1分子ATP，但是賈第蟲利用這條途徑能夠較糖酵解途徑更快的獲得ATP。

L－Arg被NOS催化生成NO。小腸上皮細(xì)胞生成的NO能夠抑制賈第蟲生長、成囊以及脫囊。賈第蟲通過消耗腸道中的L－Arg，一方面抑制小腸上皮細(xì)胞的正常發(fā)育［34］，另一方面間接抑制上皮細(xì)胞生成NO，而小腸細(xì)胞中NO的水平對于調(diào)控水平的吸收和分泌具有重要意義，提示這可能與賈第蟲病的腹瀉癥狀相關(guān)［35］。賈第蟲和上皮細(xì)胞都有一套高效的L－Arg運(yùn)輸系統(tǒng)，但賈第蟲的L－Arg運(yùn)輸能力比上皮細(xì)胞強(qiáng)10－20倍。因此賈第蟲比宿主更高效的利用L－Arg。在賈第蟲中，L－Arg與瓜氨酸對向跨膜運(yùn)輸，因此，賈第蟲對L－Arg代謝可以通過產(chǎn)生和輸出瓜氨酸而有效地促進(jìn)自身的吸收。并且，瓜氨酸可以競爭性抑制上皮細(xì)胞對LArg的吸收，從而進(jìn)一步抑制 NO 的生成［36］。Ringqvist E等人的研究顯示在體外，賈第蟲與腸上皮細(xì)胞接觸過程中，ADI、烯醇酶以及OTC可以被賈第蟲釋放到培養(yǎng)基中，直接降解環(huán)境中的L－Arg，進(jìn)一步消耗用于生產(chǎn)NO的游離L－Arg［36］。除了非特異性免疫，賈第蟲還可以誘導(dǎo)宿主特異性免疫應(yīng)答的發(fā)生。在多種細(xì)菌和其他寄生蟲實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞環(huán)境中的L－Arg的耗盡可以導(dǎo)致T細(xì)胞反應(yīng)性降低。盡管在賈第蟲病中還未有相關(guān)的研究，但有理由相信，賈第蟲可能通過ADI高效消耗LArg干擾TCR的功能，從而抑制T細(xì)胞產(chǎn)生特異性的、強(qiáng)烈的抗賈第蟲免疫反應(yīng)。有關(guān)CD3ζ鏈動(dòng)物模型中的研究將會闡明賈第蟲抑制T細(xì)胞免疫的分子機(jī)制。

再者，賈第蟲也能夠利用ADI逃避宿主的體液免疫反應(yīng)。研究表明多種VSP蛋白的胞漿內(nèi)C末端都是瓜氨酸化的。瓜氨酸是一種非標(biāo)準(zhǔn)氨基酸，自然界沒有能夠攜帶瓜氨酸的tRNA，蛋白中瓜氨酸都是翻譯后修飾的結(jié)果，在賈第蟲中，這一修飾作用有ADI行使。最近的研究顯示，抑制VSP的瓜氨酸化可以抑制VSP造成的抗原漂變，提高特異性抗體的殺傷能力，而高表達(dá)ADI能夠提高蟲體的抗原漂變能力，其具體機(jī)制仍有待進(jìn)一步研究［37］。

此外，賈第蟲還可能通過其他一些途徑抑制宿主的免疫反應(yīng)，例如，將賈第蟲與骨髓樹突細(xì)胞共培養(yǎng)可以抑制樹突細(xì)胞釋放IL－6、IL－10、IL－12等具有免疫調(diào)節(jié)功能的細(xì)胞因子，但其具體機(jī)制仍不清楚［10］。

綜上所述，賈第蟲的免疫逃避涉及多種復(fù)雜的機(jī)制，其中部分機(jī)制仍未十分明了，例如賈第蟲抗原漂變的調(diào)節(jié)機(jī)制、L－Arg饑餓對特異性免疫的影響機(jī)制等。并且，目前很多抗賈第蟲免疫的研究都是在血液免疫環(huán)境中進(jìn)行的，例如補(bǔ)體、IgG、骨髓樹突細(xì)胞等作用的研究，這些物質(zhì)通常并不存在于腸道中，真正腸道環(huán)境中的抗賈第蟲免疫機(jī)制及賈第蟲逃逸機(jī)制仍有待進(jìn)一步的研究。作為腸道寄生蟲和寄生性原蟲的代表，對其免疫逃避機(jī)制的更深入研究，對于抗賈第蟲治療乃至其它腸道寄生蟲的治療方法提供十分重要的依據(jù)。

