楊 梅

四川省達(dá)州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川達(dá)州 635000

微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制主要分為實(shí)驗(yàn)室內(nèi)以及室間質(zhì)量控制兩類，加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)量控制能夠確保微生物檢驗(yàn)的真實(shí)性以及準(zhǔn)確性，而室間質(zhì)量控制則可確保各實(shí)驗(yàn)室之間能夠達(dá)到一致的檢驗(yàn)質(zhì)量水平，并及時發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室日常工作中存在的問題及不足之處，掌握實(shí)驗(yàn)室的檢測能力。

1 材料與方法

1.1 材料

本組質(zhì)控樣品為市疾病預(yù)防控制中心所下發(fā)的微生物盲樣菌種G007以及G109。

1.2 培養(yǎng)基以及試劑

本研究質(zhì)量控制所用的培養(yǎng)及以及生化反應(yīng)管均選自杭州天和微生物試劑有限公司，所用的，沙門菌屬診斷學(xué)血清選自蘭州生物制品研究所，均在有效期內(nèi)。檢測標(biāo)準(zhǔn)參照《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)》（GB/T4789-2003）。

1.3 方法

1.3.1 細(xì)菌培養(yǎng) 在無菌操作條件下將盲樣開啟，并采用營養(yǎng)肉湯對凍干菌種進(jìn)行溶解、復(fù)蘇，并置于溫度為37℃的培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)約18～24 h，可見G007呈現(xiàn)渾濁生長，并有略微存在菌膜；同時，G109也呈現(xiàn)渾濁生長現(xiàn)象。

1.3.2 分離平板 分別取一環(huán)增菌培養(yǎng)物并將其接種在普通的營養(yǎng)瓊脂平板、SS瓊脂平板、血平板、EMB瓊脂平板以及高鹽甘露醇瓊脂平板之上，并置于37℃的培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)24 h。

觀察結(jié)果：觀察可見G007接種至高鹽甘露醇瓊脂平板之上未出現(xiàn)生長狀況，在EMB以及SS瓊脂平板之上可見無色透明的小菌落，且菌落呈濕潤、光滑狀；在普通營養(yǎng)瓊脂平板上有兩種菌落生長，菌落①是不透明的，其表面較為粗糙，且邊緣不整齊，呈黃色和融臘狀；菌落②是無色半透明狀的，其邊緣較為整齊，且呈濕潤、光滑狀，有隆起現(xiàn)象。取菌種①采用革蘭氏染色成為G+大桿菌，可見卵圓形芽胞，菌體不突出。菌落②在EMB以及SS上生長出的菌落經(jīng)革蘭氏染色均表現(xiàn)為G-桿菌，經(jīng)氧化酶試驗(yàn)結(jié)果呈陰性。

而G109在EMB以及SS瓊脂平板上未出現(xiàn)菌落生長，在普通營養(yǎng)瓊脂平板上有兩種菌落生長，①為不透明菌落，表面較粗糙，且邊緣不整齊，呈現(xiàn)黃色、融臘狀；②為圓形突起菌落，菌落表面光滑，且為半透明、濕潤狀。菌落①經(jīng)革蘭氏染色呈現(xiàn)為G+大桿菌，可見卵圓形芽胞，菌體不突出；取高鹽甘露醇以及營養(yǎng)瓊脂平板上生長的菌落②進(jìn)行革蘭氏染色，結(jié)果均為G+球菌，且排列均呈葡萄串狀。

1.3.3 生化試驗(yàn)以及血清學(xué)鑒定 ①生化實(shí)驗(yàn)：取G007在EMB以及SS平板上所生長出的菌落以及普通營養(yǎng)瓊脂平板之上生長的菌落②接種到三糖鐵瓊脂斜面上，觀察到菌落的生長情況為斜面（-）、產(chǎn)氣以及動力均呈陰性；同時進(jìn)行生化試驗(yàn)，將其置于溫度為37℃的培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)24 h，可觀察到葡萄糖酸鹽、苯丙氨酸脫氨酶、枸櫞酸鹽、靛基質(zhì)、鳥氨酸、葡萄糖產(chǎn)氣、尿素、棉子糖、氰化鉀、阿拉伯糖、氧化酶以及動力均呈陰性，而賴氨酸、甲基紅、硫化氫、木膠糖以及山梨醇均呈陽性，且其生長情況均一致。取G109分別在高鹽甘露醇以及普通營養(yǎng)瓊脂平板之上生長的菌落②接種到血平板之上，并置于37℃的培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)24 h，觀察到其菌落的形態(tài)完全一致，均為不透明、圓形、色澤金黃、中等大小、表面光滑而邊緣整齊狀態(tài)，菌落周圍分布有明顯透明溶血環(huán)，均經(jīng)生化鑒定顯示甘露醇、厭氧甘露醇、過氧化氫酶、觸酶以及血漿凝固酶均呈陽性。②血清學(xué)鑒定：在TSI斜面菌臺血中對G007號菌種性沙門菌血清學(xué)凝集試驗(yàn)，其結(jié)果顯示，O抗原：A-F存在多價O血清（+++），O9++。H抗原：該抗原的1、2相均為陰性，將其接種于瓊脂含量為0.7%的平板中進(jìn)行培養(yǎng)，其結(jié)果仍表現(xiàn)為不凝集，它與生理鹽水的對照結(jié)果呈陰性。

