王麗，賈曉健，姜華軍，杜郁，楊帆，司書毅，洪斌

心血管疾病是當(dāng)今世界發(fā)病率最高的疾病之一，動脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）是心血管疾病的主要病理基礎(chǔ)，而脂質(zhì)代謝紊亂是公認(rèn)的危險因子。長期的臨床研究表明，高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）的降低（＜ 40 mg/dl）是心血管疾病獨(dú)立而重要的危險因子。美國心血管疾病藥物專家 Rader 提出，降低心血管疾病危害的下一個目標(biāo)就是尋找能夠提高 HDL-C 水平和（或）增強(qiáng) HDL 功能的藥物和治療方案[1]。研究表明，HDL 最重要的抗動脈粥樣硬化機(jī)制是促進(jìn)膽固醇的逆轉(zhuǎn)運(yùn)（reverse cholesterol transfer，RCT），即膽固醇從外周組織向肝臟轉(zhuǎn)運(yùn)并排出的過程[2]。高密度脂蛋白受體 SR-BI（人 SR-BI 又稱 CLA-1）作為 HDL 受體，通過上調(diào)其表達(dá)可促進(jìn) HDL-C 直接轉(zhuǎn)運(yùn)至肝臟并最終被排出，加速膽固醇的逆轉(zhuǎn)運(yùn)，因此，SR-BI 被認(rèn)為是一個潛在的預(yù)防和（或）逆轉(zhuǎn)動脈粥樣硬化的新靶點(diǎn)[3-4]。除轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控外，mRNA 的穩(wěn)定性相關(guān)的轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控是基因表達(dá)水平的另一個重要調(diào)控機(jī)制，RNA 結(jié)合蛋白通過識別特定的 mRNA 3' 非翻譯區(qū)（3' untranslated region，3'UTR）的順式作用元件來影響 mRNA 的半衰期，參與 mRNA 穩(wěn)定性、基因表達(dá)定位以及翻譯效率等調(diào)控[5]。目前，對于基因 mRNA 穩(wěn)定性的調(diào)控已成為藥物發(fā)現(xiàn)的潛在靶點(diǎn)[6]。

本研究以人 HDL 受體 SR-BI/CLA-1 基因3'UTR 介導(dǎo)的 mRNA 穩(wěn)定性為靶點(diǎn)，將 SR-BI/ CLA-1 基因 3'UTR 大約 1200 bp 的全長片段克隆至熒光素酶報告基因的下游，構(gòu)建受 SR-BI/ CLA-1 基因 3'UTR 調(diào)控的重組熒光素酶報告質(zhì)粒 pc-luc-3'UTR 以及 pGL3-CLAp-luc-3'UTR，并獲得了穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 pGL3-CLAp-luc-3'UTR 的 HepG2 細(xì)胞的單克隆細(xì)胞株，為進(jìn)一步研究 SR-BI/CLA-1 表達(dá)調(diào)控機(jī)制以及針對人 SR-BI/CLA-1 基因 mRNA 穩(wěn)定性的表達(dá)上調(diào)劑高通量篩選模型的建立奠定了基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 質(zhì)粒、菌株和細(xì)胞株 質(zhì)粒載體 pGEM-T、真核細(xì)胞表達(dá)載體 pGL3-Basic 和 pcDNA3.1 均 為美國 Promega 公司產(chǎn)品；大腸桿菌 E. coli DH5α 和人肝癌細(xì)胞株 HepG2 為本實(shí)驗(yàn)室保存。

