陳 雨

（黑龍江省雞西市人民醫(yī)院輸血科 黑龍江 雞西 158100）

糖尿病腎臟病變包括感染性病變和血管性病變，感染性病變有腎盂腎炎和腎乳頭壞死。血管性病變分微血管和大血管病變，大血管病變包括腎動(dòng)脈硬化和腎小動(dòng)脈硬化。微血管病變是指腎小球硬化，分結(jié)節(jié)性、滲出性和彌漫性三種，三者可單獨(dú)可合并存在，上述改變中，最典型的是結(jié)節(jié)性腎小球硬化。我們通常說(shuō)的糖尿病腎病是腎小球硬化。因此，早期診斷和腎臟微血管病變的判斷對(duì)于糖尿病腎病的治療具有重要意義。本文以尿蛋白／血肌酐值作為判斷糖尿病患者腎臟微血管病變情況的標(biāo)準(zhǔn)，分析血清同型半胱氨酸（Hcy）和高敏C反應(yīng)蛋白（hs－CRP）水平在糖尿病腎病早期診斷中的價(jià)值。

1 一般資料

選擇2009年1月－2012年5月間我院住院糖尿病腎病患者58例病歷資料，男38例，女20例，年齡48－76歲，選擇同期在我院體檢健康人最為對(duì)照組。患者生命體征：腎小球?yàn)V過(guò)率增高，為最早出現(xiàn)的功能性改變；蛋白尿是糖尿病腎病最主要的表現(xiàn)；約10%%糖尿病腎病在病程的某一階段表現(xiàn)為腎病綜合征，尿蛋白＞3g／／24h，血清白蛋白降低，浮腫，高膽固醇血癥；明顯高血壓是糖尿病腎病晚期的表現(xiàn)；臨床糖尿病腎病多發(fā)生在糖尿病病程15年之后，一旦出現(xiàn)明顯蛋白尿，腎小球?yàn)V過(guò)率就逐步而恒定地下降，平均每月下降約lml／／min，進(jìn)入終末期腎功能不全。

2 檢測(cè)方法

患者采血時(shí)間皆選在入院后第二日清晨，空腹12h于肘部取靜脈血5ml加入含有乙二胺四乙酸二鉀（EDTA－K2）的試管中；對(duì)照組空腹12h于肘部取靜脈血5ml加入含有EDTA－K2的試管中。將上述含有抗凝血液樣品的試管分別以3 000r／min離心10min，靜置后取上層血清，稀釋10倍作待測(cè)樣品備用。ELISA法測(cè)定血清Hcy水平：試劑盒內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品濃度為200μmol／L，按2倍比系列稀釋?zhuān)♂尯鬂舛葹?00，50，25，12.5，6.25，3.125μmol／L。設(shè)置一個(gè)空白孔加入待測(cè)樣品100μl，立刻加入終止液100μl，終止反應(yīng)。取7種標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣品各100μl加入酶標(biāo)板反應(yīng)孔底部，混勻、加蓋后于37℃下溫育120min；棄液，在酶標(biāo)板反應(yīng)孔底部加入100μl生物素標(biāo)記抗體工作液，混勻、加蓋后于37℃溫育60min；棄液后洗板5次，向酶標(biāo)板反應(yīng)孔底部加入100μl辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液，混勻、加蓋后于37℃溫育60min。棄液后洗板5次，在酶標(biāo)板反應(yīng)孔底部加入100μl TMB溶液，混勻、加蓋后于37℃溫育30min，加入50μl終止液終止反應(yīng)。用酶標(biāo)儀測(cè)出各孔在450nm處OD值，以標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定OD值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算樣品血清Hcy水平。血清hs－CRP水平測(cè)定：采用ELISA法測(cè)定，詳細(xì)操作步驟參考血清Hcy水平測(cè)定。

