朱劍波，邱細敏，郭思維，張 為，楊小紅，王 瓊，李 威

(湖南師范大學醫(yī)學院，湖南 長沙 410006)

奧美沙坦酯是一種強效和特異性血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑，該藥對不同程度的高血壓病人均有很好的療效，其代謝產物奧美沙坦是生理活性的藥物[1]。奧 美 沙 坦 酯(Olmesartan Medoxomi I)由日本S a n k y o(三共公 司)和 美 國Fo r e s t La b o r a t o r i e s 開發(fā)，2002年5月以商品名Benicar在美國上市，同年8月在德國獲批準并在10月初上市。多項臨床表明其降壓效果和預防靶向器官的損傷作用更為理想，該藥無論單獨使用或與其他藥物合用，均有較好的降壓效果，且耐受性良好，顯示出很好的應用前景。2008年，奧美沙坦酯全球性銷售額已達到了21.57 億美元，同比上一年增長了14.01%，是一個快速增長的品種。其突出特點是半衰期較長，一天服用一次，即可以在一天內有效控制血壓，因此服用較為方便。同時奧美沙坦酯與其他的血管緊張素II 受體拮抗劑類藥物相比，該藥的劑量小、起效快，服用方便，降壓作用更強而持久，不良反應的發(fā)生率低(小于1%)，具有明顯的優(yōu)點[2-4]。本課題采用新的合成方法（正在申請專利）獲得的新的仿制藥奧美沙坦酯避開了日本三共公司的發(fā)明專利，將其國產化，必將大大降低廣大患者的治療成本。

新的合成工藝帶來了新的中間產物，該法引入了6 個中間雜質，其結構如圖1。為有效控制該奧美沙坦酯在生產及貯存中產生的有關物質,建立了奧美沙坦酯有關物質及含量測定的高效液相色譜法。試驗證明：本法使各有關物質與主藥均能完全分離,方法專屬性強,重復性好,靈敏度高,可用于生產質量控制[5-7]。

圖1 奧美沙坦酯及其相關物質的結構式

1 儀器與材料

島津高效液相色譜儀；紫外檢測器；超聲清洗器；電子分析天平XP205（梅特勒公司）；酸度計PHS-3C(上海鵬順科技有限公司)。

奧美沙坦酯化學對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，含量為99.5%）；乙腈（色譜純）；其他試劑為分析純；水為重蒸餾水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：ODS-C8 柱(4 .6mm×150 mm，5μm）,紫外檢測器，檢測波長：256nm,檢測器溫度：25℃，流動相A；磷酸緩沖鹽 (1.36 g 磷酸二氫鉀，加人1000mL 水溶解，加入2mL 三乙胺，用磷酸緩沖液調節(jié)PH 至2.8)流動相B；乙腈，按表1 進行梯度洗脫。

表1 梯度洗脫條件

2.2 專屬性實驗

分別精密稱取奧美沙坦酯及其相關物質適量，加80%乙腈水溶液溶解并稀釋制成1.0 mg/mL的混合溶液，精密進樣10ul，記錄色譜圖，如圖1.其中3 為主成分峰。

圖1 奧美沙坦酯及其相關物質的分離色譜圖

2.3 線性

精密稱取奧美沙坦酯標準品適量，加80%乙腈 水 逐 級 稀 釋 配 成0.2μg/mL，2μg/mL，20μg/mL,0.1mg/mL,0.2mg/mL,0.5mg/mL的 溶 液，分 別 進 樣10μL，記錄色譜圖。結果如圖2.以奧美沙坦酯原料濃度為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標，繪制標準曲線，其回歸方程為：y=21535x+49822；R2=0.9997。結果表明，奧美沙坦酯原料在濃度為0.2μg/ml～500μg/mL的范圍內具有良好的線性關系。

圖2 奧美沙坦酯的標準曲線

2.4 降解產物的分離

取奧美沙坦酯對照品經(jīng)降解所得產物進行HPLC 分離檢測(圖3)。結果表明經(jīng)酸、堿、氧化、高溫、高濕和光照破壞所產生的有關物質與主藥峰達

到完全分離,本法專屬性良好，如圖3。

圖3 降解產物分解圖譜

2.5 檢測線的確定

取奧美沙坦酯對照溶液，加80%乙腈水逐級稀釋，按信噪比3：1 時的進樣量為最低檢測線，結果奧美沙坦酯的檢測線為0.4ng

2.6 精密度試驗

精密配置奧美沙坦酯溶液，精密連續(xù)進樣6次，計算主峰面積的RSD。結果峰面積的RSD 為0.3%。

2.7 重復性試驗

取同一批號樣品6 份，在同一條件下，分別配置成同一濃度溶液，分別進樣10μL，記錄色譜圖。結果表明實驗的重復性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗

取同一批號樣品適量，加80%乙腈水溶解，配制成為0.2mg/mL，分別放置0,2,4,6,8 小時后，精密進樣10μL，記錄色譜圖，結果主峰面積的RSD 為0.22%。

2.9 耐用性試驗

分別考察流動相pH 值變化±0.2、柱溫變化±5℃、檢測波長變化±5nm、流速相對值變化±20%以及采用三根不同批號的色譜柱進行測定時，儀器色譜行為的變化，每個條件下各測試兩次。結果表明各雜質峰的拖尾因子不得大于2.0，雜質峰與其他成分峰必須達到基線分離，各條件之間雜質含量絕對值在±0.1%以內。并分別在各條件下，平行配置6 份溶液，分別進樣。結果表明各條件下的雜質含量數(shù)據(jù)（n=6）的RSD 不大于2.0%。

2.10 有關物質的測定

2.10.1 質量分數(shù)1%主成分自身對照法

取奧美沙坦酯適量，加乙腈超聲溶解并稀釋制1 mg/mL的溶液，作為供試品溶液；精密量取1 mL，置100 mL 量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液；精密量取對照溶液10 L，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，調節(jié)儀器靈敏度，使主峰的峰高為滿量程的25%；再精密量取供試品溶液10 L，注人液相色譜儀，記錄色譜圖，如有雜質峰，除空白溶劑峰外，量取雜質峰面積，與對照溶液主峰面積比較并計算（三批樣品平行進行）。結果見表2。

表2 奧美沙坦酯中有關物質的含量

2.10.2 奧美沙坦酯含量測定

取奧美沙坦酯原料藥適量,加80%乙腈水制成每1 mL中含1mg的溶液,作為供試品溶液;另取奧美沙坦酯對照品適量,加80%乙腈水制成每1 mL中含1 mg的溶液,作為對照品溶液;取溶液10μL注入液相色譜儀,記錄色譜圖按外標法計算含量。結果見表3。

表三批樣品含量測定結果

3 討論

在選擇色譜條件時，首先參照了文獻[1]，在此基礎上再進行的一系列的改變。第一，取混合對照溶液,用紫外檢測器檢測并分析紫外光譜圖。結果顯現(xiàn)奧美沙坦酯與其相關物質均在波長256 nm 處有較大吸收,同時在該波長下,梯度洗脫時空白干擾小,因此選擇波長256 nm 作為檢測波長。第二，選擇流動相梯度洗脫條件時,在文獻參考的基礎上進行了一系列的摸索。第三，在有關物質檢測方面，目前一般文獻都是用的C18 柱，C8 柱用的較少，本課題通過比較C18和C8 柱發(fā)現(xiàn)，在能有效的分離的情況下用C8 柱可以大大縮短分析時間，提高分析效率，并且基線更平穩(wěn)。除此之外，在方法學考察方面，本課題對其方法進行了耐用性試驗，更完善的說明該方法的可靠性和實用性。

[1]潘紅娟,吳泰志,張福利,俞雄.奧美沙坦酯及其相關物質的分離與測定[J].藥物分析雜志2008,28(11) ：1883-1887.

[2]王桂云,馬超,奧美沙坦酯中有關物質的HPLC 測定[J],中國醫(yī)藥雜志2009，40(3)：205-206.

[3]翁水旺.反相高效液相色譜測定奧美沙坦酯的有關物質[J].藥物分析雜志2006,26(5)：686-688.

[4]韓健，劉靜，奧美沙坦酯[J].中 國新藥雜志，2007，21(5)：1815-1816.

[5]徐彩麗,袁華,喻宗沅.奧美沙坦酯的研究進展[J].化學與生物工程2005，4(5)：7-8.

[6]WEN Shui-wang.RP-HPI C determination of related substances in ohnesartan medoxomil.Chin J A Pharm Anal,2006,(26)5,686～688.

[7]徐麗佳,陳曉輝,王峰,宮平,于治國,畢開順鹽酸艾咪朵爾相關物質的分離與含量測定 [J].沈陽藥科大學學報,2010,27(6)：470-473