梁爽 王樹峰

大前庭水管綜合征患者的SLC26A4基因診斷

梁爽1王樹峰1

目的分析大前庭水管綜合征患者的影像學(xué)及基因檢測結(jié)果在診斷中的意義。方法 分別對(duì)兩個(gè)育有非綜合征型聾患者家庭中的各3位成員（患兒及其父母）進(jìn)行基因及影像學(xué)檢查。采集受檢者外周血并提取DNA，采用芯片試劑盒檢測SLC26A4基因IVS7-2位點(diǎn)的A＞G和2168位點(diǎn)的A＞G突變情況，并以序列分析方法進(jìn)一步分析。2例耳聾患者均行顳骨CT檢查。結(jié)果 ①家庭1患兒（男，8個(gè)月）和家庭2患兒（女，3歲10個(gè)月）均表現(xiàn)為波動(dòng)性聽力下降，顳骨CT檢查均顯示雙側(cè)前庭水管擴(kuò)大。②家庭1患兒為SLC26A4基因2168A＞G和1229 C＞T復(fù)合雜合突變，其父親攜帶SLC26A4基因2168位點(diǎn)的A＞G雜合突變，其母親攜帶SLC26 A4 1229位點(diǎn)的C＞T雜合突變；家庭2患兒為IVS7-2 A＞G純合突變，其父母均攜帶IVS7-2 A＞G雜合突變。結(jié)論 大前庭水管綜合征患者的SLC26 A4基因檢測結(jié)果與顳骨影像學(xué)檢查結(jié)果相吻合；SLC26A4基因診斷能夠?qū)哂蠸LC26A4基因熱點(diǎn)突變的大前庭水管綜合征患者做出明確診斷。

大前庭水管綜合征； SLC26A4（PDS）基因； 影像學(xué)

大前庭水管綜合征為SLC26 A4基因突變導(dǎo)致的常染色體隱性遺傳性疾病，通過基因檢測，可以早期發(fā)現(xiàn)及有效預(yù)防和阻斷該病患兒的出生。中國聾兒康復(fù)研究中心遺傳性聾基因診斷實(shí)驗(yàn)室對(duì)兩例大前庭水管綜合征患者及其父母的SLC26A4基因進(jìn)行了檢測，現(xiàn)將初步結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 家庭1：患兒男，8個(gè)月，因發(fā)現(xiàn)雙耳聽力差2月余就診。家長于患兒5個(gè)多月時(shí)發(fā)現(xiàn)其對(duì)大聲無反應(yīng)，有頭部磕碰史，足月順產(chǎn)，出生時(shí)無窒息、缺氧，無新生兒高膽紅素血癥病史，無耳毒性藥物應(yīng)用史。?？茩z查：雙側(cè)耳廓無畸形，外耳道及鼓膜正常。主客觀聽力檢測提示雙耳極重度感音神經(jīng)性聾。父母聽力正常，非近親結(jié)婚，雙方家族內(nèi)均無其他耳聾患者。

家庭2：患兒女，3歲10個(gè)月，家長于患兒3歲半時(shí)發(fā)現(xiàn)其說話口齒不清就診，1歲7個(gè)月時(shí)有頭部外傷史，足月剖腹產(chǎn)，出生時(shí)無缺氧窒息、無新生兒高膽紅素血癥病史，否認(rèn)手術(shù)史，耳毒性藥物應(yīng)用史不詳。?？茩z查：雙側(cè)耳廓無畸形，外耳道及鼓膜正常。主客觀聽力檢測提示雙耳分別為中、重度感音神經(jīng)性聾。父母聽力正常，非近親結(jié)婚，雙方家族內(nèi)均無其他耳聾患者。

1.2 研究方法

1.2.1 DNA提取方法 分別采集兩個(gè)家庭中的患兒及其父母的外周血3 ml，應(yīng)用試劑盒提取DNA（北京天根生化科技有限公司），提取步驟參照試劑盒提供的使用說明進(jìn)行。取2μl DNA用核酸定量儀進(jìn)行濃度和純度檢測，其余于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 SLC26A4基因檢測方法 應(yīng)用遺傳性聾基因芯片檢測試劑盒（博奧生物有限公司）進(jìn)行SLC26A4基因IVS7-2位點(diǎn)的A＞G和外顯子19上2168位點(diǎn)的A＞G突變的檢測。該試劑盒以基因組DNA為模板，采用帶有Tag標(biāo)簽序列的基因位點(diǎn)特異性引物對(duì)相關(guān)突變位點(diǎn)所在的基因片段進(jìn)行擴(kuò)增和熒光標(biāo)記，然后與能夠識(shí)別相應(yīng)標(biāo)簽序列的基因芯片進(jìn)行雜交，最后通過軟件對(duì)芯片進(jìn)行掃描和數(shù)據(jù)分析就可以得到所檢測的9個(gè)突變位點(diǎn)的檢測結(jié)果?；蛐酒捎梦⒘奎c(diǎn)樣技術(shù)，將檢測突變位點(diǎn)的通用探針與各種對(duì)照探針固定在經(jīng)過化學(xué)修飾的基片上，檢測探針各重復(fù)5個(gè)點(diǎn)，對(duì)照探針各重復(fù)5、10或15個(gè)點(diǎn)，形成11行×15列的微陣列，每張芯片上有4個(gè)同樣的微陣列，每個(gè)微陣列可以檢測一份樣品［1］。

