范嘉銓，陳飛鵬，黃華興

(廣州醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科，廣東廣州510260)

阻塞性呼吸暫停低通氣綜合征患者血清sCD40L、IL-18、IL-6及MMP-9的水平及意義

范嘉銓，陳飛鵬，黃華興

(廣州醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科，廣東廣州510260)

目的探討阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征(OSAHS)患者血清炎癥因子(sCD40L、IL-18、IL-6、MMP-9)的臨床意義。方法選擇OSAHS患者(其中輕度30例，中、重度30例)為實驗組，另選擇健康者30例為正常對照組，測定各組血清sCD40L、IL-18、IL-6、MMP-9的水平。測定睡眠呼吸暫停低通氣指數(shù)(AHI)、最低脈搏血氧飽和度(SpO2)。結(jié)果①比較正常對照組、輕度OSAHS組、(中、重度)OSAHS組血清sCD40L、IL-18、IL-6、MMP-9的水平，發(fā)現(xiàn)OSAHS組比正常對照組明顯升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)；②OSAHS組血清sCD40L、IL-18、IL-6、MMP-9水平密切相關(guān)，且分別與睡眠呼吸監(jiān)測指標(biāo)(AHI、最低SpO2)密切相關(guān)。結(jié)論OSAHS患者血清炎癥因子sCD40L、IL-18、IL-6、MMP-9的水平升高，表明OSAHS是一種與炎癥密切相關(guān)的疾病。

阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征；可溶性CD40L配體；白細(xì)胞介素-18；白細(xì)胞介素-6；基質(zhì)金屬蛋白酶-9

阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征(OSAHS)是指睡眠時上氣道塌陷阻塞引起的呼吸暫停和通氣不足，伴有打鼾、睡眠結(jié)構(gòu)紊亂，頻發(fā)血氧飽和度下降、白天嗜睡等癥狀，并可引發(fā)多臟器功能損害，是一種發(fā)病率高、嚴(yán)重影響生活和危及生命的疾病，是高血壓、冠狀動脈粥樣硬化性心臟病、肺源性心臟病和腦卒中等心腦血管疾病的獨立危險因素。根據(jù)國外不同國家流調(diào)資料研究[1]，伴有嗜睡癥狀的OSAHS患病率男性為4%～7.5%,女性約2%；國內(nèi)流調(diào)資料顯示，伴有嗜睡癥狀的OSAHS在成年人中的患病率為3%～5%[2]。近些年研究發(fā)現(xiàn)，OSAHS可能是一種炎癥相關(guān)的疾病，多種炎性細(xì)胞、炎性因子參與OSAHS睡眠結(jié)構(gòu)紊亂的發(fā)生、發(fā)展過程，但具體機制并不完全清楚。本研究旨在探討OSAHS患者血清多種炎癥因子的變化，為OSAHS炎癥機制提供一定證據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究對象選擇2O11年1月至2012年10月在廣州醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院睡眠中心經(jīng)多導(dǎo)睡眠監(jiān)測儀(美國偉康A(chǔ)lice4)診斷為OSAHS的患者60例，均為男性，年齡24～56歲，平均(40±16)歲；體重指數(shù)(BMI)為(26.20 2.69)kg/m2。按照呼吸暫停低通氣指數(shù)(AHI)將OSAHS組進一步分為輕度組(5次／h≤AHI＜15次／h)30例，中、重度組(15次／h≤AHI) 30例。選擇同期在廣州醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院就診，

經(jīng)多導(dǎo)睡眠監(jiān)測儀監(jiān)測AHI＜5次／h的年齡、BMI與OSAHS組相匹配的30例男性作為對照組。所有入選者均無冠心病史，無糖尿病，近2周內(nèi)無感染、創(chuàng)傷和手術(shù)，未使用過抗炎藥物，無全身性疾病(如惡性腫瘤、甲狀腺功能減低癥、腎上腺皮質(zhì)增生癥)，無長期服用非甾體類藥和口服抗凝藥等病史。各組研究對象年齡、體指數(shù)無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0．05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 多導(dǎo)睡眠呼吸監(jiān)測(PSG監(jiān)測)所有研究對象保證在安靜舒適的狀態(tài)下，應(yīng)用美國偉康公司Alice4多導(dǎo)睡眠呼吸監(jiān)測儀連續(xù)監(jiān)測研究對象至少7h睡眠時的口鼻氣流、胸腹呼吸運動、體位及鼾聲，記錄并計算出：睡眠呼吸暫停低通氣指數(shù)(AHI)、最低SaO2等睡眠呼吸指數(shù)。OSAHS的診斷依據(jù)中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會睡眠呼吸疾病學(xué)組制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)，即睡眠呼吸暫停低通氣指數(shù)(apnea hypopnea index，AHI)，指平均每小時睡眠中呼吸暫停加上低通氣的次數(shù))≥5次／h。AHI＜5則排除OSAHS。

