李全亮 譚 霞 楊湘彬 黃 巍 劉 麗

（長沙醫(yī)學院科研實驗中心，湖南 長沙 410219）

鈣劑和硒對飲茶型氟中毒小鼠肝、腎病理形態(tài)學改變的影響

李全亮 譚 霞 楊湘彬 黃 巍 劉 麗

（長沙醫(yī)學院科研實驗中心，湖南 長沙 410219）

目的 研究鈣劑和硒對飲茶型氟中毒小鼠肝、腎病理形態(tài)改變的影響，從而為防治飲茶型氟中毒提供科學依據(jù)。方法以常規(guī)飼料飼養(yǎng)小鼠，并給予含氟量為100mg/L的磚茶水，為期3個月，建立飲茶型氟中毒小鼠的病理模型；去除自然死亡的小鼠，按體質(zhì)量隨機分成4組：對照組，磚茶組，鈣劑組，硒組。對照組飲用自來水，磚茶組飲用含氟量為100mg/L的磚茶浸出液，鈣劑組飲用2mg/L的鈣劑和磚茶浸出液，硒組飲用2mg/L的亞硒酸鈉溶液和磚茶浸出液，一個月后處理實驗動物，通過組織病理學觀察鈣劑和硒對飲茶型氟中毒小鼠肝、腎病理形態(tài)學改變的影響。結(jié)果硒組小鼠肝、腎細胞組織的后繼損傷較輕，而鈣劑組肝，腎病理損傷較重。結(jié)論硒對飲茶型氟中毒小鼠的肝、腎細胞的后繼損傷有一定的保護作用，但不能明顯減輕已造成的小鼠肝、腎病理形態(tài)的改變，證明和在一定程度上可拮抗氟的毒性作用，減輕氟中毒病情，減緩氟中毒的進一步的發(fā)展。而鈣劑加重氟中毒的發(fā)展。

鈣劑和硒；飲茶型氟中毒

飲茶型氟中毒是我國特有的一種氟中毒類型。主要是由于攝入大量的含氟量極高的磚茶而引起的一種慢性中毒[1]。飲茶型氟中毒癥狀的出現(xiàn)及對人體的損害是一個緩慢而不易為人察覺的過程。主要與少數(shù)民族的飲茶習慣有關(guān)。少數(shù)民族的飲茶方式是將高氟含量的磚、邊茶用水或奶進行煎煮，每餐必用其伴食。磚、邊茶是用茶的粗老葉片、葉梗加工而成的，其氟的含量是一般商品的100～200倍[2]。茶葉經(jīng)沸水浸泡后，葉片中的氟迅速溶出[3]。這使得茶氟的溶出量和攝入量均顯著增加。若長期飲用，再加上飲水中的氟，攝入體內(nèi)的氟就會超過標準（＞50mmol/L或＞4mg/d），引起慢性中毒，而氧自由基在這個過程中起著重要的作用，它的增加會導致或加劇氟中毒的產(chǎn)生，甚至導致氧中毒[4]，從而影響人體各個器官系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和功能。通過復制飲茶型氟中毒小鼠病理模型進行動物實驗，研究小鼠在應(yīng)用鈣劑和硒劑處理后肝腎組織病理形態(tài)的變化及差別，從而了解硒劑是否可以對抗氟中毒的氧自由基，為臨床預防和治療飲茶型氟中毒提供實驗依據(jù)和理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

長沙醫(yī)學院機能實驗室提供的大鼠58只，體質(zhì)量60～100g，雌雄各半?；A(chǔ)飼料和自來水適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，去除自然死亡的大鼠后按體質(zhì)量隨機分為4組，每組10只，分籠飼養(yǎng)。

1.2 飼料

飼料是由長沙醫(yī)學院科研實驗室提供的。飼料的營養(yǎng)保證值是：水分≤10%、粗蛋白≥21%、粗脂肪≥4%、粗纖維≤5%、粗灰分≤8%、鈣1.0～1.8、磷0.6～1.2、賴氨酸≥1.32%、蛋氨酸±胱氨酸≥0.78%、飼料含氟量為6.32mg/kg。