1.1.2 工具酶和主要試劑 Pfu DNA 聚合酶購自上海生工生物工程公司；T4 DNA 連接酶、限制 性內(nèi)切酶等均購自大連寶生物工程公司；DNA 回收試劑盒購自北京全式金生物技術(shù)有限公司；PureYield? 中量質(zhì)粒提取試劑盒、細(xì)胞裂解液及熒光素酶檢測系統(tǒng)、SV 總 RNA 提取試劑盒均購自美國 Promega 公司；轉(zhuǎn)染試劑 Lipofectamine? 2000、SuperScript III First-Strand 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒均購自美國 Invitrogen 公司；實(shí)時熒光定量 RT-PCR 試劑盒（FastStart Universal SYBR Green PCR Master）購自瑞士 Roche 公司；MEM 細(xì)胞培養(yǎng)基購自美國 Thermo 公司；胎牛血清、丙酮酸鈉、非必需氨基酸和 G418 抗生素購自美國 Gibco 公司；二甲基亞砜（DMSO）購自美國 Sigma 公司。 1.1.3 儀器 MiniCycle PTC-200 型 PCR 儀為美國 MJ Research 公司產(chǎn)品；EnVision 多功能微 孔板檢測儀為美國 PerkinElmer 公司產(chǎn)品；iQ5 Multicolor real time PCR 儀為美國 Bio-Rad 公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 CLA-1 基因 mRNA 3'UTR 目的片段的獲得 以人肝癌細(xì)胞株 HepG2 基因組 DNA 為模板，PCR 擴(kuò)增獲得 CLA-1 基因 mRNA 3'UTR 全長序列（1 ～ 959 bp，1 為終止密碼子），上、下游引物分別為 5' GCTCTAGATGCCTTTCTCCACAG GGTCC 3'，5' GCTCTAGA GGGCGTACTCATGCAG TAT 3'（下劃線為 Xba I 酶切位點(diǎn)）。PCR 體系反應(yīng)條件為 94 ℃ 變性 5 min；94 ℃ 變性 50 s， 60 ℃ 退火 50 s，72 ℃ 延伸 60 s（30 個循環(huán)）；72 ℃ 10 min。將 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物回收純化并連接至 pGEM-T 載體，轉(zhuǎn)化 E. coli DH5α 感受態(tài)宿主菌，通過藍(lán)白斑篩選獲得重組單克隆。提取純化質(zhì)粒，酶切鑒定陽性克隆，將該重組質(zhì)粒命名為 pGEM-3'UTR，測序鑒定。

1.2.2 重組質(zhì)粒的構(gòu)建和鑒定 將 pGL3-Basic 質(zhì)粒通過 Hind III 和 Xba I 雙酶切獲得熒光素酶報告基因的 DNA 序列，并連接至 pcDNA3.1 載體多克隆位點(diǎn)，獲得重組質(zhì)粒 pc-luc。將上述獲得的測序正確的 CLA-1 mRNA 3'UTR 片段克隆至 pc-luc 質(zhì)粒中熒光素酶報告基因的下游 Xba I 位點(diǎn)處，經(jīng)插入方向鑒定正確后最終獲得重組質(zhì)粒 pc-luc-3'UTR。與此同時，將該 CLA-1 mRNA 3'UTR 片段克隆至之前構(gòu)建的重組質(zhì)粒 pGL3-CLAp-luc[7]中熒光素酶報告基因的下游 Xba I 位點(diǎn)處，獲得同時克隆有 CLA-1 基因啟動子區(qū)（CLAp）和其 3'UTR 片段的重組熒光素酶報告質(zhì)粒 pGL3- CLAp-luc-3'UTR，轉(zhuǎn)染后獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株 CLAp-luc-3'UTR HepG2。該質(zhì)粒同時可檢測化合物對 CLA-1 啟動子活性或 3'UTR 相關(guān)的 mRNA 穩(wěn)定性的影響，因此后續(xù)模型的建立在該質(zhì)粒的基礎(chǔ)上進(jìn)行。

1.2.3 細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染 HepG2 細(xì)胞培養(yǎng)于含 10% 胎牛血清、1 mmol/L 丙酮酸鈉和 1% 非必需氨基酸的 MEM 培養(yǎng)基中，于 37 ℃、5% CO2條件下培養(yǎng)。0.25% 胰酶加 0.02% 乙二胺四乙酸（EDTA）消化傳代。轉(zhuǎn)染用質(zhì)粒的提取方法按 PureYield? 中量質(zhì)粒提取試劑盒說明書進(jìn)行。將 1 × 105個HepG2 細(xì)胞接種于 30 mm 培養(yǎng)皿中，待細(xì)胞貼壁生長匯聚程度達(dá)到 80% 左右時，利用脂質(zhì)體 Lipofectamine?2000 將 pc-luc-3'UTR 瞬 時轉(zhuǎn)染至 HepG2 細(xì)胞，轉(zhuǎn)染 6 h 后更換培養(yǎng)液，24 h 后對熒光素酶活性進(jìn)行檢測，以確定最優(yōu)轉(zhuǎn)染效率。

