張辭海，歐陽玉祝

(吉首大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，湖南 吉首 416000)

紫外皮粉法測定倍花中單寧酸含量*

張辭海，歐陽玉祝

(吉首大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，湖南 吉首 416000)

用紫外皮粉法測定倍花中單寧酸的含量，并對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方法學(xué)考察.經(jīng)實(shí)驗(yàn)知在20℃下溶液的穩(wěn)定性較好，鉻皮粉在20 min后吸附達(dá)到完全，平均加標(biāo)回收率為98.86%，RSD為0.85，精密度和重復(fù)性實(shí)驗(yàn)的RSD分別為0.07%和0.64%.用紫外皮粉法測試倍花中單寧酸含量得到的結(jié)果與用藥典法測試得到的結(jié)果近似.

倍花;單寧;紫外;皮粉

倍花是五倍子的一種，主要活性成分為單寧酸.由于倍花中的單寧酸含量比倍子低很多［1］，開發(fā)應(yīng)用的技術(shù)難度大，導(dǎo)致倍花研究報(bào)道很少.單寧酸是一類具有生物活性的多酚類物質(zhì)，廣泛用于化工、食品、醫(yī)藥和冶金等領(lǐng)域.隨著單寧化學(xué)研究的不斷深入，單寧酸的用途不斷拓展，使得肚倍、角倍資源緊缺，用倍花資源替代倍子生產(chǎn)單寧酸已成必然.目前倍花研究報(bào)道很少，主要是研究倍花水提液制備沒食子酸［2-5］和工業(yè)單寧酸［6］.王全杰等［7］對植物單寧的測定方法進(jìn)行了綜述.植物單寧的測定方法有很多種，如皮粉法、干酪素法、滴定法、光度法等，目前對植物單寧的測定多采用藥典法(即皮粉法)［8］，皮粉法是國際上公認(rèn)的單寧酸含量測定方法，從20世紀(jì)60年代至今，原蘇聯(lián)、日本、印度和中國都采用此法作為國家標(biāo)準(zhǔn).筆者采用紫外可見光分光光度計(jì)協(xié)同皮粉吸附法測定植物倍花中的單寧酸的含量，并進(jìn)行方法學(xué)考察.

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1原料、試劑與儀器

原料與試劑:倍花，保靖縣林力科技有限公司提供，將倍花去枝用粉碎機(jī)粉碎備用;單寧酸標(biāo)準(zhǔn)品(純度≥99%，中國林科院林產(chǎn)化工研究所);鉻皮粉(中國林科院林產(chǎn)化工研究所);明膠.

儀器:UV-2450紫外-可見分光光度計(jì)(日本島津公司);SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵(鄭州市長城科工貿(mào)有限公司);HY-4調(diào)速多用振蕩器(江蘇省大地自動化儀器廠);FA2104N分析天平(上海市民橋精密科學(xué)儀器有限公司).

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1倍花溶液的浸提 稱取1.000 0 g倍花粉末于150 mL三角燒瓶中，加20 mL蒸餾水，在55℃超聲提取30 min，濾出浸提液.再加水反復(fù)提取，直到用明膠溶液滴定浸提液不產(chǎn)生沉淀為止，將浸提液合并定容于200 mL容量瓶中待用.

1.2.2實(shí)驗(yàn)原理 單寧酸溶液在276 nm處有特征峰值，鉻皮粉可以吸除單寧，分別測定樣品溶液和用鉻皮粉吸除單寧后的非單寧溶液的吸光度值.吸附前后吸光度的差值與單寧酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液的吸光度作對比，從而測定出單寧含量.

1.2.3單寧標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 按文獻(xiàn)［9］準(zhǔn)確配制單寧酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，用紫外可見分光光度計(jì)在276 nm處測定吸光度，并以吸光度為橫坐標(biāo)，以濃度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程和相關(guān)系數(shù)為

其中A為吸光度，C為標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，單位g/L.結(jié)果表明單寧酸質(zhì)量濃度在0.01～0.02 g/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好.