根據(jù)生化反應(yīng)結(jié)果、革蘭氏染色以及菌落形態(tài)可知，在普通的營養(yǎng)瓊脂平板上G109、G007菌落①為蠟樣芽孢桿菌。

2 結(jié)果

根據(jù)血清學(xué)凝集試驗(yàn)、生化反應(yīng)結(jié)果、革蘭氏染色以及菌落的形態(tài)，可判定在G007盲樣中所檢測到的D群沙門菌屬于雞沙門菌中的一種。此外，根據(jù)血漿凝固酶、生化反應(yīng)的結(jié)果、革蘭氏染色以及菌落形態(tài)，可以斷定G109盲樣中的檢出的菌落為金黃色葡萄球菌。G007盲樣中檢出了蠟樣芽孢桿菌以及雞沙門菌，G109中檢出蠟樣芽孢桿菌以及金黃色葡萄球菌。檢查結(jié)果上報(bào)上級疾病預(yù)防控制中心，均完全準(zhǔn)確。

3 討論

本研究結(jié)果顯示，本實(shí)驗(yàn)室的檢測結(jié)果客觀、真實(shí)、準(zhǔn)確，質(zhì)控措施落實(shí)較好，質(zhì)量管理體系處于良好的受控狀態(tài)。

質(zhì)控結(jié)果的真實(shí)、準(zhǔn)確性涉及設(shè)備、環(huán)境以及樣品的采集和保存等多方面的因素，應(yīng)加強(qiáng)各環(huán)節(jié)以及各要素的技術(shù)校核以及質(zhì)量監(jiān)督，并建立健全實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范，加強(qiáng)質(zhì)量評價，并及時采取有效的糾正措施，確保檢測工作處于良好的受控狀態(tài)。接收樣品時一定要謹(jǐn)慎對待，并認(rèn)真閱讀相關(guān)的實(shí)施方案及方案，及時提出并解決疑問，以面接受樣品后因信息不全或者樣品不符合要求而造成不必要的麻煩。在開展質(zhì)控活動前，應(yīng)做好人員分配，強(qiáng)化技術(shù)要求以及責(zé)任意識，并全面提高檢測人員的平板分離技術(shù)以及高疑似菌落識別技術(shù)。應(yīng)加強(qiáng)對常用儀器設(shè)備的質(zhì)量管理，確保器皿的清潔，并注意檢查其性能以及運(yùn)行情況。應(yīng)根據(jù)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行培養(yǎng)基質(zhì)量管理和控制，確保培養(yǎng)基以及各試劑均在保存期限內(nèi)，并具有適用性。分配培養(yǎng)基時應(yīng)注意少量勤配，并做好滅菌標(biāo)準(zhǔn)之后避光保存。

在細(xì)菌鑒定過程中進(jìn)行生化反應(yīng)，并注意觀察一些特殊的生化反應(yīng)過程，可逐步排除其他的相似細(xì)菌，以便于在進(jìn)行多株細(xì)菌分析時，更加清晰地鑒定和分析。尤其是對于一些具有獨(dú)特生化反應(yīng)的細(xì)菌具有較好的鑒定價值。而對于生化反應(yīng)不典型者，則應(yīng)進(jìn)行反復(fù)試驗(yàn)。同時，還應(yīng)根據(jù)細(xì)菌在整個培養(yǎng)以及鑒定過程中的情況以及血清學(xué)鑒定等，綜合判斷并確定鑒定結(jié)果。本組兩個盲樣均經(jīng)細(xì)菌培養(yǎng)、平板分離、血清學(xué)鑒定以及生化試驗(yàn)等，鑒定結(jié)果準(zhǔn)確無誤。

總之，加強(qiáng)室間質(zhì)控考核不僅是對實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控情況、檢驗(yàn)人員技能、能力的考核和驗(yàn)證，也是提高檢驗(yàn)人員的檢驗(yàn)水平，有效確保檢驗(yàn)結(jié)果客觀、真實(shí)、準(zhǔn)確的關(guān)鍵，同時也是預(yù)防和控制疾病發(fā)生及發(fā)展的重要策略及措施。

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