1.2.4 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的構(gòu)建 將瞬時轉(zhuǎn)染 pGL3-CLAp-luc-3'UTR 質(zhì)粒的細(xì)胞以 5 × 103個細(xì)胞/孔接種于 96 孔板，于 37 ℃、5% CO2條件下進(jìn)行培養(yǎng)，以含 700 μg/ml G418 的 MEM 選擇培養(yǎng)液篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株，每 3 天更換培養(yǎng)液。 2 周后，選擇存活的細(xì)胞集落進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，并測定熒光素酶的活性，將活性較高的細(xì)胞集落以 1∶2 的比例進(jìn)行分級稀釋，篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的單克隆細(xì)胞株，傳代并進(jìn)行觀察和熒光素酶活性測定，最終獲得呈現(xiàn)正常細(xì)胞周期、能夠穩(wěn)定傳代 20 代以上的高表達(dá)熒光素酶活性的細(xì)胞株，命名為 CLAp-luc- 3'UTR HepG2。

1.2.5 實(shí)時熒光定量 PCR 待測化合物作用于 HepG2 細(xì)胞后，提取細(xì)胞的總RNA，采用試劑盒 SuperScript III First-Strand 合成 cDNA，采用 2 × TaqMan?gene expression master mix 進(jìn)行熒光定量 PCR 反應(yīng)，利用軟件分析并計算 Ct 值。以 GAPDH 為內(nèi)參，采用相對 Ct 的方法對熒光素酶基因的轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行定量。

1.2.6 基因 mRNA 半衰期測定 待測化合物作用細(xì)胞 10 h 后在培養(yǎng)基中分別加入 5 μg/ml 放線菌素 D 以終止轉(zhuǎn)錄。加入放線菌素 D 后的 0、30、60、90 min 分別提取細(xì)胞總 RNA，進(jìn)行定量 分析。待測基因 mRNA 水平與時間的相關(guān)性，其斜率為降解常數(shù) kd，由此計算待測基因 mRNA 的半衰期（t1/2= 0.693/kd）。

2 結(jié)果

2.1 CLA-1 基因 mRNA 3'UTR 序列的獲得

由于 CLA-1 基因 3'UTR 位于一個外顯子中，因此我們以人基因組 DNA 為模板，PCR 擴(kuò)增得到 CLA-1 基因 mRNA 3'UTR 序列，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測，顯示獲得預(yù)期大小的 DNA 片段（圖 1A）。將該 PCR 產(chǎn)物克隆至 pGEM-T 載體中，并對該插入片段進(jìn)行序列測定，結(jié)果表明 該片段與 GenBank 中報道的序列一致，符合預(yù)期設(shè)計。

圖1 CLA-1 基因 3'UTR 序列的 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物（A）和 pc-luc-3'UTR（B）、pc-luc-CURE（C）酶切鑒定結(jié)果 Figure 1 PCR product of human CLA-1 gene mRNA 3'UTR (A) and restriction enzymatic analysis of recombinant plasmid pc-luc-3'UTR (B) and pc-luc-CURE (C)

2.2 報告基因重組質(zhì)粒 pc-luc-3'UTR 的構(gòu)建

對構(gòu)建的重組質(zhì)粒 pc-luc-3'UTR 進(jìn)行酶切鑒定，結(jié)果顯示 CLA-1 基因 mRNA 3'UTR 序列以正確的方向插入到 pc-luc 中熒光素酶報告基因的下游 Xba I 位點(diǎn)處（圖 1B），構(gòu)建示意圖見圖 2A。其中，不含 3'UTR 的質(zhì)粒 pc-luc 作為對照質(zhì)粒。另外，為了驗(yàn)證 CLA-1 基因 mRNA 3'UTR 的作 用，根據(jù)文獻(xiàn)[8]報道人工合成了一段已知的保守的 CURE（CU-rich element）序列，構(gòu)建了 3' 端含有 CURE 的熒光素酶報告質(zhì)粒 pc-luc-CURE，酶切鑒定結(jié)果如圖 1C 所示。上述重組質(zhì)粒均以 pcDNA3.1 質(zhì)粒自身強(qiáng)啟動子 pCMV 為啟動子。

