HPLC法測(cè)定糖腎康顆粒中黃芪甲苷的含量

關(guān)向杭 朱明蕾

南京同仁堂藥業(yè)有限責(zé)任公司，江蘇 南京 210012

HPLC法測(cè)定糖腎康顆粒中黃芪甲苷的含量

關(guān)向杭 朱明蕾

南京同仁堂藥業(yè)有限責(zé)任公司，江蘇 南京 210012

目的：測(cè)定糖腎康顆粒中黃芪甲苷的含量。方法：采用高效液相色譜法，以乙腈－水（35∶65）為流動(dòng)相；流速：1.2ml/min；蒸發(fā)光散射檢測(cè)。結(jié)果：黃芪甲苷線性范圍為0.5～5μg，平均回收率為，RSD＝2.08%。結(jié)論：高效液相法測(cè)定糖腎康顆粒中黃芪甲苷的含量，方法專屬性強(qiáng)，結(jié)果可靠，可用于糖腎康顆粒的質(zhì)量控制。

糖腎康顆粒；高效液相色譜；黃芪甲苷

糖腎康顆粒為治療糖尿病腎病的顆粒劑。由黃芪、生地、山藥、大黃、白芍、丹參、益母草、赤芍、全蝎等九味組成。具有益氣養(yǎng)陰，泄?jié)嵬ńj(luò)之功效。黃芪與它藥配伍有益氣生津止渴，治療消渴，具有良好的消蛋白和改善腎功能作用，因此定為君藥，黃芪甲苷為其主要成分。本文采用高效液相法測(cè)定糖腎康顆粒中黃芪甲苷的含量，方法專屬性強(qiáng)，結(jié)果可靠，可用于糖腎康顆粒的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

安捷倫高效液相色譜儀1200，ESLD蒸發(fā)光散射檢測(cè)儀，電子分析天平 （北京賽多利斯天平有限公司）。

乙腈為色譜純，水為去離子水，其余試劑為分析純。黃芪甲苷對(duì)照品（110781－200613供含量測(cè)定用）中國(guó)藥品生物制品鑒定所提供。糖腎康顆粒自制。缺味陰性樣品：按處方配成相應(yīng)的缺味處方藥，并按制劑工藝，加相應(yīng)輔料制備。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 依利特SinoChrom ODS－BP柱（5μm，4.6×250mm）；流動(dòng)相：乙腈－水（35∶65）；流速：1.2m l/min；蒸發(fā)光散射；柱溫：30℃

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品適量，分別加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品細(xì)粉3g，精密稱定，精密加取2%氫氧化鉀甲醇溶液60ml，稱定，回流1.5小時(shí)，補(bǔ)足重量，濾過，精密量取續(xù)濾液40m l蒸干，加水10ml溶解，置分液漏斗中，加入氯仿－正丁醇（2∶1）萃取4次（20m l，15m l，15ml，15m l），合并萃液，用1%磷酸二氫鉀洗滌二次（15ml，15m l），棄去，有機(jī)相用水15ml洗滌后，棄去水液，有機(jī)相蒸干，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至2ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇稀釋到刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照品溶液的制備 取缺黃芪的樣品，同供試品溶液的制備項(xiàng)下操作制成陰性對(duì)照溶液

2.3 專屬性試驗(yàn) 分別吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液各10μl，按2.1項(xiàng)下的色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定，色譜圖見圖1～3，結(jié)果無干擾。

2.4 線性關(guān)系考察 精密量取黃芪甲苷對(duì)照品溶液（0.49mg/m l）1、2、4、6、8、10ml，分別移入10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別吸取10μl注入液相色譜儀，測(cè)定，記錄峰面積Y。以峰面積Y和進(jìn)樣量X的對(duì)數(shù)值進(jìn)行線性回歸，黃芪甲苷進(jìn)樣量在0.5～5μg之間范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為lgY＝1.353lgX＋1.672，r＝0.9999（n＝6）

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，計(jì)算RSD＝0.07%。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液和對(duì)照品溶液10μl，在24小時(shí)內(nèi)分別進(jìn)樣7次（0，1，2，4，8，12，24h），記錄峰面積，結(jié)果供試品溶液黃芪甲苷峰面積RSD＝0.13%，黃芪甲苷對(duì)照品峰面積RSD＝0.11%，表明供試品溶液及對(duì)照品溶液在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取批號(hào)10101樣品6份，按上述方法提取和測(cè)定，結(jié)果樣品平均含量為0.404mg/g，RSD＝1.43%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量為0.404mg/g的樣品1g，精密稱定，精密加入一定量黃芪甲苷對(duì)照品，按上述方法提取和測(cè)定，結(jié)果平均回收率為95.4%，RSD為2.08%。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)

2.9 樣品含量測(cè)定 取5批樣品按上述方法提取和測(cè)定，結(jié)果見表2。

表2 四批樣品含量測(cè)定結(jié)果

藥典對(duì)黃芪藥材中黃芪甲苷的含量限度定為不得少于0.040%，根據(jù)上述測(cè)定結(jié)果，故暫定：本品每袋含黃芪以黃芪甲苷計(jì)，不得低于2.0mg。

3 討論

提取時(shí)間：取細(xì)粉3g三份，加2%氫氧化鉀甲醇溶液60m l，分別回流0.5、1、1.5小時(shí)，按正文操作，測(cè)定，含量分別為0.24mg/g、0.41mg/g、0.40mg/g?；亓?h與1.5h所得樣液含量相近，節(jié)約起見，選擇回流1小時(shí)。

分析方法選擇：由于黃芪甲苷在液相測(cè)定時(shí)，需使用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，考慮儀器的配置和成本問題，不少人采用薄層分析方法。但就本實(shí)驗(yàn)比較而言，易受結(jié)構(gòu)相近成分干擾，專屬性弱，結(jié)果偏高，偏差相對(duì)偏大。因而選用高效液相法作分析適宜。

本文采用高效液相法測(cè)定糖腎康顆粒中黃芪甲苷的含量，方法專屬性強(qiáng)，結(jié)果可靠。

Determination of Astragaloside A in Tangshenkang Granule

GUAN Xiang－h(huán)ang，ZHU Ming－lei
Nanjing Tongrentang Pharmaceutical CO.LTD.Nanjing 210012，China

Object：To determine the content of astragaloside A in Tangshenkang granule.Methods：A HPLC method was used.The mobile phase consisted of acetonitrile－water（35∶65）.The flow rate was 1.2mL/min.ELSD was used to determineResults：The linear range of astragaloside A was 0.5μg－5μg.The average recovery rate was 95.4%（RSD＝2.08%）.Conclusion：The HPLC method is accurate and can be used to control the quality of the Tangshenkang granule.

R284.1

A

1007－8517（2013）14－0024－02

2013.05.09）