苗燕飛，戈文蘭，陳國(guó)廣，#，徐晨，張根元（.南京工業(yè)大學(xué)，南京86；.江蘇省藥物研究所，南京86）

抑郁癥是一種常見(jiàn)而易被忽略的精神疾患，其臨床表現(xiàn)為情緒低落、悲觀(guān)、睡眠障礙、交往恐懼等，嚴(yán)重者常產(chǎn)生自殺沖動(dòng)。隨著現(xiàn)代生活節(jié)奏的加快，社會(huì)壓力的增加，抑郁癥的患病率正呈現(xiàn)出逐漸上升的趨勢(shì)[1-2]。阿戈美拉汀是一種新型的抗抑郁藥物，為首個(gè)褪黑素受體激動(dòng)藥，也是5-羥色胺2C受體拮抗藥[3]。該藥由法國(guó)施維雅藥廠(chǎng)開(kāi)發(fā)研制，商品名為Val-doxan，為普通薄膜包衣片劑，于2009年2月在歐洲首次上市。

藥物的溶出直接影響藥物在體內(nèi)的吸收和利用。溶出度試驗(yàn)技術(shù)已不僅作為評(píng)價(jià)固體制劑內(nèi)在質(zhì)量的一種重要手段[4]，也是一種評(píng)價(jià)藥物在體內(nèi)釋放和吸收的有效手段[5]。本文以國(guó)外上市的原研制劑為參比制劑，考察江蘇省藥物研究所自研阿戈美拉汀片（與參比制劑規(guī)格劑型一致）在不同pH值的溶出介質(zhì)中的溶出情況，并采用相似因子f2法評(píng)價(jià)本品的內(nèi)在質(zhì)量。

1 材料

ZRS-8G智能溶出實(shí)驗(yàn)儀（天津大學(xué)無(wú)線(xiàn)電廠(chǎng)）；BS21S電子天平（德國(guó)Sartorius集團(tuán)）；UV-2450紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（日本島津公司）。

阿戈美拉汀片（參比制劑，法國(guó)施維雅藥廠(chǎng)，批號(hào)：70622；自研制劑，江蘇省藥物研究所藥物制劑與質(zhì)量研究室，批號(hào)：20111019。規(guī)格：均為每片25mg）；阿戈美拉汀對(duì)照品（江蘇省藥物研究所有限公司藥物化學(xué)研究室，批號(hào)：20100219，純度：99.5%）；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對(duì)照品貯備液的制備。精密稱(chēng)取阿戈美拉汀對(duì)照品10.00mg置于100ml量瓶中，加2ml甲醇溶解后用相應(yīng)溶出介質(zhì)定容，搖勻，即得。

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備。取對(duì)照品貯備液2ml置于100ml量瓶中，用相應(yīng)溶出介質(zhì)定容，搖勻，即得。

2.1.3 供試品溶液的制備。取不同時(shí)間點(diǎn)溶出液10ml（同時(shí)補(bǔ)充同溫新鮮介質(zhì)10ml），經(jīng)0.8μm微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品貯備液；再精密吸取貯備液2ml置于25ml量瓶中，加相應(yīng)溶出介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2 溶出度方法學(xué)考察

2.2.1 溶出介質(zhì)及溶出度測(cè)定方法。參照2010年版《中國(guó)藥典》（二部）附錄ⅩC第二法，即槳法[6]，分別采用pH 1.0鹽酸溶液、pH 4.5醋酸-醋酸鈉緩沖液、pH 6.8磷酸鹽緩沖液和水為溶出介質(zhì)，體積為900ml，轉(zhuǎn)速為50r/min，以紫外-可見(jiàn)分光光度法[6]為本品溶出度的檢測(cè)方法。