1.3 飲水

實驗組小鼠飲用含氟量為100mg/L。每天進行灌胃。對照組飲用自來水，氟含量為0.425 mg/L。

1.4 實驗方法

圖1 小鼠肝細胞×400（A：對照組，B：磚茶組，C：鈣劑組，D：硒組）

表1 動物分組及處理因素

1.4.1 動物分組及處理因素見表1。實驗期間全部動物均自由進食水，實驗期限為期3個月。

1.4.2 光鏡標本制備

取小鼠肝臟和腎臟，10%甲醛固定，梯度蔗糖溶液脫水，冰凍切片包埋劑，冰凍切片，HE染色后供組織學觀察。

2 結(jié) 果

2.1 光鏡下肝臟和腎臟組織器官的病理形態(tài)學改變

2.1.1 肝臟

肝細胞鎖排列紊亂，肝細胞濁腫變性，部分肝細胞胞漿透明，成氣球樣變，可見大量脂肪空泡，肝細胞輪廓不清，有的細胞膜消失并有核碎裂。各實驗組肝細胞受損情況見圖1，與對照組相比統(tǒng)計結(jié)果見表2。

結(jié)合圖1各實驗組肝細胞受損情況：鈣劑組＞氟茶組＞水組＞硒組與對照組相比，在應(yīng)用鈣劑和硒處理后肝細胞受損情況統(tǒng)計結(jié)果見表2。

表2 鈣劑和硒對飲茶型氟中毒小鼠肝細胞受損情況的比較

在應(yīng)用鈣劑和硒后小鼠肝細胞損傷差異有統(tǒng)計學意義（根據(jù)Fisher確切概率法計算P＜0.05）

2.1.2 腎臟

磚茶組小鼠腎小球和腎小管尚能分清，但是近曲小管上皮細胞核明顯萎縮，漿核比例增大。細胞核形態(tài)不一，呈橢圓形，腎形，三角形，排列紊亂，個別可見核固縮，部分細胞核向官腔突出，有的已位于官腔內(nèi)，鈣劑組小鼠近曲小管上皮細胞核改變同磚茶組，但是程度略重。細胞核形態(tài)較磚茶組好。硒組小鼠近曲小管上皮細胞核形態(tài)較好，細胞輕度腫脹。如圖2所示，統(tǒng)計結(jié)果見表3。

圖2 小鼠腎細胞×400（A：對照組，B：磚茶組，C：鈣劑組，D：硒組）

結(jié)合圖2各實驗組肝細胞受損情況：鈣劑組＞氟茶組＞水組＞硒組與對照組相比，在應(yīng)用鈣劑和硒處理后肝細胞受損情況統(tǒng)計結(jié)果見表3。

表3 鈣劑和硒對飲茶型氟中毒小鼠腎細胞受損情況的比較

在應(yīng)用鈣劑和硒后小鼠腎細胞損傷差異有統(tǒng)計學意義（根據(jù)Fisher確切概率法計算P＜0.05）

3 討 論

氟中毒的治療是當今氟中毒研究領(lǐng)域中一個較為關(guān)注的問題。飲茶型氟中毒已成為嚴重危害我國西部少數(shù)民族地區(qū)人群健康的公共衛(wèi)生問題。解決該類型的氟中毒主要從兩個方面入手：①降低茶的含氟量；②加強營養(yǎng)。本實驗主要從營養(yǎng)方面出發(fā)，研究鈣劑與硒兩種微量元素對中毒小鼠肝腎病理形態(tài)學的影響。與對照組相比，通過光鏡下的對比觀察可以看到硒組對肝腎組織的損傷最小，自來水次之，氟茶組較小，鈣劑最甚。其原因可能是因為氟中毒時，氟通過自由基的作用造成肝腎損害，硒是抗氧化劑，可以是自由基減少，減輕氟對組織的損害。而鈣劑加重自由基的作用對肝腎造成損傷，其具體作用機制還有待進一步研究。

[1] 高彥輝,孫殿軍,周令望,等.亞慢性氟中毒對大鼠骨組織誘導型一氧化氮合酶表達的影響[J].中國地方病學雜志,2008,27(2):124.

[2] 孫玉富,滕國興,趙新華.地方性氟中毒病區(qū)劃分指標和標準的研究進展[J].中國地方病學雜志,1996,15(3):169-170.

[3] Duck worth SC,Duck worth RM.The ingestion of fluoride in tea [J].BrDentJ,1978,145(12):368-370.

[4] Rzeuski R,chlubek D,Machoy Z.Interaction of fluoride and biological free radicals reaction[J].Fluoride,1998,31(1):43-45.

R155.3

B

1671-8194（2013）18-0094-02

湖南省教育廳大學生研究性學習和創(chuàng)新性實驗資助項目（編號：2012441）