2.3 CLA-1 基因 3'UTR 對 mRNA 穩(wěn)定性的影響

將含有 CLA-1 基因 mRNA 3'UTR 序列的重組質(zhì)粒 pc-luc-3'UTR 轉(zhuǎn)染HepG2 細(xì)胞后檢測熒光素酶活性，結(jié)果顯示，與對照質(zhì)粒 pc-luc 相比，pc-luc-3'UTR 轉(zhuǎn)染細(xì)胞的熒光素酶活性顯著降低，而 pc-luc-CURE 則未見明顯變化（圖 2B）。此外，我們利用實(shí)時熒光定量 RT-PCR 的方法檢測了分別轉(zhuǎn)染pc-luc、pc-luc-3'UTR 和 pc-luc-CURE 后 HepG2 細(xì)胞的熒光素酶 mRNA 水平，結(jié)果與熒光素酶活性結(jié)果一致（圖 2C）。進(jìn)而對 pc-luc-3'UTR 轉(zhuǎn)染 HepG2 細(xì)胞的熒光素酶的半衰期進(jìn)行了檢測，結(jié)果顯示 CLA-1 3'UTR 的存在顯著降低了熒光素酶 mRNA 的穩(wěn)定性，半衰期由 81.5 min 縮短至 44.4 min（圖 2D）。綜上結(jié)果表明，CLA-1 基因 3'UTR 對熒光素酶活性及其 mRNA 水平和穩(wěn)定性有顯著影響。

2.4 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株 CLAp-luc-3'UTR HepG2 的建立和應(yīng)用

由于自身啟動子可更好地反映細(xì)胞中基因的表達(dá)調(diào)控狀況，于是我們將CLA-1 基因 3'UTR 克隆至先前構(gòu)建的帶有 CLA-1 啟動子的熒光素酶報告質(zhì)粒 pGL3-CLAp-luc[6]中熒光素酶報告基因下游，構(gòu)建重組報告質(zhì)粒 pGL3-CLAp-luc-3'UTR，并建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 pGL3-CLAp-luc-3'UTR 的 HepG2 細(xì)胞，以 CLAp-luc HepG2 細(xì)胞作為對照。重組質(zhì)粒構(gòu)建示意圖見圖 3A、3B。

進(jìn)而采用熒光素酶報告基因和實(shí)時熒光定量 RT-PCR 的方法對構(gòu)建的 CLAp-luc-3'UTR 細(xì)胞和 CLAp-luc 對照細(xì)胞的熒光素酶活性、報告基因 mRNA 水平及半衰期進(jìn)行了檢測，結(jié)果如圖 3 所示。CLA-1 基因 3'UTR 的存在可顯著降低模型熒光素酶活性及其 mRNA 水平，同時熒光素酶報告基因的半衰期也從 16.2 h 縮短至 2.2 h，與前期構(gòu)建的 pc-luc-3'UTR 模型結(jié)果基本一致。上述結(jié)果確證了 CLA-1 基因 3'UTR 的序列中存在對其 mRNA 穩(wěn)定性有顯著影響的順式元件，使其 mRNA的降解率大大提高。綜上結(jié)果，本文證實(shí)了 CLA-1 基因 3'UTR 的存在對其 mRNA 穩(wěn)定性的影響。

圖2 CLA-1 基因 3'UTR 對 mRNA 穩(wěn)定性的影響（A：重組質(zhì)粒 pc-luc-3'UTR 構(gòu)建示意圖；B：CLA-1 基因 mRNA 3'UTR 降低熒光素酶的活性；C：CLA-1 基因 mRNA 3'UTR 降低熒光素酶基因 mRNA 的水平；D：CLA-1 基因 mRNA 3'UTR 降低熒光素酶基因 mRNA 的穩(wěn)定性） Figure 2 The effect of CLA-1 gene 3'UTR on luciferase mRNA stability (A: Illustration of recombinant plasmid pc-luc-3'UTR construction； B: The effect of CLA-1 gene 3'UTR on luciferase activity； C: The effect of CLA-1 gene 3'UTR on luciferase mRNA level； D: The effect of CLA-1 gene 3'UTR on luciferase mRNA stability)