1.2.4倍花浸提液中單寧酸的測定 取1.2.1節(jié)中制備的倍花提取液2 mL定容到200 mL容量瓶中，測276 nm波長處的吸光度為吸附前的吸光度.取倍花提取液25 mL加入1 g鉻皮粉在振蕩器上震蕩吸附，一定時(shí)間后過濾，取2 mL濾液定容于200 mL容量瓶中，測定276 nm波長處的吸光度為吸附后的非單寧吸光度.將吸附前后吸光度的差值代入單寧酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程，計(jì)算單寧酸的含量.

2 結(jié)果與討論

2.1測定條件確定

2.1.1最大吸收波長的確定 將單寧標(biāo)準(zhǔn)品溶液和倍花浸取液樣品溶液用紫外可見分光光度計(jì)掃描，結(jié)果見圖1.圖1表明，單寧酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液和倍花浸出液的紫外光譜圖吻合，都在276 nm處出現(xiàn)特征吸收峰.因此，選擇波長276 nm處測定樣品溶液中的單寧酸含量.

2.1.2吸附穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 為了考察鉻皮粉對單寧酸吸附的穩(wěn)定性，取吸附前與吸附后的倍花提取液溶液，按1.2.4節(jié)中方法分別在20，30，40℃測定放置0，4，8，12，24 h后測定276 nm處的吸光度，結(jié)果如表1所示.由表1可知，倍花提取液吸附前后的吸光度，在20℃可放置24 h不發(fā)生變化，30℃放置12 h時(shí)吸光度減小，40℃放置4 h時(shí)吸光度開始變小.因此，倍花單寧浸提液被吸附前后的溶液，在20℃下放置是最穩(wěn)定的，可放置較長時(shí)間而不影響測量結(jié)果.

表1 吸附前后樣品的吸光度

2.1.3皮粉吸附時(shí)間考察 取倍花提取液25 mL加入1 g鉻皮粉在振蕩器上震蕩，每隔5 min取樣測276 nm處吸光度，結(jié)果如圖2所示.由圖2可知，10 min以前吸光度降低明顯，10～20 min吸光度下降緩慢，20 min后吸光度基本不變，可確定20 min皮粉可將單寧酸吸附完全.因此，選擇吸附時(shí)間為20 min較合適.

圖1 單寧標(biāo)準(zhǔn)品紫外掃描圖譜

圖2 吸附曲線

2.2倍花中單寧酸含量測定

分別用1.2.4節(jié)方法和藥典皮粉法測定倍花溶液中單寧酸的含量，平行測定5次，取平均值，計(jì)算RSD，結(jié)果如表2所示.由表2可知，用本法和藥典法測定倍花溶液中的單寧質(zhì)量濃度，5次測定的平均值分別為1.345 g/L(倍花中單寧酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)為26.9%)和1.341 g/L(倍花中單寧酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)為26.82%)，2種方法分析的結(jié)果基本一致，平行測定5次的RSD分別為0.16%和2.1%.

表2 倍花提取液中單寧酸含量測定

3 方法學(xué)考察

3.1準(zhǔn)確度分析

采用加標(biāo)回收法考察倍花中單寧酸分析結(jié)果的準(zhǔn)確性.移取40 mL倍花提取液樣品(單寧酸質(zhì)量濃度為1.345 g/L)5份，分別加入30，45，60，75，90 mg單寧標(biāo)準(zhǔn)品，用1.2.4節(jié)方法測定單寧酸，計(jì)算回收率和RSD，結(jié)果如表3所示.表3表明，平均加標(biāo)回收率為98.86%，RSD為0.85%.

表3 加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.2精密度實(shí)驗(yàn)

取2 mL倍花提取液，按1.2.4節(jié)方法，對同一份供試樣品平行測定5次，計(jì)算實(shí)驗(yàn)結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，考查方法的精密度，結(jié)果見表4.表4表明，5次實(shí)驗(yàn)所得倍花中單寧酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)平均值為26.93%，RSD為0.07%，說明此法精密度很高，分析數(shù)據(jù)可靠.