1.2.2 標(biāo)本處理各組均于PSG監(jiān)測的次日晨7：00空腹抽取靜脈血4mL，盡快離心后取血清，置-80oC保存待測(嚴(yán)格按照試劑說明書要求)。

1.2.3 sCD40L、IL-18、IL-6、MMP-9的檢測四者都是采用ELISA法。sCD40L、IL-6試劑盒購自上海藍基生物有限公司，IL-18、MMP-9試劑盒購自美國R&D SYSTEMS，四者嚴(yán)格按照試劑說明書要求進行檢測。四者采用的都是生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法。兩者在終止反應(yīng)后30min內(nèi)在波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取數(shù)值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。其他血脂成分由我院檢驗科完成。

1.2.4 統(tǒng)計學(xué)處理應(yīng)用SPSS 13.0軟件進行統(tǒng)計分析。數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，組間比較采用方差分析和LSD檢驗，變量間的相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 OSAHS各組與正常對照組在年齡、體重、BMI的比較中，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

2.2 比較OSAHS組(輕度組、(中度、重度)組)與正常對照組血清sCD40L、IL-18、IL-6、MMP-9水平中發(fā)現(xiàn)OSAHS各組比正常對照組明顯升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(見表1)。

2.3 OSAHS組的嚴(yán)重程度越重，sCD40L、IL-18、IL-6、MMP-9水平越高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.4 OSAHS組血清sCD40L、IL-18、IL-6、MMP-9水平分別與睡眠呼吸有關(guān)監(jiān)測指標(biāo)密切相關(guān)(見表2)。

表1 各組基本情況比較

表1 各組基本情況比較

注：OSAHS：阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征；AHI：呼吸暫停低通氣次數(shù)；SpO2：脈搏氧飽和度；sCD40L：可溶性CD40L配體；IL-18：白細(xì)胞介素-18；IL-6：白細(xì)胞介素-6；MMP-9：基質(zhì)金屬蛋白酶-9；與對照組比較aP＜0.01；與輕度OSAHS組比較bP＜0.01；

組別例數(shù)AHI(次/h)最低SpO2(%)sCD40L(ng/L)IL-18(ng/L)IL-6（pg/ml）MMP-9(ng/L)正常對照組輕度OSAHS組中、重度OSAHS組F值P值30 30 30 1.35±0.98 8.91±3.00a54.99±16.49ab269.072＜0.01 89.67±3.45 80.05±7.35a65.97±8.63ab63.709＜0.01 1.32±0.77 3.88±0.90a8.86±2.25ab203.535＜0.01 9.18±5.14 22.60±3.79a41.89±6.76ab281.261＜0.01 12.3±2.85 27.23±3.56a35.45±6.59ab200.355＜0.01 715.08±358.23 130.610±290.37a3095.84±1059.91 98.809＜0.01

表2 OSAHS組血清sCD40L、IL-18、IL-6、MMP-9與睡眠呼吸指數(shù)間相關(guān)性

3 討論

白細(xì)胞介素-18(IL-18)屬于IL-1家族，具有免疫調(diào)節(jié)功能。它作為輔助性T細(xì)胞1型(Th1)細(xì)胞因子，能促進Th1分化，抑制B淋巴細(xì)胞合成IgE，誘導(dǎo)自然殺傷細(xì)胞或T淋巴細(xì)胞合成與釋放IFN-γ。同時IL-18還刺激白細(xì)胞介素-8(IL-8)、白細(xì)胞介素-13(IL-13)、腫瘤壞死因子(TNF-α)及單核細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)的合成，許多免疫細(xì)胞包括單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、粒細(xì)胞都受IL-18的調(diào)控。臨床研究[3，4]發(fā)現(xiàn)，血清基礎(chǔ)IL-18水平增高可預(yù)測未來冠心病事件的發(fā)生，且其預(yù)測價值獨立于經(jīng)典的危險因子和其他炎性因子。

基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)是MMPs家族中重要成員，在動脈粥樣硬化斑塊處的血管重構(gòu)、斑塊的不穩(wěn)定及其破裂而誘發(fā)的心腦血管疾病中都扮演著重要角色。Zauridakis等[5]對124例穩(wěn)定型心絞痛患者的研究顯示，MMP-9是冠狀動脈病變進展的獨立預(yù)測因子。Blankenberg等[6]研究顯示，MMP-9/R279Q基因多態(tài)現(xiàn)象與穩(wěn)定型心絞痛患者心血管事件的發(fā)生相關(guān)。