3 討論

心血管疾病是全球范圍造成死亡的首要原因，動脈粥樣硬化以富含脂肪的斑塊在大動脈壁聚積為主要特征。盡管他汀類藥物能減少約 30% 的冠狀動脈事件[9]，但每年仍有 9% 的患者受到殘余心血管病變風(fēng)險的困擾[10]，因此亟需新作用機(jī)制調(diào)血脂藥物的研發(fā)。近年來，SR-BI 的抗動脈粥樣硬化作用成為研究熱點(diǎn)，相關(guān)研究逐步揭示肝上 HDL 受體介導(dǎo)的 HDL-C 的選擇性攝取將外周組織中的膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)到肝臟進(jìn)行處置代謝，是膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制的終末步驟，也是最重要的步驟之一，通過上調(diào)其表達(dá)可促進(jìn) HDL-C 直接轉(zhuǎn)運(yùn)至肝臟并最終被排出，加速膽固醇的逆轉(zhuǎn)運(yùn)。因此，SR-BI 被認(rèn)為是一個潛在的預(yù)防和（或）逆轉(zhuǎn)動脈粥樣硬化的新的治療靶點(diǎn)[1,11]。

SR-BI 在包括肝臟在內(nèi)的多種組織中表達(dá)，在巨噬細(xì)胞上也有表達(dá)，但在細(xì)胞膽固醇外排中的作用尚存在爭議。SR-BI 在肝臟中的基因表達(dá)調(diào)控在脂代謝過程中尤為重要，受到飲食、激素、膽固醇代謝及藥物等的調(diào)節(jié)。目前針對 SR-BI 基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制的研究主要集中在基因轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控，其中 SREBP、Sp1、LRH-1 等轉(zhuǎn)錄因子和 PPARγ、PXR、FXR、LXR 等核受體在調(diào)節(jié) SR-BI 表達(dá)的過程中發(fā)揮了重要的作用[12]?；诖耍覀冊谥肮ぷ髦袠?gòu)建了 SR-BI/CLA-1 轉(zhuǎn)錄上調(diào)劑篩選模型，經(jīng)篩選獲得了以 TSA 為代表的多個活性化合物，并進(jìn)一步在細(xì)胞水平上對其 CLA-1 表達(dá)上調(diào)活性及其作用機(jī)制進(jìn)行了研究[13-14]。針對 SR-BI/ CLA-1 基因轉(zhuǎn)錄后水平的研究尚未見報道。

圖3 CLA-1 基因 3'UTR 對 mRNA 穩(wěn)定性的影響（A：對照質(zhì)粒 pGL3-CLAp-luc 構(gòu)建示意圖；B：重組質(zhì)粒 pGL3-CLAp-luc-3'UTR 構(gòu)建示意圖；C：CLA-1 基因 mRNA 3'UTR 降低熒光素酶的活性；D：CLA-1 基因 mRNA 3'UTR 降低熒光素酶基因 mRNA 的水平；E：CLA-1 基因 mRNA 3'UTR 降低熒光素酶基因 mRNA 的穩(wěn)定性） Figure 3 The effect of CLA-1 gene 3'UTR on luciferase mRNA stability (A: Illustration of control plasmid pc-luc construction； B: Illustration of recombinant plasmid pGL3-CLAp-luc-3'UTR construction； C: The effect of CLA-1 gene 3'UTR on luciferase activity； D: The effect of CLA-1 gene 3'UTR on luciferase mRNA level； E: The effect of CLA-1 gene 3'UTR on luciferase mRNA stability)