表4 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果 %

3.3重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

稱取5份1.000 0 g的倍花粉末按照1.2.1節(jié)的方法提取倍花單寧酸，按照本實(shí)驗(yàn)方法測倍花中單寧酸的含量，結(jié)果如表5所示.由表5可知，用本方法測定倍花中單寧酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)，5次測定的平均值為2 6.71%，RSD為0.64%，說明本法測定結(jié)果可靠.

表5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果 %

4 結(jié)語

用紫外鉻皮法測定倍花中單寧酸的含量，分析方法簡單快速，穩(wěn)定性和重復(fù)性好，準(zhǔn)確度和精密度高.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，吸附前后樣品在20℃下可放置24 h不發(fā)生變化，皮粉在20 min后吸附完全.本實(shí)驗(yàn)方法測得的倍花中的單寧酸的結(jié)果和用藥典法測得的結(jié)果近似，分析方法的加標(biāo)回收率為98.86%，RSD為0.85%，精密度和重復(fù)性實(shí)驗(yàn)的RSD分別為0.07%和0.64%，分析結(jié)果準(zhǔn)確、可靠.

［1］ 陳 祥，孫秀芳，毛群楷.五倍子單寧組分初步研究(簡報(bào))［J］.林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)，1983(1):40-42.

［2］ 陳茜文，王貴武.倍花浸提液水解制備沒食子酸的工藝［J］.中南林業(yè)科技大學(xué)學(xué)報(bào)，2008(5):132-135.

［3］ 黃嘉玲，張宗和，谷勝河，等.倍花提取物堿法水解制取沒食子酸的研究［J］.林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)，1997(2):23-26.

［4］ 熊國華，張 強(qiáng)，湯 偉，等.倍花水解制沒食子酸［J］.四川化工，1994(1):14-16.

［5］ 陳方平，金 淳，魏加球.倍花酸水解法制工業(yè)沒食子酸［J］.林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)，1989(1):34-40.

［6］ 周麗珠.化學(xué)法倍花制取工業(yè)單寧酸的試驗(yàn)研究［J］.林產(chǎn)化工通訊，2002(1):19-21.

［7］ 王全杰，任方萍，高 龍.植物單寧的含量測定方法［J］.西部皮革，2010(23):26-31.

［8］ 中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國藥典［M］.廣州:廣東科技出版社，2000:57.

［9］ 方艷夕，張 磊，周國梁.紫外分光光度法測定槐米炮制品中鞣質(zhì)含量［J］.中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2008(6):32-33.

［10］ GB/T 6284—2006.化工產(chǎn)品中水分含量測定的通用方法干燥減量法［S］.北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2006.

(責(zé)任編輯 向陽潔)

Determination of Tannin Content from Beihua by UV-Chrominated and Hide Powder Method

ZHANG Ci-hai，OUYANG Yu-zhu
(College of Chemistry and Chemical Engineering，Jishou University，Jishou 416000，Hunan China)

The content of tannin fromBeihuawas analyzed by UV-chrominated hide powder method.The methodology of experiment results were investigated.The stability of the solution is good at 20℃.After 20 min，tannin can be completly adsorbed by chrominated hide powder.The content of tannin fromBeihuaanalyzed by this method resembles that by pharmacopeia method.The average recovery rate of this method is 98.86%，RSD is 0.85.The RSD of precision，repeatability is 0.07%and 0.64%respectively.

Beihua;Tannin;UV;chrominated hide powder

TQ225

B

10.3969/j.issn.1007-2985.2013.02.015

1007-2985(2013)02-0068-04

2013-01-04

吉首大學(xué)校級科研項(xiàng)目資助(JDY12041)

張辭海(1984-)，男，河南洛陽人，吉首大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院碩士研究生，主要從事光譜及微量元素分析研究

歐陽玉祝(1956-)，男，湖南寧遠(yuǎn)人，吉首大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事天然產(chǎn)物化學(xué)研究;E-mail:ouyang1227@126.com.