袁林徐又先*沈世強(qiáng)盧欣

1.柳州市人民醫(yī)院肝膽外科，*婦科，廣西 柳州545006；

2.武漢大學(xué)人民醫(yī)院普通外科， 湖北 武漢430030

聯(lián)合檢測(cè)血清E-鈣粘連蛋白和AFP在肝癌中的表達(dá)及術(shù)后復(fù)發(fā)的意義

袁林1徐又先1*沈世強(qiáng)2盧欣1

1.柳州市人民醫(yī)院肝膽外科，*婦科，廣西 柳州545006；

2.武漢大學(xué)人民醫(yī)院普通外科， 湖北 武漢430030

背景與目的：E-鈣粘連蛋白(E-cadherin，EC)是維持上皮細(xì)胞的極性及細(xì)胞間連接的糖蛋白，被認(rèn)為與肝細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。本研究聯(lián)合檢測(cè)肝細(xì)胞癌患者手術(shù)前后血清可溶性E-鈣粘連蛋白(soluble E-cadherin，sEC)和甲胎蛋白(alpha-fetoprotein，AFP)的表達(dá)，探討其臨床意義及在復(fù)發(fā)中的價(jià)值。方法：采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)和放射免疫法檢測(cè)(RIA) 檢測(cè)105例肝細(xì)胞癌患者手術(shù)前后及70例健康人sEC和AFP的水平，分析術(shù)前sEC和AFP的水平與臨床病理特征的關(guān)系，并對(duì)手術(shù)后復(fù)發(fā)的47例肝癌患者的sEC和AFP水平進(jìn)行分析。結(jié)果：肝細(xì)胞癌患者術(shù)前sEC和AFP水平顯著高于健康人，手術(shù)1周后sEC和AFP水平較術(shù)前顯著下降。術(shù)前sEC水平與肝細(xì)胞癌TNM分期密切相關(guān)(P＜0.01)，與腫瘤分級(jí)，有無(wú)門靜脈癌栓、有無(wú)包膜相關(guān)(P＜0.05)，與年齡、腫瘤大小無(wú)關(guān)(P＞0.05)。術(shù)前AFP水平與肝細(xì)胞癌TNM分期密切相關(guān)(P＜0.05)，與年齡、腫瘤大小、腫瘤分級(jí)、有無(wú)門靜脈癌栓、有無(wú)包膜無(wú)相關(guān)性(P＞0.05)。當(dāng)確診為肝癌復(fù)發(fā)時(shí)，sEC水平也明顯高于術(shù)后(P＜0.01)。結(jié)論：肝細(xì)胞癌術(shù)前sEC水平與臨床分期有關(guān)，可作為一種肝細(xì)胞癌預(yù)后和復(fù)發(fā)預(yù)測(cè)因子。聯(lián)合檢測(cè)sEC、AFP可以更好地預(yù)測(cè)肝癌的復(fù)發(fā)。

可溶性E-鈣粘連蛋白；甲胎蛋白；肝細(xì)胞癌；聯(lián)合檢測(cè)

［Key words］Soluble E-cadherin,; Alpha-fetoprotein; Hepatocellular carcinoma; United detection

原發(fā)性肝癌是常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤之一，其發(fā)病率居我國(guó)惡性腫瘤的第3位。早期診斷及預(yù)防術(shù)后復(fù)發(fā)是保障肝細(xì)胞癌治療效果的關(guān)鍵［1］。關(guān)于肝癌的早期診斷和復(fù)發(fā)研究中，某些生長(zhǎng)因子水平的變化是當(dāng)前研究的新熱點(diǎn)。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)，E-鈣粘連蛋白(E-cadherin，EC)的表達(dá)與肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本研究聯(lián)合測(cè)定肝癌患者血清可溶性E-鈣粘連蛋白(soluble E-cadherin，sEC)和甲胎蛋白(alpha-fetoprotein，AFP)水平，進(jìn)一步了解sEC和AFP對(duì)HCC早期診斷和復(fù)發(fā)監(jiān)測(cè)意義。

1 資料和方法

1.1 臨床資料

對(duì)象選自2007年9月—2009年12月在柳州市人民醫(yī)院行HCC根治性切除術(shù)患者105例，其中男性64例，女性41例，年齡27～70歲，中位年齡49.8歲。HCC診斷以UICC［2］為標(biāo)準(zhǔn)，所有研究對(duì)象均為初治，術(shù)前均未接受過(guò)任何藥物治療或放療。收集同期健康體檢者70例作為對(duì)照，其中男性41例，女性29例，年齡25～64歲，中位年齡48.1歲。健康體檢者血細(xì)胞計(jì)數(shù)、血脂、肝腎功能均在正常范圍。