與基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控相比，目前人們對于轉(zhuǎn)錄后調(diào)控細(xì)節(jié)還所知甚少，但這方面的研究正日益受到重視。人 LDL 受體（LDLR）的 3'UTR 對其 mRNA 穩(wěn)定性起重要作用，研究發(fā)現(xiàn)天然產(chǎn)物小檗堿能夠通過作用于人 LDLR 的 3'UTR 從而增加 LDLR 基因 mRNA 的穩(wěn)定性，以不同于他汀類藥物的作用機(jī)制提高 LDLR 的表達(dá)水平，降低血漿中 LDL-C 水平，有可能發(fā)展為新型降血脂藥物，并可與他汀類藥物聯(lián)用[6]。另外，Benjamin 等[15-16]利用綠色熒光蛋白作為報告基因構(gòu)建了克隆有 IL-3、TNFα 基因 3'UTR 的重組報告質(zhì)粒，以此為基礎(chǔ)獲得可增加這些細(xì)胞因子 mRNA 穩(wěn)定性的表達(dá)調(diào)控劑。已報道的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控相關(guān)的順式作用元件包括 ARE（AU-rich element）、CURE、GRE（GU-rich element）、PRE（pyrimidine-rich element）等。RNA 結(jié)合蛋白通過識別特定的 3'UTR 順式作用元件來決定 mRNA 的半衰期和降解率，參與 mRNA 的穩(wěn)定性、基因表達(dá)的定位以及翻譯效率等生理過程的調(diào)控[5]。此外，近年來研究發(fā)現(xiàn) microRNA（miRNA）可通過與靶基因 mRNA 的 3'UTR 上的特定區(qū)域通過完全或不完全堿基互補(bǔ)結(jié)合，介導(dǎo) mRNA 的降解或翻譯抑制，從而在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控靶基因的表達(dá)，成為轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控研究的新熱點(diǎn)。最新報道發(fā)現(xiàn) miR-33 可通過直接靶向 ABCA1/G1 基因 3'UTR 區(qū)，在轉(zhuǎn)錄后水平抑制 ABCA1 和 ABCG1 基因的表達(dá)，從而調(diào)控了細(xì)胞內(nèi)膽固醇代謝平衡[17-19]。因此，轉(zhuǎn)錄后調(diào)控是除轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控外的另一個重要的基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制，已成為藥物發(fā)現(xiàn)的重要靶點(diǎn)。

人 HDL 受體基因 CLA-1 轉(zhuǎn)錄并加工成熟的 mRNA 全長 2759 bp，其3'UTR 序列長 1234 bp，由第 13 個外顯子編碼。不同種屬的 SR-BI 基因 3'UTR 區(qū)域中存在高度保守序列，提示其具有轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)機(jī)制。本研究結(jié)果顯示，將 CLA-1 基因 3'UTR 構(gòu)建至熒光素酶報告基因 3' 端，可明顯降低熒光素酶活性及基因 mRNA 的穩(wěn)定性（圖 3），說明除轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控外，SR-BI/CLA-1 基因 mRNA 3'UTR 介導(dǎo)的 mRNA 的穩(wěn)定性相關(guān)的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控也是其基因表達(dá)水平的另一個重要調(diào)控機(jī)制，可以作為上調(diào) CLA-1 表達(dá)的一個新靶點(diǎn)，為后續(xù)針對 SR-BI mRNA 穩(wěn)定性為靶點(diǎn)的模型建立提供了依據(jù)。

以本研究獲得的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞 CLAp-luc- 3'UTR HepG2 為基礎(chǔ)建立篩選模型，不僅可以獲得上調(diào) CLA-1 啟動子活性的化合物，同時還可獲得增加 CLA-1 基因 3'UTR 介導(dǎo)的 mRNA 的穩(wěn)定性的化合物，這為 CLA-1 表達(dá)上調(diào)劑的發(fā)現(xiàn)提供了更為有效可靠的基礎(chǔ)。另外也可用于參與調(diào)控 SR-BI/CLA-1 表達(dá)的 miRNAs 篩選和作用機(jī)制研究。這些活性化合物或 miRNAs 的發(fā)現(xiàn)，一方面可以大大豐富 CLA-1 基因表達(dá)上調(diào)劑的候選物，并有可能和 CLA-1 基因轉(zhuǎn)錄上調(diào)劑聯(lián)合作用，更好地上調(diào) CLA-1 基因的表達(dá)，為最終發(fā)現(xiàn)高效、低毒的基于 HDL 的抗動脈粥樣硬化藥物奠定基礎(chǔ)；另一方面，這些活性化合物或 miRNAs 還將有助于深入探討 CLA-1/SR-BI 基因 3'UTR 的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控機(jī)制，對于探索開發(fā)新型基于 HDL 抗動脈粥樣硬化藥物具有重要的科學(xué)意義和應(yīng)用價值。

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