［1］Gardner TB，Hill DR．Treatment of giardiasis［J］．Clin Microbiol Rev，2001，14（1）：114－128．DOI：10．1128／CMR．14．1．114－128．2001

［2］Kucik CJ，Martin GL，Sortor BV．Common intestinal parasites［J］．Am Fam Physician，2004，69（5）：1161－1168．

［3］Stark D，Barratt JL，van Hal S，etal．Clinical significance of enteric protozoa in the immunosuppressed human population［J］．Clin Microbiol Rev，2009，22（4）：634－650．DOI：10．1128／CMR．00017－09

［4］Gillin FD，Reiner DS，Wang CS．Human milk kills parasitic intestinal protozoa［J］．Science，1983，221（4617）：1290－1292．DOI：10．1126／science．6310751

［5］Das S，Reiner DS，Zenian J，etal．Killing of Giardia lamblia trophozoites by human intestinal fluid in vitro［J］．J Infect Dis，1988，157（6）：1257－1260．DOI：10．1093／infdis／157．6．1257

［6］Aley SB，Zimmerman M，Hetsko M，etal．Killing of Giardia lamblia by cryptdins and cationic neutrophil peptides［J］．Infect Immun，1994，62（12）：5397－5403．

［7］Li E，Zhao A，Shea－Donohue T，etal．Mast cell－mediated changes in smooth muscle contractility during mouse giardiasis［J］．Infect Immun，2007，75（9）：4514－4518．DOI：10．1128／IAI．00596－07

［8］Zhou P，Li E，Shea－Donohue T，etal．Tumour necrosis factor alpha contributes to protection against Giardia lambliainfection in mice［J］．Parasite Immunol，2007，29（7）：367－374．DOI：10．1111／j．1365－3024．2007．00953．x

［9］Matowicka－Karna J，Kralisz M，Kemona H．Assessment of the levels of nitric oxide（NO）and cytokines（IL－5，IL－6，IL－13，TNF，IFN－gamma）in giardiosis［J］．Folia Histochem Cytobiol，2011，49（2）：280－284．

［10］Kamda JD，Nash TE，Singer SM．Giardia duodenalis：dendritic cell defects in IL－6deficient mice contribute to susceptibility to intestinal infection［J］．Exp Parasitol，2012，130（3）：288－291．DOI：10．1128／IAI．00718－08

［11］Long KZ，Rosado JL，Santos JI，etal．Associations between mucosal innate and adaptive immune responses and resolution of diarrheal pathogen infectionsJ ．Infect Immun2010783 1221－1228．DOI：10．1128／IAI．00767－09

［12］Belosevic M，Daniels CW．Phagocytosis of Giardia lamblia trophozoites by cytokine－activated macrophages［J］．Clin Exp Immunol，1992，87（2）：304－309．

［13］Evans－Osses I，Ansa－Addo EA，Inal JM，etal．Involvement of lectin pathway activation in the complement killing of Giardia intestinalis［J］．Biochem Biophys Res Commun，2010，395（3）：382－386．DOI：10．1016／j．bbrc．2010．04．025

［14］Zenian AJ，Gillin FD．Intestinal mucus protects Giardia lambliafrom killing by human milk［J］．J Protozool，1987，34（1）：22－26．

［15］Langford TD，Housley MP，Boes M，etal．Central importance of immunoglobulin A in host defense against Giardia spp［J］．Infect Immun，2002，70（1）：11－18．DOI：10．1128／IAI．70．1．11－18．2002

［16］Davids BJ，Palm JE，Housley MP，etal．Polymeric immunoglobulin receptor in intestinal immune defense against the lumen－dwelling protozoan parasite Giardia［J］．J Immunol，2006，177（9）：6281－6290．

［17］Amorim RM，Silva DA，Taketomi EA，etal．Giardia duodenalis：kinetics of cyst elimination and the systemic humoral and intestinal secretory immune responses in gerbils （Meriones unguiculatus）experimentally infected［J］．Exp Parasitol，2010，125（3）：297－303．DOI：10．1016／j．exppara．2010．02．007

［18］Singer SM，Nash TE．T－cell－dependent control of acute Giardia lambliainfections in mice［J］．Infect Immun，2000，68（1）：170－175．DOI：10．1128／IAI．68．1．170－175．2000

［19］Ebert EC．Giardia induces proliferation and interferon gamma production by intestinal lymphocytes［J］．Gut，1999，44（3）：342－346．DOI：10．1136／gut．44．3．342

［20］Scott KG，Yu LC，Buret AG．Role of CD＋8and CD＋4T lymphocytes in jejunal mucosal injury during murine giardiasis［J］．Infect Immun，2004，72（6）：3536－3542．DOI：10．1128／IAI．72．6．3536－3542．2004