白細(xì)胞介素-6(IL-6)是一種多效細(xì)胞因子，是由單核細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞等分泌產(chǎn)生的，它能活化炎癥細(xì)胞，誘導(dǎo)黏附分子和炎性趨化因子的表達，參與動脈粥樣硬化的炎性反應(yīng)過程。Ciftci等[7]研究發(fā)現(xiàn)IL-6水平在睡眠呼吸暫停綜合征中增高，本研究結(jié)果提示IL-6水平與OSAHS的病情相關(guān)，與文獻報道相符。

可溶性CD40L配體(sCD40L)是在T淋巴細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的，并通過與CD40結(jié)合在B細(xì)胞免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用。CD40和CD40配體都已經(jīng)確定存在于一些其他類型的細(xì)胞中，包括血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和血小板。在這些細(xì)胞中，CD40(與CD40結(jié)合)可觸發(fā)各種炎癥介質(zhì)的細(xì)胞因子的表達：IL-1、IL-6、IL-12和腫瘤壞死因子-α；趨化因子、單核細(xì)胞趨化蛋白-1和IL-8；黏附分子、ICAM-1和VCAM-1；基質(zhì)金屬蛋白酶；生長因子；凝血組織因子。這些現(xiàn)象提示sCD40L在動脈粥樣硬化各個階段均起著關(guān)鍵的作用。國外研究[8]發(fā)現(xiàn)不穩(wěn)定型心絞痛患者比健康人或穩(wěn)定型心絞痛者有較高的血漿sCD40L水平，而且增高的sCD40L具有復(fù)發(fā)高風(fēng)險性。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)血清中sCD40L、IL-18、IL-6、MMP-9水平在OSAHS患者與正常對照組相比明顯增高(P＜0.01)，sCD40L、IL-18、IL-6、MMP-9水平與患者AHI呈正相關(guān)，與睡眠呼吸障礙事件時最低SpO2呈負(fù)相關(guān)，說明sCD40L、IL-18、IL-6、 MMP-9與OSAHS患者病情嚴(yán)重程度有關(guān)，OSAHS患者病情越重，sCD40L、IL-18、IL-6、MMP-9水平越高；血清sCD40L、IL-18、IL-6、MMP-9水平相互密切相關(guān)。OSAHS是一種氧化應(yīng)激性疾病，睡眠中反復(fù)出現(xiàn)的間歇性低氧和再氧合對組織產(chǎn)生類似于缺血-再灌注的損傷，促使多種炎性細(xì)胞(如白細(xì)胞、單核細(xì)胞等)活化，產(chǎn)生過多的自由基、超氧陰離子等，直接損害內(nèi)皮細(xì)胞，引起各種炎癥因子的釋放。本研究結(jié)果說明OSAHS存在明顯的炎性反應(yīng)，OSAHS可能是一種炎癥相關(guān)的疾病。

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Expression and clinical significance of soluble CD40 ligand，interleukin-18，interleukin-6 and matrix metalloproteinase-9 in obstructive sleep apnea hypopnea syndrome patients

FAN Jiaquan,CHEN Feipeng,HUANG Huaxing.Second Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University,Guangzhou 510260,China.

ObjectiveTo investigate the clinical significance of soluble CD40 ligand(sCD40L),interleukin-18(IL-18),interleukin-6(IL-6),matrix metalloproteinase-9(MMP-9)in obstructive sleep apnea hypopnoea syndrome(OSAHS)patients without complications.Methods All observed subjects were divided into 4 groups:control subjects,mild OSAHS,moderate OSAHS and severe OSAHS.Serum sDC40L,IL-18,IL-6,MMP-9 concentrations were measured and compared.Furthermore，the sleep apnea hypopnea index(AHI)and lowest pulse oxygen saturation(SpO2)were detected too.Results①Compared to control subjects,the serum levels of sCD40L,IL-18,IL-6 and MMP-9 were increased significantly in OSAHS patients(P＜0.01).②sCD40L,IL-18, IL-6 and MMP-9 related to each other and closely related AHI and SpO2respectively.Conclusion The serum levels of sCD40L, IL-18,IL-6 and MMP-9 were increased in OSAHS patients,indicated that OSAHS perhaps closely related to the inflammation.

Obstructive sleep apnea-hypopnea syndrome；Soluble CD40 ligand；Interleukin-18；Interleukin-6；Matrix metalloproteinase-9

:R766，R446.62文獻識別碼：A

1674-1129(2013)02-0115-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.02.004

廣州市醫(yī)藥衛(wèi)生科技項目（201102A213011）

范嘉銓，男，1977年生，主治醫(yī)師，呼吸病學(xué)研究。

陳飛鵬，教授，研究生導(dǎo)師，呼吸內(nèi)科主任。