2.2.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定。取對(duì)照品貯備液2ml，置于100ml量瓶中，用pH 1.0鹽酸溶液定容，作為供試品溶液；同法制成相同濃度的不同溶出介質(zhì)的供試品溶液。按照紫外-可見(jiàn)分光光度法在200～400nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，可見(jiàn)均在229nm的波長(zhǎng)處有最大吸收，結(jié)果見(jiàn)圖1（圖1C為以pH 1.0鹽酸溶液定容的供試品溶液）。

2.2.3 空白輔料干擾。取處方量的空白輔料適量，制備空白片，取6片照“2.3.1”項(xiàng)下方法在4種溶出介質(zhì)中于30min取樣、掃描并在229nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。結(jié)果空白輔料在4種溶出介質(zhì)中229nm波長(zhǎng)處吸光值均小于0.002，表明空白輔料對(duì)溶出度測(cè)定基本無(wú)影響。

圖1 紫外吸收光譜圖A.空白溶液；B.對(duì)照品溶液；C.供試品溶液（pH 1.0鹽酸溶液）Fig 1 UV absorption spectrumsA.blank solution；B.solution control；C.test sample（pH 1.0HCl）

2.2.4 線(xiàn)性關(guān)系考察。取對(duì)照品貯備液10ml置于50ml量瓶中，用pH 1.0鹽酸溶液定容，搖勻；然后分別吸取1、3、5、7、10ml至50ml量瓶中，用pH 1.0鹽酸溶液定容，作為試驗(yàn)溶液；用紫外分光光度計(jì)在229nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定試驗(yàn)溶液的吸光度（A）。同法考察其他3種溶出介質(zhì)中阿戈美拉汀的線(xiàn)性關(guān)系。結(jié)果表明阿戈美拉汀在4種溶出介質(zhì)中線(xiàn)性關(guān)系均良好，A與質(zhì)量濃度（c）的回歸方程分別為：在pH 1.0鹽酸溶液中c＝0.2575A－0.0022（r＝0.9999）；在水中c＝0.2567A－0.0017（r＝0.9999）；在pH 4.5醋酸-醋酸鈉緩沖液中c＝0.253A－0.0018（r＝0.9999）；在pH 6.8磷酸鹽緩沖液中c＝0.2545A－0.0003（r＝0.9999）。阿戈美拉汀檢測(cè)質(zhì)量濃度線(xiàn)性范圍均為0.4～4μg/ml。

2.2.5 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)。取阿戈美拉汀對(duì)照品溶液適量（約2μg/ml），在室溫分別于制備后0、1、2、4、6、8、12h測(cè)定吸光度，結(jié)果表明4種溶出介質(zhì)中吸光度RSD值均小于0.2%，表明對(duì)照品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.6 回收率試驗(yàn)。分別精密稱(chēng)取阿戈美拉汀對(duì)照品17.00、21.25、25.50mg，與一定量空白輔料一起混勻，備用；然后分別精密稱(chēng)取上述混合物適量各3份，置于100ml量瓶中，各加4種溶出介質(zhì)溶解、定容、搖勻、濾過(guò)。取上述溶液2ml，置于20ml量瓶中，用相應(yīng)溶出介質(zhì)定容，在229nm波長(zhǎng)下測(cè)其吸光度，計(jì)算回收率。結(jié)果，4種溶出介質(zhì)中的平均回收率均在98%～99%，RSD在0.5%～0.7%（n＝9）。表明在所選擇的溶出條件及測(cè)定條件下，方法的準(zhǔn)確度較好，輔料不影響測(cè)定，詳見(jiàn)表1。

表1 阿戈美拉汀在4種溶出介質(zhì)中的回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab 1 Results of recovery rate test of agomelatine in 4dissolution mediums（n＝9）