3 結(jié)果

經(jīng)過(guò)測(cè)定表明：糖尿病腎病患者血清Hcy和hs－CRP水平與患者性別、病程、體重指數(shù)、心血管疾病、抗生素使用情況有關(guān)；尿蛋白正常組、微量蛋白尿組和大量蛋白尿組血清同型半胱氨酸和高敏C反應(yīng)蛋白都顯著高于健康人組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。大量蛋白尿組血清同型半胱氨酸和高敏C反應(yīng)蛋白濃度都顯著高于微量蛋白尿組和尿蛋白正常組，微量蛋白尿組血清Hcy水平顯著高于尿蛋白正常組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

4 討論

引起血清同型半胱氨酸升高的主要原因有遺傳和環(huán)境營(yíng)養(yǎng)兩種因素：遺傳因素主要是一種命名為N5甲基四氫葉酸轉(zhuǎn)甲基酶及胱硫醚－β－合成酶的基因發(fā)生突變，引起酶的活性降低，從而導(dǎo)致同型半胱氨酸血癥?，F(xiàn)在已經(jīng)證明N5甲基四氫葉酸轉(zhuǎn)甲基酶的缺陷，在體內(nèi)葉酸缺乏的情況下，可以引起同型半胱氨酸濃度的明顯升高。由遺傳缺陷引起的胱硫醚－β－合成酶的活性降低，可導(dǎo)致血漿中同型半胱氨酸的濃度超過(guò)正常值的十倍左右。環(huán)境營(yíng)養(yǎng)因素指代謝輔助因子如葉酸、維生素B6、B12缺乏，這些因子在同型半胱氨酸代謝反應(yīng)中為必需因子，均可導(dǎo)致高同型半胱氨酸血癥的發(fā)生。hs－CRP是一種由肝細(xì)胞合成和分泌的非糖基化聚合蛋白，作為一種急性損傷、感染或炎癥刺激的急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，hs－CRP是一種非特異性的炎癥血清生物標(biāo)記因子。Jamaluddin MS等［1］在一個(gè)9年的前瞻性隨訪(fǎng)研究中，對(duì)328例糖尿病腎病患者的尿蛋白排泄率和血清hs－CRP水平進(jìn)行了監(jiān)測(cè)，發(fā)現(xiàn)二者具有相關(guān)性，進(jìn)而提出糖尿病腎病是hs－CRP參與介導(dǎo)的長(zhǎng)期慢性炎癥反應(yīng)病理過(guò)程的理論。因此，推斷血清hs－CRP水平對(duì)于老年糖尿病早期腎臟微血管病變程度診斷的敏感性低于Hcy。分析認(rèn)為可能與hs－CRP作為一種非特異性炎癥標(biāo)記因子有關(guān)，老年患者本身具有多方面的致使血清hs－CRP水平升高的因素存在，如高齡、長(zhǎng)期抽煙、感染、合并心血管疾病等，這些使得血清hs－CRP在判斷早期糖尿病腎臟微血管病變程度方面敏感性下降。因此，老年患者的血清hs－CRP水平升高與其病程、吸煙情況、體重指數(shù)、合并心血管疾病情況等密切相關(guān)?？傊逋桶腚装彼崾侨梭w內(nèi)含硫氨基酸的一個(gè)重要的代謝中間產(chǎn)物，評(píng)價(jià)心腦血管風(fēng)險(xiǎn)的指標(biāo)，價(jià)值等同于血糖、血脂、血壓，可能是動(dòng)脈粥樣硬化等心血管疾病發(fā)病的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因子；血清同型半胱氨酸和高敏C反應(yīng)蛋白水平與老年糖尿病腎病的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)，二者檢測(cè)將有助于進(jìn)一步了解糖尿病腎病患者的發(fā)病機(jī)制，并對(duì)糖尿病的診治提供新的線(xiàn)索。

［1］Jamaluddin MS，Yang X，Wang H.Hyperhomocysteinemia，DNA methylation and vascular disease〔J〕.Clin Chem Lab Med，2009；18：60