［21］Solaymani－Mohammadi S，Singer SM．Giardia duodenalis：the double－edged sword of immune responses in giardiasis［J］．Exp Parasitol，2010，126（3）：292－297．DOI：10．1016／j．exppara．2010．06．014

［22］Nash TE，Aggarwal A．Cytotoxicity of monoclonal antibodies to a subset of Giardiaisolates［J］．J Immunol，1986，136（7）：2628－2632．

［23］Nash TE，Banks SM，Alling DW，etal．Frequency of variant antigens in Giardia lamblia［J］．Exp Parasitol，1990，71（4）：415－421．DOI：10．1016／0014－4894（90）90067－M

［24］Nash TE，Lujan HT，Mowatt MR，etal．Variant－specific surface protein switching in Giardia lamblia［J］．Infect Immun，2001，69（3）：1922－1923．DOI：10．1128／IAI．69．3．1922－1923．2001

［25］Carranza PG，F(xiàn)eltes G，Ropolo A，etal．Simultaneous expression of different variant－specific surface proteins in single Giardia lambliatrophozoites during encystation［J］．Infect Immun，20027095265－5268．DOI10．1128IAI．70．9．5265－5268．2002

［26］Adam RD，Nigam A，Seshadri V，etal．The Giardia lamblia vsp gene repertoire：characteristics，genomic organization，and evolution［J］．BMC Genomics，2010，11：424．DOI：10．1186／1471－2164－11－424

［27］Prucca CG，Slavin I，Quiroga R，etal．Antigenic variation in Giardia lambliais regulated by RNA interference［J］．Nature，2008，456（7223）：750－754．DOI：10．1038／nature07585

［28］Saraiya AA，Li W，Wang CC．A microRNA derived from an apparent canonical biogenesis pathway regulates variant surface protein gene expression in Giardia lamblia［J］．RNA，2011，17（12）：2152－2164．DOI：10．1261／rna．028118．111

［29］Li W，Saraiya AA，Wang CC．The profile of snoRNA－derived microRNAs that regulate expression of variant surface proteins in Giardia lamblia［J］．Cell Microbiol，2012，14（9）：1455－1473．DOI：10．1111／j．1462－5822．2012．01811．x

［30］Bronte V，Zanovello P．Regulation of immune responses by L－arginine metabolism［J］．Nat Rev Immunol，2005，5（8）：641－654．DOI：10．1038／nri1668

［31］Zea AH，Rodriguez PC，Culotta KS，etal．L－Arginine modulates CD＋8zeta expression and T cell function in activated human T lymphocytes［J］．Cell Immunol，2004，232（1－2）：21－31．DOI：10．1016／j．cellimm．2005．01．004

［32］Rossi E，Matutes E，Morilla R，etal．Zeta chain and CD28are poorly expressed on T lymphocytes from chronic lymphocytic leukemia［J］．Leukemia，1996，10（3）：494－497．

［33］Tate DJ Jr，Vonderhaar DJ，Caldas YA，etal．Effect of arginase II on L－arginine depletion and cell growth in murine cell lines of renal cell carcinoma［J］．J Hematol Oncol，2008，1：14．DOI：10．1186／1756－8722－1－14

［34］Stadelmann B，Merino MC，Persson L，etal．Arginine consumption by the intestinal parasite Giardia intestinalis reduces proliferation of intestinal epithelial cells［J］．PLoS One，2012，7（9）：e45325．DOI：10．1371／journal．pone．0045325

［35］Li E，Zhou P，Singer SM．Neuronal nitric oxide synthase is necessary for elimination of Giardia lamblia infections in mice［J］．J Immunol，2006，176（1）：516－521．

［36］Knodler LA，Schofield PJ，Edwards MR．L－arginine transport and metabolism in Giardia intestinalis support its position as a transition between the prokaryotic and eukaryotic kingdoms［J］．Microbiology，1995，141（Pt 9）：2063－2070．DOI：10．1099／13500872－141－9－2063

［37］Ringqvist E，Palm JE，Skarin H，etal．Release of metabolic enzymes by Giardiain response to interaction with intestinal epithelial cells［J］．Mol Biochem Parasitol，2008，159（2）：85－91．DOI：10．1016／j．molbiopara．2008．02．005

［38］Touz MC，Rópolo AS，Rivero MR，etal．Arginine deiminase has multiple regulatory roles in the biology of Giardia lamblia［J］．J Cell Sci，2008，121（Pt 17）：2930－2938．DOI：10．1242／jcs．026963