乙型肝炎病毒（HBV）DNA整合和HBx蛋白缺失突變發(fā)生在HBV陽性肝癌患者中，HBx基因突變的C端缺失與肝癌發(fā)生密切相關。鑒于以前發(fā)現(xiàn)HBx－d382缺失突變體（缺失382～400 nt）可下調(diào)miR－338－3p表達，該研究旨在檢測miR－338－3p在HBx－d382介導的肝細胞增殖中的作用。通過脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染建立HBx基因表達的LO2細胞。轉(zhuǎn)染miR－338－3p類似物或抑制劑至LO2／HBx－d382細胞和LO2／HBx細胞，miR－NC作為對照miRNA。電腦分析miR－338－3p潛在的靶蛋白，提示miR－338－3P可靶向細胞周期調(diào)節(jié)蛋白D1。為確認細胞周期蛋白D1受miR－338－3P的負調(diào)控，該研究構建了與miR－338－3p結合的細胞周期蛋白D1的3′非翻譯區(qū)（3′UTR）野生型和突變體熒光素酶報告系統(tǒng)。通過熒光定量聚合酶鏈反應（PCR）和蛋白免疫印跡法檢測細胞周期蛋白D1表達，采用流式細胞儀、Ed U摻入法及軟瓊脂集落形成分析細胞增殖活性。結果顯示，HBx－d382促進LO2細胞增殖，上調(diào)細胞周期蛋白D1表達。mi R－338－3p的表達抑制LO2／HBx－d382細胞（和LO2／HBx細胞）增殖，也下調(diào)細胞周期蛋白D1表達。在細胞周期蛋白D1的3′UTR區(qū)2個假定的miR－338－3p結合位點中，第2個位點（2 397～2 403 nt）是抑制所必需的。結果提示，MIR－338－3p可通過結合到細胞周期蛋白D1的3′UTR區(qū)2 397～2 403 nt，下調(diào)細胞周期蛋白D1表達。下調(diào) miR－338－3p表達能促進LO2／HBx和LO2／HBx－d382突變的肝細胞增殖，而對LO2／HBx－d382細胞效果更顯著。該研究闡明了一種新的機制，從一個新的mi RNA調(diào)控角度發(fā)現(xiàn)HBx基因缺失突變體比HBx蛋白具有更快誘導肝癌的傾向。

（Fu X，etal．PLoS One，2012，7（8）：e43204．）