朱德杰

（河南省周口市食品藥品檢驗(yàn)所，周口466000）

HPLC 法測(cè)定黃菊消銀丸中綠原酸的含量

朱德杰

（河南省周口市食品藥品檢驗(yàn)所，周口466000）

目的建立黃菊消銀丸中綠原酸的含量測(cè)定方法。方法采用HPLC法，色譜條件為：色譜柱：Eclipse XDB-C18；流動(dòng)相：乙腈-0.4%磷酸溶液（13：87）；流速：1.0ml～min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：327nm。結(jié)果綠原酸在0.2556～0.7668mg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.9999），平均回收率為98.87%，RSD=1.16%（n=6）。結(jié)論本方法操作簡(jiǎn)便，專屬性強(qiáng)，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于黃菊消銀丸的質(zhì)量控制。

綠原酸；高效液相色譜法；黃菊消銀丸

黃菊消銀丸（豫藥制字Z05140114），是由金銀花、黃連、野菊花、蒲公英、紫花地丁、連翹、土茯苓、生石膏、茵陳、生地黃、玄參、三棱等藥材加工制成的復(fù)方制劑，具有清熱利膽，涼血解毒之功效，用于治療肝膽濕熱及血瘀等引起的皮膚瘙癢、起屑等。沒有定量指標(biāo)，本文以方中君藥金銀花的有效成分綠原酸為指標(biāo)，建立了黃菊消銀丸中綠原酸的高效液相測(cè)定方法，操作簡(jiǎn)便，省時(shí)，準(zhǔn)確，可作為黃菊消銀丸的質(zhì)量控制方法。

1 儀器與試藥

Agilent 1260型高效液相色譜儀，AUW-220D電子分析天平，5210DT超聲處理器；綠原酸對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110753-200413）；乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑為分析純。黃菊消銀丸（柘城縣中醫(yī)院）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件色譜柱：Eclipse XDB-C18色譜柱（4.6mm×150mm，5um）。流動(dòng)相：乙腈-0.4%磷酸溶液（13∶87）為流動(dòng)相；流速1.0ml～min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)327nm；進(jìn)樣量10μl。

2.2 線性關(guān)系考察取綠原酸對(duì)照品約10mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加50%甲醇適量，振搖使完全溶解后，稀釋至刻度，搖勻，精密量取10ml置25ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻。按照“2.1”項(xiàng)色譜條件，分別進(jìn)樣6、8、10、12、14、16、18μl，記錄綠原酸峰面積值，以峰面積積分值（Y）對(duì)對(duì)照品進(jìn)樣量（X）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y=221.29X+450.26 r=0.9999。結(jié)果表明，綠原酸對(duì)照品進(jìn)樣量在0.2556～ 0.7668mg范圍內(nèi)與峰面積值呈良好的線性關(guān)系。

2.3 對(duì)照品溶液的制備取綠原酸對(duì)照品約10mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加50%甲醇適量，振搖使完全溶解后，稀釋至刻度，搖勻，精密量取10ml，置25ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

2.4 供試品溶液及陰性對(duì)照溶液的制備取本品約6.0g，研細(xì)，精密稱定，置50ml量瓶中，加入50%甲醇適量，超聲處理30分鐘（功率250W，頻率35KHZ），放冷，加50%甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液10ml，置25ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取缺金銀花的其他味藥按處方工藝制成陰性制劑，按上述方法制備陰性對(duì)照溶液。

2.5 干擾試驗(yàn)取上述3種溶液，按照上述色譜條件，分別注入高效液相色譜儀，進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，結(jié)果表明供試品溶液在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)的位置上，有相應(yīng)的色譜峰，而陰性對(duì)照溶液在此保留時(shí)間無(wú)干擾。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.6 精密度試驗(yàn)取同一對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，每次10μl，記錄峰面積，RSD=0.96%（n=5），表明精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一對(duì)照品溶液，分別在0、2、4、6、8、10h進(jìn)樣測(cè)定，RSD=1.12%，供試品溶液在10小時(shí)內(nèi)峰面積基本穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)稱取6份已測(cè)得綠原酸含量的供試品（含量為0.8475mg／g），每份約3.0g，精密稱定，置50ml量瓶中，另分別精密加入對(duì)照品溶液（濃度為0.5005mg／ml）5.00ml，制備成供試品溶液，分別測(cè)定綠原酸的含量，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.8 樣品測(cè)定取3批樣品，按“2.4”項(xiàng)下方法制備供試液，各進(jìn)樣10μl，按外標(biāo)法計(jì)算綠原酸的含量，結(jié)果見表2。

表2 3批樣品中綠原酸的含量

3 討論

綠原酸是金銀花的有效成分，故采用高效液相色譜法對(duì)綠原酸進(jìn)行含量測(cè)定，綠原酸的紫外吸收?qǐng)D譜顯示，其在327nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故選擇327nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

本文參考有關(guān)文獻(xiàn)［1-2］，供試品的制備分別采用回流0.5h、1h、2h提取，超聲10min、30min、1h提取，試驗(yàn)結(jié)果表明超聲處理30min提取較為完全，且操作簡(jiǎn)便快捷，故采用超聲提取30min。

［1］袁欣．HPLC法測(cè)定不同廠家銀黃膠囊中綠原酸和黃芩苷的含量［J］．中國(guó)藥師，2007，10（07）：679-680．

［2］余衛(wèi)兵，畢雪艷，張鋼平，等．HPLC法測(cè)定臁瘡?fù)柚芯G原酸的含量［J］．中國(guó)藥師，2007，10（12）：1270-1271．

Determination of Chlorogenic Acid in Huangjuxiaoyin Pill by HPLC

Zhu Dejie（Zhoukou Institute for Food and D rug Control，Zhoukou 466000，China）

ObjectiveTo set up amethod to determination of chlorogenic acid in huangjuxiaoyin pill．MethodsThe content of chlorogenic acid determined by HPLC．The chromatographic system consisted of C18column，using acetonitrile-0.4%phosphate solution（17∶83）asmobile phase.The content was detected at a waveleng of 327 nm，the flow rate was 1.0ml～min-1.ResultsThe chlorogenic acid have agood tincar rolatim in the range of 0.2556～0.7668mg（r=0.9999），the average recovery was 98.87%and RSD=1.16%（n=6）.ConclusionThe establishedmethod is simple，sensitive and accuracy．It can be used for quality control of huangjuxiaoyin pill．

Chlorogenic acid；HPLC；Huangjuxiaoyin Pill

10.3969／j.issn.1672-2779.2013.11.099

1672-2779（2013）-11-0151-02

??張文娟

2013-05-06）