2.3 溶出曲線(xiàn)測(cè)定

2.3.1 參比制劑和自研制劑在不同溶出介質(zhì)中的溶出曲線(xiàn)。根據(jù)文獻(xiàn)[7]，按槳法[6]，于5、10、15、30、45、60、90、120、240、360min（當(dāng)連續(xù)兩點(diǎn)溶出率均達(dá)90%、且差值小于5%時(shí)，試驗(yàn)則可提前結(jié)束）分別取樣，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液；另取對(duì)照品溶液測(cè)定，記錄吸光度值。按外標(biāo)法以吸光度值分別計(jì)算出每片中阿戈美拉汀在不同時(shí)間點(diǎn)的溶出度并計(jì)算累積溶出量。結(jié)果，2種制劑中阿戈美拉汀在不同溶出介質(zhì)中的溶出曲線(xiàn)（5～90min）見(jiàn)圖2。

圖2 2種制劑在不同溶出介質(zhì)中的溶出曲線(xiàn)A.pH 1.0鹽酸溶液；B.pH 4.5醋酸-醋酸鈉緩沖液；C.pH 6.8磷酸鹽緩沖液；D.水Fig 2 Dissolution curves of reference preparation and selfprepared preparation in different dissolution mediumsA.pH 1.0hydrochloric acid；B.pH 4.5acetic acid and sodium acetate buffer solution；C.pH 6.8phosphate buffer solution；D.water

2.3.2 參比制劑與自研制劑溶出曲線(xiàn)的評(píng)價(jià)。本文采用美國(guó)FDA有關(guān)口服固體藥物生物利用度和生物等效性研究指南中推薦使用的相似因子（f2）法[8-9]，評(píng)價(jià)參比制劑與自研制劑的溶出度差異，計(jì)算公式如下：

其中，Rt為t時(shí)間參比制劑平均累積溶出量；Tt為t時(shí)間自研制劑平均累積溶出量；n為取樣點(diǎn)個(gè)數(shù)（n＝3～5，且Rt＞85%的點(diǎn)不超過(guò)1個(gè)）。若50≤f2＜100，則表示自研制劑與參比制劑溶出行為相似。結(jié)果，阿戈美拉汀在pH 1.0鹽酸溶液、pH 4.5醋酸-醋酸鈉緩沖液、pH 6.8磷酸鹽緩沖液和水中f2分別為68、66、66和60（n＝4），表明自研制劑和參比制劑的體外溶出行為具有相似性。

3 討論

（1）根據(jù)2010年版《中國(guó)藥典》（二部）附錄ⅣA紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定法的規(guī)定[6]，一般供試品溶液的吸光度讀數(shù)以在0.3～0.7為宜。由于阿戈美拉汀在229nm波長(zhǎng)處吸光度值較大，因此采用將溶出液先進(jìn)行稀釋然后再測(cè)定的方法來(lái)滿(mǎn)足吸光度值在0.3～0.7的要求。經(jīng)過(guò)對(duì)其溶出度方法學(xué)考察研究表明，本方法能夠快速有效地測(cè)定阿戈美拉汀片劑的溶出度。

（2）自研制劑和參比制劑在不同pH值的溶出介質(zhì)中溶出曲線(xiàn)的f2均大于50，表明自研制劑和參比制劑的體外溶出行為具有相似性，但二者的體內(nèi)生物利用度和生物等效性是否一致還有待進(jìn)一步考察。

（3）測(cè)定溶出量的常用方法有紫外分光光度法、高效液相色譜法等。本文建立的紫外分光光度法與高效液相色譜法相比，在確保準(zhǔn)確度的前提下具有檢測(cè)方便、快速、有機(jī)溶劑使用少、更加環(huán)保等特點(diǎn)。

（4）阿戈美拉汀有多種晶型（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ），各種晶型的溶解度亦不相同，其中4種晶型的溶解度在37℃下為Ⅳ＞Ⅲ＞Ⅰ＞Ⅱ；隨著溫度的升高，各晶型的溶解度均變大。本文中為了規(guī)避相關(guān)晶型專(zhuān)利，因此采用了混晶作為制備片劑的原料藥。

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