1.2 血清樣本收集與處理

患者手術(shù)前與手術(shù)后第7～9天的外周血采集后立即放入4℃冰箱靜置20 min。4 ℃ 2 800×g離心15 min分離血清，離心機(jī)為北京醫(yī)用離心機(jī)LD-2A。將血清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，放入-80 ℃冰箱保存。檢測(cè)前取出血清樣品，冰上融化后，4 ℃ 8 377×g離心10 min，除去血清中的不溶物。AFP采用放射免疫法，sEC的血清水平采用ELISA方法檢測(cè)，AFP試劑購(gòu)自中國(guó)原子能科學(xué)院，ELISA試劑盒購(gòu)自美國(guó)R＆D公司。整個(gè)過(guò)程均由專人進(jìn)行盲法測(cè)定，操作按照儀器和試劑使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。AFP正常值為 0～20 ng/mL，以AFP≥100 ng/mL為陽(yáng)性，以sEC≥2 100 ng/mL為陽(yáng)性。

1.3 隨訪

手術(shù)患者術(shù)后定期隨訪，術(shù)后第1年每個(gè)月1次，第2年后每2個(gè)月1次，檢查內(nèi)容包括AFP、sEC、肝功能測(cè)定和影像學(xué)檢查(肝臟B超、CT、MRI或血管造影等)，當(dāng)AFP或sEC水平異常增高時(shí)，則隨訪改為每個(gè)月1次。復(fù)發(fā)確診的依據(jù)：血清AFP較手術(shù)后明顯升高，并結(jié)合肝臟B超或CT或MRI或血管造影等提示肝臟占位性病變或再次手術(shù)后病理證實(shí)。隨訪采用門診復(fù)查、電話及書(shū)信進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 隨訪結(jié)果

隨訪截止到2012年10月30日，隨訪時(shí)間為3～58個(gè)月，中位隨訪時(shí)間為25.2個(gè)月。其中有17例患者失訪。最后確診為HCC術(shù)后復(fù)發(fā)的患者47例，其中1次手術(shù)后復(fù)發(fā)36例，2次手術(shù)后復(fù)發(fā)8例，3次手術(shù)后復(fù)發(fā)3例。復(fù)發(fā)時(shí)，AFP陽(yáng)性(≥100 ng/mL)29例，AFP陰性(＜20 ng/mL)18例；復(fù)發(fā)腫瘤與原發(fā)灶位于一側(cè)半肝內(nèi)27例，位于對(duì)側(cè)半肝或全肝受累9例，位于同一肝段內(nèi)11例。復(fù)發(fā)腫瘤單個(gè)或多個(gè)結(jié)節(jié)相加直徑為1.3～4.5 cm，平均為2.8 cm；復(fù)發(fā)時(shí)間4～54個(gè)月，平均為10.6個(gè)月。

2.2 血清sEC、AFP在HCC患者術(shù)前、后及復(fù)發(fā)與健康人中的表達(dá)比較

HCC患者術(shù)前sEC和AFP明顯高于術(shù)后及健康對(duì)照者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。確診復(fù)發(fā)患者血清sEC明顯高于術(shù)后和健康對(duì)照，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01，P＜0.05)。確診復(fù)發(fā)患者血清AFP也高于術(shù)后和健康對(duì)照者，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05，表1)。

表 1 健康人及HCC患者手術(shù)前后和確診復(fù)發(fā)時(shí)AFP和sEC值的變化Tab. 1 The serum values of AFP and sEC between pre-and postoperation and recurrence in HCC with healthy control

2.3 HCC患者手術(shù)前和確診復(fù)發(fā)時(shí)AFP和sEC陽(yáng)性率

手術(shù)前AFP、sEC陽(yáng)性分別為73例(69.5%)和93例(88.6%)，兩者同時(shí)陽(yáng)性59例(56.2%)。確診為HCC復(fù)發(fā)時(shí)AFP、sEC陽(yáng)性分別為54例(51.4%)和84例(80.0%)，兩者同時(shí)陽(yáng)性43例(41.0%)，與手術(shù)前相比，陽(yáng)性率均有所下降；兩者中任一項(xiàng)陽(yáng)性病例，其中術(shù)前共98例(93.3%)，術(shù)后復(fù)發(fā)94例(89.5%)高于sEC(P＜0.05)或AFP(P＜0.05)單獨(dú)的陽(yáng)性率，sEC陽(yáng)性率高于AFP(P＜0.01)。另6例術(shù)后復(fù)發(fā)的HCC患者，AFP一直為陰性，影像學(xué)檢查已經(jīng)發(fā)現(xiàn)肝占位病變，而sEC水平已在此前1～6個(gè)月明顯增高。

