王玉龍 胡仁莉

（1.江蘇省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，南京 210000；

2.江蘇省蘇州市畜牧獸醫(yī)站，蘇州 215000）

家畜口蹄疫雙價(jià)疫苗免疫效果評估

王玉龍1胡仁莉2

（1.江蘇省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，南京 210000；

2.江蘇省蘇州市畜牧獸醫(yī)站，蘇州 215000）

為了對現(xiàn)用的口蹄疫雙價(jià)苗免疫效果進(jìn)行有效評估，我們選擇了不同疫苗生產(chǎn)廠家生產(chǎn)的疫苗對家畜進(jìn)行免疫，對同一疫苗生產(chǎn)廠家疫苗選擇不同劑量免疫，并用不同檢測方法進(jìn)行檢測?，F(xiàn)將實(shí)驗(yàn)比較結(jié)果報(bào)告如下：

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

蘇州市種羊場提供的湖羊和蘇州云蘭牧場提供的奶牛。

1.2 疫苗

由中農(nóng)威特生物科技股份有限公司和中牧股份有限公司提供。

1.3 檢測試劑

檢測試劑由蘭州獸醫(yī)研究所提供；實(shí)驗(yàn)操作和結(jié)果判定按說明書要求進(jìn)行。

1.4 分組方法及免疫劑量

試驗(yàn)湖羊和奶牛均隨機(jī)分成2組，首次免疫分別按廠家推薦劑量和加倍量進(jìn)行免疫。

1.5 不同廠家生產(chǎn)的疫苗免疫效果比較

另各選取湖羊和奶牛用中牧股份生產(chǎn)的疫苗進(jìn)行免疫，并跟蹤監(jiān)測抗體水平，對使用兩個(gè)生產(chǎn)廠家的疫苗的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，進(jìn)行平行對比試驗(yàn)。

1.6 不同檢測方法檢測抗體的相關(guān)性比較

隨機(jī)選取了湖羊和奶牛血清樣品進(jìn)行兩種不同的抗體檢測方法的相關(guān)性比較。以正向間接血凝試驗(yàn)（HA）為基礎(chǔ)，HA檢測為陽性的樣本中液相阻斷酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（LB-ELISA）的陽性檢出率為二者的陽性符合率，HA檢測為陰性的樣本中LBELISA方法的陰性檢出率為二者的陰性檢出率，兩種方法檢測同為陽性或陰性的血清樣本占檢測總樣本的比率為二者的總體符合率。

2 結(jié)果與分析

2.1 湖羊分組后按正常推薦劑量和加倍劑量免疫的抗體消長結(jié)果

湖羊以推薦劑量和加倍劑量免疫后通過LB-ELISA檢測O型口蹄疫抗體的OD值，以50%的阻斷計(jì)算效價(jià)。

2.1.1 羔羊首免后分兩組免疫后抗體消長情況檢測結(jié)果，詳見表1、表2。平均滴度 239 677 648 487 277 132合格率（%） 72.6 100 100 96.8 88.7 73.2

表1 羔羊推薦計(jì)量首免后O型抗體檢測結(jié)果（1∶X）

表2 羔羊加倍劑量首免后O型抗體檢測結(jié)果（1∶X）

2.1.2 犢牛首免后分兩組免疫后抗體消長情況檢測結(jié)果，詳見表3、表4。

表3 犢牛推薦計(jì)量首免后O型抗體檢測結(jié)果（1∶X）

表4 犢牛加倍劑量首免后O型抗體檢測結(jié)果（1∶X）

2.2 不同疫苗生產(chǎn)廠家疫苗免疫后的O型口蹄疫抗體消長結(jié)果

中牧股份生產(chǎn)的疫苗免疫抗體監(jiān)測結(jié)果如下，中農(nóng)威特生物股份有限公司生產(chǎn)的疫苗抗體監(jiān)測結(jié)果見結(jié)果2.1。

