蔡 芳 周雪梅 白音夫

(1.內(nèi)蒙古自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020;2.內(nèi)蒙古自治區(qū)食品藥品檢驗所，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020)

蓍草(Achillea sibirica Ledeb)別名一枝蒿、千鋸草、鋸草、蜈蚣草等。蓍草含多種揮發(fā)性成，主要成分β－蒎烯、檸檬烯。蓍草蒙名圖勒格其－烏布斯，為蒙醫(yī)藥特色藥材，性味，苦、辛、性涼、銳。具有止痛消腫、活血祛瘀作用，可用于關(guān)節(jié)腫脹、癤癰腫痛、風(fēng)濕痹痛、肢體麻木、跌打損傷、腸炎、頭痛等癥[1－3]。本文采用HPLC法測定蓍草中綠原酸成分，旨在建立藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器、試劑與藥材

1.1 高效液相色譜儀1100型(美國安捷倫公司)，NC－2000型色譜工作站(大連中北科學(xué)技術(shù)公司)，IN－180型柱溫箱(上海英泰科技研究所)，SH6150D超生波清洗器(上海昆山)，電子天平(梅特勒)。

1.2 試劑與藥材:綠原酸由中國藥品生物制品檢定所提供;乙腈、甲醇為色譜純，其余試劑為分析純。研究用蒙古山蘿卜由呼和浩特藥材站提供，批號200806;測定樣品于2007－2011年9月中旬采集內(nèi)蒙不同山區(qū)，采集的樣品及時干燥，避光保存。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件:C18色譜柱(4.6×20mm，5μm)由中國科學(xué)院蘭州化學(xué)物理研究所色譜中心提供;流動相:乙腈－0.3%磷酸溶液(12:88);流速:1mL·min－1;溫度:30℃;檢測波長:328nm;進樣量10μL，在此條件下，樣品中綠原酸與其它組分有較好的分離，對照品與樣品色譜圖見圖1。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線測定:精密稱取干燥至恒重的綠原酸對照品適量，置棕色量瓶中，甲醇溶解，配制成1mL含0.028mg綠原酸溶液，作為對照品溶液。分別精密量取綠原酸對照品溶液 0.25、0.5、1、2、3、4、5mL，置于10mL 量瓶內(nèi)，用甲醇稀釋至刻度，按上述色譜條件進行測定。結(jié)果，綠原酸在0.7～14.0μg·mL－1濃度范圍內(nèi)以峰面積(A)與對照品濃度(C)進行回歸，其線性關(guān)系良好?；貧w方程為:A=5452+7008C，r=0.999。

2.3 供試品溶液制備:精密稱取蓍草藥材0.1g，，置50mL具塞磨口瓶內(nèi)，加甲醇10mL，超聲處理30min，放冷，濾過，精密取續(xù)濾液1mL，轉(zhuǎn)移至10mL棕色量瓶內(nèi)，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.4 方法的專屬性:在擬定的色譜條件下，分別取對照品溶液和供試品溶液進樣測定，得到特征峰，與雜質(zhì)分離良好，無干擾。見圖1

圖1 樣品HPLC圖譜

2.5 精密度試驗:精密量取對照品溶液，連續(xù)測量6次，測得對照品峰面積值，以峰面積計算綠原酸RSD為0.41%，表明精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗:取同一供試品溶液，分別于 0、1、2、4、8、12h進樣，測得供試品綠原酸峰面積值，以峰面積值計算綠原酸RSD為0.80%。結(jié)果表明，供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重現(xiàn)性試驗:精密稱取樣品6份，每份約0.1g，按“供試品溶液制備”項下操作，進樣，測定，并計算質(zhì)量分?jǐn)?shù)，樣品中綠原酸含量為3.1%，RSD為1.10%。

2.8 回收率試驗:采用加樣回收法。取已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)的同批樣品6份，每份約0.1g，置50mL具塞磨口瓶內(nèi)，加甲醇10mL，超聲處理30min，放冷，濾過，精密取續(xù)濾液1mL，轉(zhuǎn)移至10mL棕色量瓶內(nèi)，加入標(biāo)準(zhǔn)品溶液1mL(0.028mg)，加甲醇至刻度，搖勻，即得。測定結(jié)果，平均回收率=99.85%，RSD=2.36%。

表1 回收率試驗結(jié)果

2.9 樣品測定:精密稱取不同產(chǎn)地蓍草藥材，按“供試品溶液制備”項下操作，測定并計算含量。結(jié)果見表2

表2 樣品測定結(jié)果n=3

3 討論

蒙藥蓍草成分已有報道，其綠原酸(chlorogenic acid)含量測定未見報道。綠原酸具有多種活性，是藥品、保健品原料。藥材以綠原酸作為含量標(biāo)準(zhǔn)可基本確定藥材品質(zhì)和療效。

本文建立HPLC法測定藥材中綠原酸含量。色譜條件采用流動相乙腈－磷酸溶液、磷酸二氫鈉緩沖液(PH2.7)－甲醇(70:30)，均可獲得分離良好的色譜峰，由于后者含有無機鹽類，不利儀器使用，故采用前者流動相。

采用HPLC法建立蒙藥蓍草綠原酸含量，該方法樣品預(yù)處理簡單，回收率穩(wěn)定，重現(xiàn)性好，可作為該藥材含量測定和質(zhì)量評價方法，同時為建立蒙藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

[1]內(nèi)蒙古植物藥志編輯委員會.內(nèi)蒙古植物藥志[S].內(nèi)蒙古人民出版社1989，158－160

[2]內(nèi)蒙古衛(wèi)生廳.內(nèi)蒙古中草藥[M].內(nèi)蒙古人民出版社，1972，158－159

[3]白音夫，齊明玉，李德良，等.蓍草不同部位鎮(zhèn)痛、抗炎、鎮(zhèn)靜、催眠作用研究[J].中國藥理通，2008，25(3):51