2.4 單獨(dú)與聯(lián)合檢測(cè)對(duì)HCC術(shù)前的診斷價(jià)值

單獨(dú)檢測(cè)AFP、sEC時(shí)，靈敏度sEC高，特異度AFP高；將兩者聯(lián)合(以其中任一項(xiàng)陽(yáng)性即判為陽(yáng)性)后，靈敏度、特異度均有較大提高(表2)。

2.5 sEC與AFP對(duì)術(shù)前HCC診斷及術(shù)后復(fù)發(fā)診斷的相關(guān)性分析

相關(guān)分析表明，sEC、AFP水平在HCC術(shù)前呈正相關(guān) (r=0.631，P＜0.01)；在HCC術(shù)后復(fù)發(fā)也呈正相關(guān)(r=0.324，P＜0.05)；而HCC術(shù)后無(wú)相關(guān)性(r=0.198，P＞0.05)。

2.6 HCC術(shù)前血清sEC、AFP水平與臨床病理特征的關(guān)系

結(jié)果顯示，其表達(dá)與HCC臨床分期及分級(jí)顯著相關(guān)，分期較晚及低分化患者的血清sEC水平較早期患者明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。此外，與有無(wú)門靜脈癌栓、腹水、有無(wú)包膜的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。但與不同年齡及腫瘤大小的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。而術(shù)前AFP水平僅與HCC的TNM分期密切相關(guān)(P＜0.05)，與年齡、腫瘤大小、腫瘤分級(jí)、有無(wú)門靜脈癌栓、有無(wú)包膜的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05，表3)。

表 2 各標(biāo)志物單獨(dú)與聯(lián)合檢測(cè)對(duì)HCC診斷價(jià)值比較Tab. 2 The clinical diagnostic significance of tumour marker sEC and AFP in HCC

3 討 論

AFP作為肝癌的輔助診斷指標(biāo)已被公認(rèn)［3］，但仍有30%～40%的原發(fā)性肝癌患者血清AFP呈陰性［4］。且某些良性肝病患者也出現(xiàn)AFP升高，給臨床診斷帶來(lái)一定困難。EC是維持上皮細(xì)胞的極性及細(xì)胞間連接的糖蛋白，在腫瘤的發(fā)生、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移中起著重要作用［5］，我們的前期研究也表明，EC參與了肝癌的發(fā)生、發(fā)展［6］。EC在近跨膜區(qū)域有一酶切位點(diǎn)，可經(jīng)胰酶作用形成相對(duì)分子質(zhì)量為80×103的可溶性片段，該片段被認(rèn)為是完整EC分子的降解形式，能在健康人的體液中檢測(cè)到，稱為可溶性EC(sEC)。與腫瘤組織標(biāo)本相比，血清學(xué)指標(biāo)具有簡(jiǎn)便、微創(chuàng)、重復(fù)性好及利于隨訪等優(yōu)點(diǎn)。有研究發(fā)現(xiàn)，手術(shù)前和化療前sEC的血清水平是多種上皮來(lái)源惡性腫瘤的獨(dú)立預(yù)后因素，并能早期預(yù)測(cè)術(shù)后復(fù)發(fā)［7-8］。

我們對(duì)HCC患者術(shù)前AFP、sEC血清學(xué)檢測(cè)的水平作相關(guān)性研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，AFP、sEC在術(shù)前血清水平呈正相關(guān)(r=0.631，P＜0.01)。因而推測(cè)，sEC可作為與AFP相同的肝癌血清檢測(cè)標(biāo)志物。本研究結(jié)果還顯示，HCC患者術(shù)前血AFP、sEC的水平明顯高于術(shù)后和健康者(P＜0.05)。手術(shù)前AFP、sEC陽(yáng)性率分別為69.5%和88.6%，sEC術(shù)前檢測(cè)HCC的靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值均高于AFP，表明sEC診斷術(shù)前HCC可能有更高的價(jià)值。

表 3 HCC病理學(xué)參數(shù)與血清sEC和AFP水平的關(guān)系Tab. 3 Correlation between sEC and AFP expression and clinicopathological factors in HCC

本研究結(jié)果顯示，HCC患者復(fù)發(fā)時(shí)血清中sEC、AFP水平明顯高于術(shù)后和健康對(duì)照者，且在確診復(fù)發(fā)患者血清sEC的水平明顯高于術(shù)后和健康者差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；而血清AFP的水平雖然也升高，但與術(shù)后和健康對(duì)照者相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，表明sEC較AFP能更好地預(yù)測(cè)肝癌的復(fù)發(fā)。對(duì)6例術(shù)后復(fù)發(fā)的AFP一直為陰性的HCC患者的sEC水平比較，也證實(shí)了這一點(diǎn)。