2.2.1 湖羊血清樣品通過LB-ELISA檢測O型口蹄疫抗體的OD值，以50%的阻斷計(jì)算效價(jià)。

2.2.1.1 羔羊母源抗體消長情況檢測結(jié)果，詳見表5。

表5 羔羊口蹄疫O型母源抗體檢測結(jié)果（1∶X）

2.2.1.2 羔羊中牧股份生產(chǎn)疫苗首免后抗體消長情況檢測結(jié)果，詳見表6。

表6 羔羊口蹄疫O型首免后抗體檢測結(jié)果（1∶X）

2.2.1.3 羔羊中牧股份生產(chǎn)疫苗二免后抗體消長情況檢測結(jié)果，詳見表7。

表7 羔羊口蹄疫O型二免后抗體檢測結(jié)果（1∶X）

2.2.2 奶牛血清樣品通過LB-ELISA檢測O型口蹄疫抗體的OD值，以50%的阻斷計(jì)算效價(jià)。

2.2.2.1 犢牛母源抗體消長情況檢測結(jié)果，見表8。

表8 犢牛口蹄疫O型母源抗體檢測結(jié)果（1：X）

2.2.2.2 犢牛中牧股份生產(chǎn)疫苗首免后抗體消長情況檢測結(jié)果，見表9。

表9 犢?？谔阋逴型首免后抗體檢測結(jié)果（1：X）

2.2.2.3 犢牛中牧股份生產(chǎn)疫苗二免后抗體消長情況檢測結(jié)果，見表10。

表10 犢牛口蹄疫O型二免后抗體檢測結(jié)果（1∶X）

2.3 LB-ELISA和HA方法的檢測符合率

2.3.1 兩種方法檢測湖羊O型口蹄疫抗體的檢測符合率 詳見表11。表中可見LB-ELISA和HA兩種方法對所有檢測血清樣品的陽性符合率為77.1%，陰性符合率為61.8%，陰陽性符合率為74.5%。

表11 LB-ELISA和HA方法的檢測湖羊O型口蹄疫抗體符合率分析結(jié)果

2.3.2 兩種方法檢測奶牛O型口蹄疫抗體的檢測符合率 詳見表12。表中可見LB-ELISA和HA兩種方法對所有檢測血清樣品的陽性符合率為75.8%，陰性符合率為65.1%，總符合率為73.5%。

表12 LB-ELISA和HA方法的檢測奶牛O型口蹄疫抗體符合率分析結(jié)果

3 討論

3.1 從上面的結(jié)果中可以看出，加倍劑量免疫的抗體水平比正常推薦劑量的抗體水平稍高，換算成平均滴度的話，平均高1～2個(gè)滴度水平，并不存在特別高的抗體水平的差異[1～2]，因此，我們在進(jìn)行免疫時(shí)還是建議采用廠家推薦的劑量進(jìn)行。

3.2 在本試驗(yàn)過程中，我們也進(jìn)行了不同廠家疫苗的比較性試驗(yàn)，從試驗(yàn)結(jié)果我們可看出，這兩家廠家生產(chǎn)的疫苗的免疫效果也不存在顯著差異，因?yàn)槲覀冊囼?yàn)所用的疫苗均為我國正規(guī)廠家所生產(chǎn)的，有合格的生產(chǎn)批號(hào)，從一定程度上也可說明我國正規(guī)廠家生產(chǎn)的疫苗還是可以信賴的，但由于本試驗(yàn)時(shí)間及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限所以我們只是做了兩個(gè)生產(chǎn)廠家的疫苗進(jìn)行了比較，要想得出這種結(jié)論還需進(jìn)一步的試驗(yàn)證明。

3.3 本試驗(yàn)中，我們還采用了LB-ELISA和HA兩種檢測方法進(jìn)行了相關(guān)性的比較，從比較的結(jié)果可以看出這兩種方法在檢測O型口蹄疫抗體中還是存在一定的相關(guān)性的，其中有一部分的檢測差異可能的原因有：首先，HA試驗(yàn)本身就有假陽性的非特異性反應(yīng)存在，而LB-ELISA是比HA更敏感、特異性更強(qiáng)的試驗(yàn)方法；其次，這兩種方法所檢測的口蹄疫抗體不同，HA檢測的主要是口蹄疫病毒的全抗體，而LB-ELISA檢測的是口蹄疫病毒的中和抗體，兩種方法相比LB-ELISA可能更有助于真實(shí)反映機(jī)體的全部免疫應(yīng)答效果。

3.4 由于本試驗(yàn)中所需要的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量太大，所以在不同劑量分組免疫試驗(yàn)、不同廠家疫苗的平行對比試驗(yàn)中，我們對原來設(shè)計(jì)的試驗(yàn)方案要求稍做了改變，但改動(dòng)后我們所采用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物樣本數(shù)完全符合統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[3]，可能對試驗(yàn)結(jié)果存在一些影響，但這并不影響我們對現(xiàn)用口蹄疫雙價(jià)苗免疫效果的評估。

[1] 萬莉，郭鎖鏈，昌尚民，等.家畜口蹄疫疫苗免疫效果的觀察及注苗反應(yīng)淺析[J].內(nèi)蒙古畜牧科學(xué)，2002，（2）：29-30.

[2] 潘鑫，詹松鶴，江定豐，等.家畜免疫O型口蹄疫普通滅活疫苗后的應(yīng)激反應(yīng)及抗體變化[J].中國獸醫(yī)科學(xué)，2006，36（S1）：5-10.

[3] 楊永欽，李 樂.口蹄疫病毒滅活的研究[J].中國畜禽傳染病學(xué)，1995，（2）：32-34.