1.2.3 SLC26A4基因序列分析 由于家庭2受檢者中有一個(gè)突變位點(diǎn)不在芯片檢測范圍內(nèi)，因此對(duì)家庭2受檢者的SLC26A4基因外顯子7+8進(jìn)行全序列分析，同時(shí)對(duì)其更進(jìn)一步分析了外顯子10的序列。

1.3 顳骨CT檢查 使用16排螺旋CT對(duì)兩個(gè)家庭中的2例患兒進(jìn)行顳骨掃描。CT掃描條件：層厚／層距（mm）：0.6／0.6，窗寬4 000 HU，窗位700 HU，掃描范圍以聽眶上線為基線向上連續(xù)掃描。前庭水管擴(kuò)大判斷標(biāo)準(zhǔn)：前庭水管或內(nèi)淋巴管（內(nèi)淋巴囊）外口與總腳連線的中點(diǎn)直徑大于1.5 mm［2～4］。

2 結(jié)果

2.1 家庭1成員的DNA樣本基因芯片試劑盒檢測及序列分析結(jié)果 患兒及其父親存在2168位點(diǎn)的A＞G雜合突變，母親SLC26A4 IVS7-2 A＞G及2168 A＞G 2個(gè)位點(diǎn)均為野生型。測序分析結(jié)果表明該患兒為SLC26A4 2168A＞G（位于外顯子19上）與SLC26A4 1229 C＞T復(fù)合突變（位于外顯子10上）（圖1、2），其父親為SLC26 A4 2168 A＞G雜合突變攜帶者（圖3），母親為1229 C＞T雜合突變攜帶者（圖4）?；純盒酗D骨CT檢查，結(jié)果為雙側(cè)前庭水管明顯擴(kuò)大，其外口和總腳間中點(diǎn)直徑＞1.8 mm，前庭水管與半規(guī)管總腳相通（圖5）。

2.2 家庭2成員的DNA樣本基因芯片試劑盒檢測及序列分析結(jié)果 患兒具有IVS7-2 A＞G純合突變（圖6），其父母都攜帶IVS7-2 A＞G雜合突變（圖7、8）?；純盒酗D骨CT檢查，結(jié)果為雙側(cè)前庭水管均明顯擴(kuò)大，其外口和總腳間中點(diǎn)直徑＞2.0 mm，前庭水管與半規(guī)管總腳相通（圖9），證明患者為遺傳性大前庭水管綜合征。