本研究還發(fā)現(xiàn)：HCC患者AFP陽(yáng)性率為69.5%，尚有30%左右的患者被漏診，因而，尋找與AFP有聯(lián)合作用一種或多種腫瘤標(biāo)志物，對(duì)HCC的診斷與鑒別診斷具有重要意義。單一的標(biāo)志物作為診斷肝癌復(fù)發(fā)的指標(biāo)均有不同程度的局限性，聯(lián)合檢測(cè)能提高其檢出率，是解決不同標(biāo)志物假陽(yáng)性和假陰性的有效途徑，也是血清學(xué)診斷方法發(fā)展的必然趨勢(shì)。對(duì)術(shù)前靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值的比較發(fā)現(xiàn)，靈敏度sEC高(88.6%)，特異度AFP高(87.4%)。將兩者聯(lián)合(以其中任一項(xiàng)陽(yáng)性即判為陽(yáng)性)后，靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值均有較大提高，尤其是靈敏度高達(dá)98.0%。因此，聯(lián)合檢測(cè)sEC、AFP能明顯提高HCC的診斷率。

本研究未對(duì)術(shù)后復(fù)發(fā)進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)的評(píng)價(jià)，且樣本量較小，故需進(jìn)一步行大樣本、多方面的研究。

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主編吳一龍（廣東省人民醫(yī)院副院長(zhǎng)、廣東省人民醫(yī)院腫瘤中心主任、廣東省肺癌研究所所長(zhǎng)、廣東省循證醫(yī)學(xué)科研中心主任，中山大學(xué)、南方醫(yī)科大學(xué)、汕頭大學(xué)、廣東省心血管病研究所腫瘤學(xué)教授，博士生導(dǎo)師）。本刊以廣大醫(yī)藥衛(wèi)生技術(shù)人員和醫(yī)療、教學(xué)、科研管理工作者為讀者對(duì)象，立足臨床醫(yī)學(xué)，介紹循證醫(yī)學(xué)（evidence-based medicine , EBM）的理念、方法及相關(guān)知識(shí)，探討符合中國(guó)國(guó)情的循證醫(yī)學(xué)實(shí)踐，促進(jìn)國(guó)內(nèi)外醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)交流和醫(yī)學(xué)科學(xué)發(fā)展。

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《循證醫(yī)學(xué)編輯部》

To study expression and recurrence significance of uniting soluble E-cadherin and AFP pre-and postoperative in hepatocellular carcinoma

YUAN Lin1, XU You-xian1*, SHEN Shi-qiang2, LU Xin1(1. Department of General Surgery, the People’s Hospital of Liuzhou, Liuzhou Guangxi 545006, China; 2. Department of General Surgery, Renmin Hospital of Wuhan University, Wuhan Hubei 436000, China)

YUAN Lin E-mail: yuanl135@sina.com

Background and purpose: E-cadherin (EC) is a type of glycoprotein, which could maintain epithelial polarity and cell-cell junction. It is thought to be associated with the development and progression of hepatocellular carcinoma (HCC). The study aimed to detect expression of uniting detection sEC and AFP before and after operation in patients, and to monitor recurrence of postoperative. Methods: The levels of sEC and AFP in 105 HCC patients were tested by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and radioimmunoassay (RIA) before and after operation as well as in 70 healthy controls. Theirs correlation with clinical and pathological factors was analyzed. We analyzed the level of plasma sEC and AFP of 47 patients who had been suffered from the hepatocellular carcinoma operation and relapse. Results: The levels of sEC and AFP in HCC patients before operation were significantly higher than in controls, which declined significantly one week after operation. The sEC level before operation showed significant correlation with TNM staging (P＜0.01), edmondson grade, the carcerous thrombi within the portal vein and the capsule of carcinoma (P＜0.05), but not with age of patients or the tumor size (P＞0.05). While AFP only correlation with TNM staging (P＜0.05), not with others factors (P＞0.05). When the recurrence was confirmed, the level of sEC was much higher significantly than the level postoperation (P＜0.01). Conclusion: The levels of sEC in HCC patients before operation are closely related with prognosis and recurrence of HCC. The unites detection of sEC+AFP may be a predictive factor for recurrence of postoperation.

10.3969/j.issn.1007-3969.2013.06.008

R735.7

：A

：1007-3639(2013)06-0447-05

2012-12-11

2013-03-01）

廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳計(jì)劃課題項(xiàng)目(No：Z2009313)。

袁林 E-mail:yuanl135@sina.com