圖1 家庭1患兒SLC26A4 1229 C＞T突變

圖2 家庭1患兒SLC26A4 2168A＞G突變

圖3 家庭1患兒父親SLC26A4 2168A＞G突變

圖4 家庭1患兒母親SLC26A4 1229 C＞T突變

圖5 家庭1患兒顳骨CT顯示雙側(cè)前庭水管擴(kuò)大

圖6 家庭2患兒SLC26A4 IVS7-2 A＞G純合突變

圖7 家庭2患兒父親SLC26A4 IVS7-2 A＞G突變

圖8 家庭2患兒母親SLC26A4 IVS7-2 A＞G突變

圖9 家庭2患兒顳骨CT顯示雙側(cè)前庭水管擴(kuò)大

3 討論

由于大前庭水管綜合征患者前庭水管擴(kuò)大，導(dǎo)致顱腔內(nèi)的壓力很容易傳導(dǎo)到前庭，輕微的外傷或顱內(nèi)壓力的增高就會(huì)導(dǎo)致前庭環(huán)境劇烈的變化，最終導(dǎo)致耳聾。因此，此類患者出生時(shí)多為正常聽力或輕中度聽力損失，生長過程中在頭部外傷、劇烈運(yùn)動(dòng)、倒立、感冒、甚至用力咳嗽或擤鼻等誘因下，其聽力呈進(jìn)行性或波動(dòng)性下降，一般可以發(fā)展至極重度聽力損失，累及所有頻率。如果對(duì)此類患者進(jìn)行早期診斷、早期干預(yù)及早期預(yù)防，通過正確的指導(dǎo)和嚴(yán)格的活動(dòng)限制措施來保存患者較好的殘余聽力，并通過聽力康復(fù)和語言訓(xùn)練，患者可以獲得良好的交流能力，融入正常的教育環(huán)境和社會(huì)。文中報(bào)告的家庭2中的患兒，出生時(shí)聽力正?；騼H為輕度聽力損失，通過了新生兒聽力篩查，由于其早期存在較好的殘余聽力，家長沒能及時(shí)發(fā)現(xiàn)，直到3歲半時(shí)家長發(fā)現(xiàn)其發(fā)音口齒不清才就診，錯(cuò)過了語言發(fā)育的最佳時(shí)期。因此，針對(duì)大前庭水管綜合征患者波動(dòng)性、漸進(jìn)性聽力下降并可以進(jìn)行挽救性治療的特點(diǎn)，有必要建立一套切實(shí)可行的檢查方法以便早期發(fā)現(xiàn)此病。

大前庭水管綜合征可以通過高分辨顳骨CT診斷，檢測結(jié)果直觀，準(zhǔn)確，可以作為診斷該病的標(biāo)準(zhǔn)。但是應(yīng)用CT診斷大前庭水管綜合征仍然存在一定的局限性：首先，需要具有高分辨的CT設(shè)備和檢查時(shí)設(shè)置正確的條件、參數(shù)，國內(nèi)仍有部分醫(yī)院并不具備診斷大前庭水管的影像學(xué)條件以及相應(yīng)的知識(shí)和技術(shù)；其次，由于該病患兒的早期輕度聽力損失有可能被家長忽略，從而失去了早期接受顳骨CT檢查以明確診斷的機(jī)會(huì)。

多項(xiàng)研究表明大前庭水管綜合征的發(fā)病與SLC26A4基因突變有直接的因果關(guān)系［5～7］，是SLC26A4基因突變導(dǎo)致的常染色體隱性遺傳性疾病。SLC26A4基因位于人類常染色體7q31，含21個(gè)外顯子，編碼含有780個(gè)氨基酸的pendrin蛋白，該蛋白為包括12個(gè)跨膜區(qū)的疏水性跨膜蛋白，屬于離子轉(zhuǎn)運(yùn)體家族，參與調(diào)節(jié)耳蝸內(nèi)淋巴液的離子平衡。在對(duì)大前庭水管綜合征與SLC26 A4基因之間關(guān)系的研究中發(fā)現(xiàn)［8］，95.4%的大前庭水管患者存在該基因的突變，表現(xiàn)為純合突變、復(fù)合突變或雜合突變。提示該類患者存在SLC26A4的高頻突變及熱點(diǎn)突變。從文中結(jié)果看，2例患兒顳骨CT均確診為大前庭水管綜合征，其基因檢測結(jié)果分別為SLC26A4基因純合突變和復(fù)合突變，可見基因檢測與影像學(xué)診斷結(jié)果一致。與影像學(xué)檢查方法相比，基因檢測僅需采集患者2 ml外周靜脈血即可進(jìn)行檢測，不需使用麻醉藥物催眠，患兒不接觸射線。如果新生兒聽力篩查項(xiàng)目中包括基因檢測，可以使該病患兒被早期發(fā)現(xiàn)，從而得到較早的干預(yù)和治療。但是，基因檢測也存在一些不足，如：分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)儀器與耗材成本昂貴；SLC26 A4基因很長（含21個(gè)外顯子），特別是對(duì)于突變位點(diǎn)不在熱點(diǎn)突變區(qū)域的患者，檢測周期很長，需要花費(fèi)較多的人力物力。

基因檢測與顳骨CT均能夠?qū)Υ笄巴ニ芫C合征患者做出診斷，兩種方法結(jié)果能夠吻合，但兩種方法在對(duì)大前庭水管綜合征患者的診斷中各有利弊，應(yīng)相互結(jié)合，相互驗(yàn)證。可以在新生兒聽力篩查中同時(shí)進(jìn)行SLC26 A4的高發(fā)突變位點(diǎn)篩查，以降低新生兒聽力篩查的假陰性率；對(duì)于已經(jīng)確診為大前庭水管綜合征的患者，可以通過基因檢測從分子水平上尋找病因，從而為避免遺傳性聾發(fā)生提供依據(jù)。

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（2012-10-11收稿）

（本文編輯 周濤）

10.3969／j.issn.1006-7299.2013.04.025

時(shí)間：2013-3-11 10：03

R764.5

A

1006-7299（2013）04-0409-03

1 中國聾兒康復(fù)研究中心（北京 100029）

王樹峰（Emai：drwang＠china.com）

網(wǎng)絡(luò)出版地址：http：／／www.cnki.net／kcms／detail／42.1391.R.20130311.1003.011.html